UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS ZONA XALAPA PROGRAMA EDUCATIVO: INGENIERIA AMBIENTAL “MACROFAUNA EDÁFICA COMO BIOINDICADORES ASOCIADOS A LOS PARAMETROS FÍSICOS Y QUÍMICOS DEL SUELO CONTAMINADO POR HIDROCARBUROS EN POZA RICA, VERACRUZ” TESIS QUE PARA ACREDITAR LA EXPERIENCIA EDUCATIVA: EXPERIENCIA RECEPCIONAL QUE PRESENTA: DIANA BELÉN HERVER HERNÁNDEZ DIRECTOR: DR. BENITO HERNÁNDEZ CASTELLANOS CODIRECTOR: DR. JOSE ANTONIO GARCÍA PÉREZ XALAPA, VER. 2014 ÍNDICE INDICE DE FIGURAS ....................................................................................................................... 4 INDICE DE TABLAS ........................................................................................................................ 5 RESUMEN.......................................................................................................................................... 6 CAPÍTULO I....................................................................................................................................... 8 INTRODUCCIÓN .............................................................................................................................. 8 1.1. La Industria Petrolera y su impacto sobre el suelo. ............................................................. 9 1.2. Macrofauna edáfica como bioindicares de contaminación ................................................. 9 1.3 Tesis ........................................................................................................................................ 11 CAPITULO II ................................................................................................................................... 12 ANTECEDENTES ............................................................................................................................ 12 2.1. El suelo .............................................................................................................................. 13 2.2. Contaminación del suelo. .................................................................................................. 14 2.3. Hidrocarburos aromáticos policíclicos .............................................................................. 15 2.4. Nuevas Técnicas: Bioindicadores ..................................................................................... 17 2.5. Invertebrados como bioindicadores................................................................................... 18 2.5.1. Colémbolos................................................................................................................ 20 2.5.2. Isópodos .................................................................................................................... 21 2.5.3. Artrópodos................................................................................................................. 22 2.5.4. Termitas..................................................................................................................... 22 2.5.5. Hormigas ................................................................................................................... 23 2.5.6. Coleópteros y Dípteros .............................................................................................. 23 2.5.7. Diplópodos ................................................................................................................ 23 2.6. Ventajas del uso de bioindicadores ................................................................................... 24 CAPITULO III .................................................................................................................................. 25 METODOLOGÍA ............................................................................................................................. 25 3.1. Zona de muestreo .............................................................................................................. 26 3.2. Suelo de la zona de muestro .............................................................................................. 27 3.3. Muestreo de la macrofauna edáfica ................................................................................... 27 3.4. Análisis de información .................................................................................................... 28 3.5. Análisis de suelo................................................................................................................ 29 3.5.1. Textura: ..................................................................................................................... 29 3.5.2. PH:............................................................................................................................. 30 3.5.3. Materia Orgánica: ...................................................................................................... 31 3.5.4. Nitrógeno (método Micro-Kjeldahl): ........................................................................ 33 3.5.5. Fosforo Extraíble (Método Olsen): ........................................................................... 34 3.5.6. Cationes Intercambiables (Ca, Mg, K, y Na): ........................................................... 