12-Guia practica para el diag. – Dr. Paulo Cortes

Guía práctica para
la detección de
Campylobacter
en heces
Dr. Esp
Esp.. Paulo Cortes
Hospital Pediátrico del Niño Jesús
[email protected]
La diarrea es el síntoma común de una infección gastrointestinal
causada por un amplio rango de patógenos, incluidos los virus,
las bacterias y los protozoos.
La gran mayoría de estos patógenos comparten el modo en que
son transmitidos: de la materia fecal de una persona a la boca
de la otra.
Cada año un estimado de 1,7 billones de casos de diarreas
ocurren en el mundo en niños menores de 5 años (2,2 millones
de muertes). EEUU 211-375 millones de casos, 1,8 millones de
hospitalizaciones y 3100 muertes.
Incremento alarmante de Campylobacter en EUA y Europa
especialmente en niños
Humphries R, Clin Microbiol Rev
Rev,, January 2015.
Kaakoush N y col, Clin Microbiol Rev
Rev,, June 2015.
La diarrea se define como la presencia de heces de menor
consistencia o acuosas, por lo menos tres veces por día, o las
deposiciones con una frecuencia mayor que la normal para un
individuo.
Aunque la mayoría de los episodios de la diarrea de la niñez son
leves, los casos agudos pueden llevar a la pérdida de fluidos y a
la deshidratación significativa, que pueden dar lugar a muerte o
a otras consecuencias severas si los líquidos no se substituyen
desde los primeros episodios de diarrea.
La diarrea es la segunda causa de muertes en niños
Campylobacter se presenta con gastroenteritis inflamatoria
Humphries R, Clin Microbiol Rev
Rev,, January 2015.
HOSPITAL PEDIATRICO DEL NIÑO JESUS
AÑO 2015 (ENERO-JUNIO)
COPROCULTIVOS PROCESADOS: 262
INDICE DE POSITIVIDAD: 58%
Campylobacter sp.
(n: 47)
18%
Escherichia coli
O157 (n:1)
Salmonella sp.
(n: 4)
Yersinia enterocolitica
(n: 1)
38%
Shigella sp.
(n: 99)
Campylobacter spp.
Reino: bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Epsilon
Orden: Campylobacterales
Familia: Campylobacteraceae
Género: Campylobacter
Especies: 26
Especies provisorias: 2
Subespecies: 9 (dic 2014)
Kaakoush N y col, Clin Microbiol Rev
Rev,, june 2015.
Como patógeno humano Campylobacter spp. es considerado un
“turista accidental”
Reservorio natural: aves de corral: pollos, gansos patos, mascotas, ganado:
vacuno y porcino, aves salvajes y agua. Similar a EHEC
Kaakoush N y col, Clin Microbiol Rev
Rev,, June 2015.
Campylobacter es la principal causa de diarrea bacteriana
en el mundo
(Europa y EUA vs países en desarrollo)
La incidencia se incrementó exponencialmente en la última década
del siglo 20
Detección y diagnóstico????
Campylobacter spp
spp..
Afecta a humanos (1-4 años y 15-24 años) y animales
Zoonosis de distribución mundial
En Latinoamérica endémica
No totalmente dilucidados los aspectos epidemiológicos
Es comensal de animales de explotación zootécnica
Campylobacter spp.: epidemiologia
Janssen R y col, Clin Microb Reviews
Reviews,
, july 2008.
La incidencia real se calcula que es de 8 a 30 veces mayor
(400–
(400
–500 millones de casos/año)
Janssen R y col, Clin Microb Reviews, july 2008.
Ciclo de vida de Campylobacter
70%
En el 3030-50% de los casos se desconoce la fuente
Young KT y col, Nature Reviews
Reviews,
, sept 2007
Kaakoush N y col, Clin Microbiol Rev
Rev,
, june 2015
Cambios recientes en la epidemiologia
C. jejuni
jejuni*
*
prevalece sobre C. coli
coli*
*
(Sintomatologia indistinguible)
Especies de
Campylobacter
emergentes
C.
C.
C.
C.
concisus (H: 0,03
ureolyticus
upsaliensis*
upsaliensis
*
lari*
lari
*
al 1,92%)
* termófilas
Kaakoush N y col, Clin Microbiol Rev
Rev,, june 2015.