36 3.6. Hipótesis ............................................................................................................................ 39 3.7. Objetivos ........................................................................................................................... 39 3.7.1. Objetivo general ........................................................................................................ 39 3.7.2. Objetivos específicos................................................................................................. 39 CAPITULO IV .................................................................................................................................. 40 RESULTADOS ................................................................................................................................. 40 4.1. Abundancia y Biomasa de la Macrofauna edáfica ............................................................ 41 4.2. Riqueza de Taxa ................................................................................................................ 44 4.3. Parámetros físicos y químicos del suelo............................................................................ 45 4.4. Caracterización de los Hidrocarburos en la zona de estudio ............................................. 46 4.5. Correlación de los diferentes parámetros analizados ........................................................ 47 CAPITULO V ................................................................................................................................... 49 DISCUSION GENERAL .................................................................................................................. 49 5.1. Discusión ........................................................................................................................... 50 5.2. Conclusión......................................................................................................................... 52 5.3. Glosario ............................................................................................................................. 53 5.4. Referencias ........................................................................................................................ 57 3 INDICE DE FIGURAS CAPITULO II Figura 1: Algunos de los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAPs) más dañinos para la salud humana (USEPA, 1987) .......................................................................................... 16 CAPITULO III Figura 2. Vista aérea de los sitios de muestro del campo petrolero Miguel Alemán ........... 26 Figura 3: Monolitos (25 x 25 x 30 cm) realizados en la zona de estudio del Campo Petrolero Miguel Alemán ..................................................................................................... 27 Figura 4: Triangulo de texturas de U.S.D.A. para el análisis granulométrico de los suelos.29 CAPITULO IV Figura 5. Abundancia total de la macrofauna edáfica (invertebrados) en el campo petrolero Miguel Alemán, S = suelo, las barras indican el error estándar. .......................................... 42 Figura 6. Biomasa total de la macrofauna edáfica (invertebrados) en el campo petrolero Miguel Alemán, S = suelo, las barras indican el error estándar. .......................................... 42 Figura 7. Riqueza de taxa de la macrofauna edáfica en el campo petrolero Miguel Alemán. .............................................................................................................................................. 45 INDICE DE TABLAS CAPITULO III Tabla 1. Ubicación geográfica de la zona de estudio. .......................................................... 27 Tabla 2. Clasificación del suelo según su pH. ...................................................................... 31 Tabla 3. Valores de referencia para la clasificación de la Materia Orgánica en suelos. ...... 32 Tabla 4. Valores de referencia para la clasificación del Nitrógeno inorgánico en suelos. ... 34 Tabla 5. Preparación de la curva de calibración de fosforo.................................................. 35 Tabla 6. Interpretación de P en mg/kg.................................................................................. 36 CAPITULO IV Tabla 7. Organismos dela macrofauna del suelo (invertebrados) encontrados en la zona de estudio del campo petrolero Miguel Alemán. ...................................................................... 41 Tabla 8. Abundancia de las diferentes taxa encontradas en el campo petrolero Miguel Alemán ................................................................................................................................. 43 Tabla 9. Biomasa de las diferentes taxas encontradas en el campo petrolero Miguel Alemán. ................................................................................................................................ 44 Tabla 10. Parámetros físicos y químicos del suelo en el campo petrolero Miguel Alemán. 46 Tabla 11. Hidrocarburos en el suelo en el campo petrolero Miguel Alemán. ...................... 47 Tabla 12. Correlación de las 24 variables analizadas ........................................................... 48 5 RESUMEN Por su impacto en la economía mundial, la industria petrolera es de las más importantes. Las actividades que realizan como la exploración, extracción, traslado y refinación han afectado de manera negativa a los ecosistemas naturales contaminándolos y reduciendo su calidad, principalmente estos efectos negativos son causados por los derrames de petróleo crudo por el resultado de la ruptura de oleoductos. En consecuencia, se han reducido los servicios que proporcionan el suelo y los cuerpos de agua. En la actualidad existen diferentes tecnologías para la remediación de sitios contaminados las cuáles se han clasificado en físicas, químicas y biológicas, sin embargo cabe señalar que las dos primeras resultan ser muy costosas, por lo que el uso de nuevas tecnologías de menor costo para la remediación de los sitios contaminados es necesario. De igual manera, existen diferentes mecanismos para identificar si un suelo está contaminado, principalmente se realiza mediante la toma directa de muestras y su posterior análisis en el laboratorio de parámetros físicos y químicos, y mediante la comparación de las concentraciones del agente externo o contaminante con los valores que marca la Norma oficial o internacional, se determina si está contaminado o no. Sin embargo es necesario conocer el efecto que esta contaminación ejerce sobre los organismos del suelo, para determinar si efectivamente se puede considerar o no como contaminado. Recientemente se han realizado estudios con organismos utilizados como bioindicadores de contaminación del suelo como en el caso de organismos de la macrofauna edáfica tales como las lombrices de tierra y más actualmente ácaros y colémbolos, siendo estos dos últimos utilizados más para la identificación de metales pesados Por lo anterior, este estudio tuvo como finalidad la identificación de organismos de la macrofauna edáfica con potencial para ser utilizados como organismos bioindicadores de contaminación del suelo por hidrocarburos. Por la importancia que representan las lombrices en el ecosistema del suelo, estos organismos han sido estudiados por separado por lo que no se incluyen en este trabajo de investigación. Los resultados demostraron que de las 20 taxas encontradas, 3 (Collembola, Isopoda y Thysanura) solo fueron localizadas en suelos no contaminados, también siendo estas las de mayor biomasa demostrando que estos organismos más pesados son sensibles a la presencia del hidrocarburos. 6 Con base en los resultados obtenidos, los organismos del suelo que no fueron sensibles a la contaminación por hidrocarburos podrían tener potencial para la remediación de suelos contaminados por hidrocarburos, por lo que se sugiere la realización de estudios encaminados a utilizar a dichos organismos en la remoción de estos contaminantes en climas tropicales. 7 CAPÍTULO I INTRODUCCIÓN 8 1. INTRODUCCIÓN 1.1.La Industria Petrolera y su impacto sobre el suelo. La industria petrolera es de suma importancia ya que tiene un impacto decisivo en la economía mundial. Petróleos Mexicanos es la mayor empresa de México, así como una de las más grande de América Latina, es de las pocas empresas petroleras del mundo que desarrolla toda la cadena productiva de la industria, desde la exploración, hasta la distribución y comercialización de productos finales, incluyendo la petroquímica; durante 2012, sus ingresos totales ascendieron a un billón 647 mil millones de pesos (PEMEX, 2013). La venta de crudos y derivados refinados figura como la actividad más ventajosa para la economía nacional (Vela-Martínez, 2007). En el sureste de México son frecuentes los derrames de petróleo crudo principalmente como resultado de la ruptura de oleoductos y desbordamiento de las presas de las baterías de separación. En Poza Rica, Veracruz son comunes los derrames petroleros por las diferentes actividades de la paraestatal Petróleos Mexicanos (PEMEX). Siendo un riesgo para la salud humana y de los demás organismos. Cabe mencionar que tan solo en los primeros tres meses del año 2012, se registraron 15 derrames petroleros en Poza Rica, Ver. (PROFEPA, 2012) lo que nos da una idea de la magnitud del problema. En consecuencia, se ha contaminado el suelo, se han reducido los servicios ambientales que este proporciona, ocasionando afectación a la biodiversidad de organismos del suelo, así como también contaminación a los cuerpos de agua (Hernández Castellanos, 2013; Wang et al., 2010.). La contaminación ha disminuido el poder de autodepuración por procesos de regeneración biológica normales, dificulta los procesos de aireación, disminuye el rendimiento de los cultivos, poniendo en riesgo la salud humana y de los organismos. 