Fisiopatogenia de la infección por Campylobacter
Humanos expuestos por la vía oral
Pasaje por ambiente ácido del estómago elimina gran %
de la ingesta (capacidad buffer del alimento)
Células sobreviven adhieren a células intestinales o
al mucus y comienzan a replicarse
Países en desarrollo 15% niños portadores
Países desarrollados 0,7% adultos portadores
Campylobacter gran capacidad infectiva (500(500-800 UFC)
Luego de la colonización la enfermedad clínica puede
ocurrir
Fisiopatogenia de la infección por Campylobacter
Basado en los síndromes clínicos: 2 mecanismos:
1- adhesión de Campylobacter al intestino y producción
de toxinas
DIARREA SECRETORIA
2- invasión bacteriana y replicación dentro de la mucosa
intestinal
DIARREA INFLAMATORIA Sanguinolenta
EN INMUNOCOMPETENTES ESTA RESTRINGUIDA AL INTESTINO
Pocos casos reportados de bacteriemia (1,5–
(1,5–8%/1000///
2,9/1.000.000)
Migración linfática
Fisiopatogenia de la infección por Campylobacter
La enfermedad se caracteriza por:
Diarrea aguda con dolor abdominal intenso
Período de incubación 11-7 días (media de 3)
Diarrea en 1/3 se acompaña de sangre
PMN indica intenso daño intestinal
Campylobacter se sigue detectando por varias semanas
Nauseas
En el 30% de los pacientes comienza no con diarrea sino
con síntomas similares a al gripe
Autolimitada: ATBs disminuyen la eliminación bacteriana
Si son administrados de manera muy precoz si se han
observado beneficios
Ante la recurrencia o sospecha de enfermedad sistémica
el tratamiento es indicado
Secuelas de la infección por Campylobacter
Aunque
autolimitada
SÍNDROME DE
GUILLEN BARRE
(Desorden neurológico
autoinmune: 0,07%)
Flacidez en extremidades hasta parálisis completa con
insuficiencia respiratoria
INCIDENCIA ANUAL: 1,21,2-2,3/100.000 personas
Mortalidad 22-3% en países desarrollados
La recuperación es total entre los 6 y 12 meses
Síndrome de Miller Fisher: variante, nervios que
gobiernan el movimiento ocular
ENFERMEDAD CELÍACA???
Kaakoush N y col, Clin Microbiol Rev
Rev,, june 2015.
SÍNDROME DE GUILLEN BARRE
Patogénesis
Guerry P y col, Trends in Microbiology
Microbiology,, 2008
Diagnóstico:
directo o
coprocultivo
No existe un método estándar de oro ni método común para aislamiento
Diagnóstico::
Diagnóstico
*Heces recolectadas en el período agudo de la enfermedad
en frasco estéril
*Hisopados rectales menor sensibilidad
*Utilizar medios de transporte (Cary Blair) de ser necesario
(a 4 C no conserva Shigella spp
spp..)
*Procesar dentro de las 2 horas de la evacuación
priorizando áreas de pus y sangre contienen mayores
cantidades de enteropatogenos
*Gram sin utilidad salvo para Campylobacter spp
spp..
*Mínimamente debe buscarse
buscarse:: Shigella
Shigella,, Salmonella, STEC y
Campylobacter spp
spp..
*Selenito en reconsideración
*Agua peptonada recomendada
Humphries R, Clin Microbiol Rev
Rev,, January 2015.
FUCSINA
MEDIOS
SÓLIDOS
CARY BLAIR
Fucsina diluída (1000X)
Diagnóstico en materia fecal
Con sangre
Medio selectivo*
Sin sangre
Sin enriquecimiento
Sin medio selectivo
CULTIVO
Con enriquecimiento
Protocolo Cape Town
Caldo 48 hs
*Dada la variabilidad en susceptibilidades antibióticas de las diferentes
especies estos medios son efectivos sólo para algunas especies
SUSPENSIÓN DE MF
Protocolo
Cape Town
Filtros de celulosa
con poro de 0,450,450,65 micras
AGAR SANGRE
37 C
ATMÓSFERAS DE
INCUBACIÓN
MEZCLA DE GASES:
85% N2 - 10% CO2 - 5% 02
COMERCIALES:
5-12% CO2 - 5-10% O2
JARRA CON VELA:
2-4% CO2 - 17
17-19% O2
FBP NECESARIO
42 C
Atmósfera
microaerófila tipo
casero
50 ml ácido
cítrico 24%
(240 grs
grs/1000mL
/1000mL agua destilada)
10 gramos de
bicarbonato de
sodio
MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO DE SKIRROW
MODIFICADO
AGAR BRUCELLA
ATB: VANCOMICINA, TMS,
COLISTINA Y CEFALOTINA
FBP: SULFATO FERROSO,
METABISULFITO DE SODIO,
PIRUVATO DE SODIO
SANGRE
CHARCOAL
CEFOPERAZONE
DEOXYCHOLATE AGAR
(CCDA)
MODIFICADO POR
PRESTON (OXOID)
CEFOPERAZONA Y
ANFOTERICINA B
Sulfato ferroso
Piruvato de sodio
Movilidad y Gram
Del tubo de Cary Blair , repicar
a placas selectivas e incubar a
42 grados en microearofilia
(no útil la jarra con vela), 48 hs
Cortes PR y col, Rev Argent Microb
Microb,, 2008;40, 171
MÉTODO DE FILTRACIÓN
Cortes PR y col, Rev Argent Microb
Microb,, 2008;40, 171
Cortes PR y col, Rev Argent Microb
Microb,, 2008;40, 171
Cortes PR y col, Rev Argent Microb
Microb,, 2008;40, 171
Cortes PR y col, Rev Argent Microb
Microb,, 2008;40, 171
Colonia sospechosa
Identificación presuntiva
FRESCO ENTRE PORTA Y CUBRE (400X y 1000x)
Retirar cubre - fucsina (FCC)
Permite descartar lo
que no es Campylobacter
Campylobacter coli
Indoxil acetato (+)
Oxidasa (+)
Hipurato de sodio ((-)
Campylobacter jejuni
Indoxil acetato (+)
Oxidasa (+)
Hipurato de sodio (+)
ERI
TET
NIT
GEN
CIP
CLSI M45 A2: CIPROFLOXACINA Y ERITROMICINA HALOS 6 mm
Campylobacter spp
spp..: distribución por mes (2005/2010)
n= 506
2
0
0
6
2
0
0
7
2
0
0
8
2
0
0
9
2
0
1
0
Muchas
gracias