1.2. Macrofauna edáfica como bioindicares de contaminación En la actualidad existen diferentes tecnologías para la remediación de sitios contaminados las cuáles se han clasificado en físicas, químicas y biológicas, sin embargo cabe señalar que las dos primeras resultan ser muy costosas, por citar un ejemplo en 2010, la paraestatal PEMEX por la atención a una hectárea de suelo contaminado emitió un pago de 30, 000, 9 000.00 (treinta millones de pesos), a diferencia de las biológicas estas resultan ser más rentables, compatibles con el ambiente y económicamente viables. Existen diferentes mecanismos para identificar si un suelo está contaminado, principalmente se realiza mediante la toma directa de muestras y su posterior análisis en el laboratorio de parámetros físicos y químicos, y mediante la comparación de las concentraciones del agente externo o contaminante con los valores que marca la Norma oficial o internacional, se determina si está contaminado o no. Sin embargo es necesario conocer el efecto que esta contaminación ejerce sobre los organismos del suelo, para determinar si efectivamente se puede considerar o no como contaminado. Algunos de los principales organismos utilizados como bioindicadores de contaminación del suelo han sido las lombrices de tierra (Paoletti, 2006, 1999), Ácaros y Colémbolos (Santorufo et al., 2012), aunque estos últimos en zonas con disturbios urbanos. Otros trabajos relacionados han utilizado organismos del suelo, como es el caso de lombrices de tierra, como bioindicadores de la afectación por metales pesados. Existen pocos estudios que relacionen la capacidad de invertebrados de la macrofauna edáfica como bioindicadores en sitios contaminados por hidrocarburos. Existe una gran diversidad de organismos del suelo que podrían funcionar como bioindicadores de contaminación por hidrocarburos, pero aún no han sido explorados. La macrofauna es conformada por todos aquellos microorganismos encargados de la descomposición de la materia orgánica, los cuales dan ventilación a los suelos y fomentan la interacción entre los componentes físicos, químicos y biológicos, dan atributo a cada suelo y ayudan a disminuir los niveles de contaminación. Por esa razón es necesario conocer el grado de contaminación existente en zonas impactadas por derrames petroleros que permita ejercer acciones tendientes al control y a la remediación de dichos sitios, en los que los organismos bioindicadores de la macrofauna edáfica podrían dar alternativas de solución. La abundancia o disminución de organismos del suelo en un sitio contaminado podría ser usada como un indicador del nivel de contaminación (De Silva & Van-Gestel, 2009). Como se mencionó anteriormente, existen pocos trabajos en los cuales se evalúen el impacto de 10 los derrames petroleros sobre los organismos de suelo, principalmente sobre la macrofauna edáfica, por lo que la presencia o ausencia de estos organismos en zonas contaminadas como Poza Rica, Veracruz nos permitirá obtener información sobre la relación del contaminante y la macro fauna edáfica en estos sitio contaminados. Sin embargo, se han reducido los servicios ambientales que proporción el suelo y los cuerpos de agua. Son pocos los estudios que relacionan el efecto de la contaminación por hidrocarburos del petróleo a la macrofauna del suelo, por lo que más estudios relacionados se vuelven necesarios (Hernández-Castellanos, 2013) Poza Rica Veracruz es considerada la capital petrolera de México, es por esta razón que la contaminación causada por los hidrocarburos sobre todo los de petróleo es mucho mayor que en otras entidades de la república. 1.3 Tesis El presente trabajo pretende dar a conocer la justificación, objetivos, marco teórico y metodología de la investigación realizada y que lleva por título: Macrofauna edáfica como bioindicadores asociados a los parámetros físicos y químicos del suelo contaminado por hidrocarburos en Poza Rica, Veracruz, México y que está relacionada con la búsqueda de nuevos organismos del suelo, capaces de participar como bioindicadores de la contaminación. 11 CAPITULO II ANTECEDENTES 12 2. ANTECEDENTES 2.1. El suelo El suelo es uno de los hábitats más complejos del planeta Tierra. Es también uno de los ecosistemas más heterogéneos que existen, tiene un rol irremplazable en la biosfera; controla la productividad de las plantas y permite la degradación de la materia orgánica y los nutrientes (Pietramellara et al., 2002). El suelo brinda diversos servicios ambientales al constituir el medio donde crece la vegetación, y por lo tanto opera como una base de vida al abastecer a las especies animales de alimentos, energía renovable y materias primas para otros servicios. El suelo también funciona como filtro, regulador y transformador de diversas sustancias, con estas funciones el suelo es una fábrica de diversos componentes y procesos del ecosistema y a la vez un agente amortiguador de diversos impactos negativos al ambiente, esta capacidad se deriva de su naturaleza compleja, polifásica y dinámica, de sus propiedades físicas, químicas y biológicas (FitzPatrick, 1996). Con sus capacidades de filtro regulador y transformador, el suelo protege al medio ambiente en general, al agua y la cadena alimenticia en particular contra la contaminación. El suelo también funciona como reserva genética, esta función se relaciona directamente con la ecología, al constituir el hábitat de miles de organismos animales y vegetales adaptados para desarrollar una diversidad de funciones básicas dentro del ecosistema, como son la descomposición de residuos orgánicos, la fijación de nitrógeno atmosférico, la transformación de sustancias inorgánicas a formas asimilables para las plantas, etc. El componente biológico del suelo desempeña un papel fundamental en la complejidad y funcionalidad del ecosistema y por lo tanto el suelo constituye una reserva genética importante (Becerra, 2005). El suelo así es un hábitat que alberga una amplia gama de organismos (Moreira, et al., 2012.). Casi todos los organismos que viven en la superficie de la tierra o dentro del suelo afectan de una o de otra manera el desarrollo de los suelos (FitzPatrick, 1996). Un suelo se considera contaminado cuando las propiedades físicas, químicas y biológicas han cambiado de tal forma que pierde parte o toda capacidad para cumplir las funciones de su estado natural (Mujica & Figueroa, 1996). 13 La FAO (2007) ha definido 32 Grupos de Suelos entre los cuales se encuentran los vertisoles. Estos suelos son muy arcillosos, con alta proporción de arcillas expandibles. Es de los suelos muy oscuros, con alto contenido de materia orgánica, en general de texturas finas, que se agrietan durante los períodos de humedad deficiente y tienen una alta capacidad para contraerse y expandirse con los cambios de humedad. Son muy plásticos y pegajosos, de permeabilidad muy lenta y tienen alta capacidad de retención de agua. Tienen alta capacidad de intercambio catiónico y por ser suelos muy poco lixiviados, alta saturación en bases, de las cuales más del 80 por ciento corresponde al calcio. Algunos de los contaminantes más comunes en el suelo son los hidrocarburos de petróleo derramados o depositados durante las operaciones de extracción, refinación, transferencia y comercialización de estos productos, razón por la cual frecuentemente se encuentran suelos contaminados con petróleo, combustóleo, gasolinas, diesel y turbosina (CENAPRED, 2012). 2.2. Contaminación del suelo. La contaminación es la presencia en el ambiente de cualquier agente físico, químico o biológico o bien una combinación de varios agentes en lugares, formas y concentraciones tales que sean o puedan ser nocivos para la salud o perjudiciales para la vida vegetal o animal (Aguilar, 2009). La contaminación es uno de los problemas ambientales más importantes que afectan al planeta y se presenta cuando se produce un desequilibrio, como resultado de la adición de cualquier agente al medio ambiente, en cantidad tal, que cause efectos adversos a los organismos o materiales expuestos saturando la capacidad natural de asimilación (Enkerlin et al., 1997). Diversos ecosistemas han sido afectados por la contaminación ocasionada por las actividades de la industria petrolera, como son: la exploración, extracción, traslado y refinación, siendo los derrames de petróleo crudo la principal causa de contaminación de estos ecosistemas. Poco se sabe de la sensibilidad de los organismos del suelo a la contaminación, aunque es sabido que la contaminación por hidrocarburos reduce la macrofauna del suelo. Derrames petroleros han sido reportados como dañinos para la flora y fauna (Perez-Armendariz et al., 2010.). 14 Los hidrocarburos de petróleo son contaminantes considerables ya que su estructura química así como su complejidad, su baja solubilidad en agua y fuerte absorción en suelo hace que se quede por largos periodos en el ambiente con la probabilidad de ser expuesto a los humanos así como a la flora y la fauna (Jacques et al., 2007). Poza Rica Veracruz es considerada la capital petrolera de México, es por esta razón que la contaminación causada por los hidrocarburos sobre todo los de petróleo es mucho mayor que en otras entidades de la república. 2.3. Hidrocarburos aromáticos policíclicos En el petróleo crudo se encuentran los hidrocarburos poliaromáticos o los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs) los cuales son compuestos formados por dos o más anillos aromáticos fusionados (Haritash & Kaushik, 2009) son tóxicos y persistentes en el medio ambiente y algunos pueden persistir en el suelo por largo tiempo (Bojes & Pope, 2007). La agencia de protección al medio ambiente de los Estados Unidos (EPA) ha clasificado a 16 hidrocarburos poliaromáticos (Figura 1) como contaminantes prioritarios por el riesgo que representan al ambiente y a la salud. Entre estos 16 destaca el fenantreno, antraceno y benzo(a)pireno (BaP). El fenantreno es un compuesto de tres anillos fusionados de benceno, el antraceno con tres anillos condensados forman antraquinona cuando se oxida y cuando se reduce forma 9,10-dihidroantraceno (Eweis et al., 1999), finalmente, el benzo(a)pireno (BaP) es un compuesto de cinco anillos condensados de benceno. Los HAPs tienen solubilidad muy alta en lípidos, por lo tanto se absorben rápidamente en el tracto gastrointestinal de los seres humanos (Gibson & Subramanian, 1984). El BaP, por los efectos mutagénicos de los HAPs, es el responsable de la iniciación de tumores (Lee & Hosomi, 2001), considerado por la EPA como un probable carcinógeno humano. Los HAPs distribuidos en el suelo pueden causar daño a la salud, ya que pueden pasar a la cadena alimenticia, por lo tanto, el suelo contaminado es una fuente importante de HAPs, de gran preocupación para la salud humana (Tao et al., 2006). En general, cuanto mayor sea el número de anillos de benceno, mayor será la toxicidad de los HAPs (Cerniglia, 1992). 15 La principal preocupación de los humanos por la exposición a BaP, está relacionada con la contaminación atmosférica ocasionada por fuentes industriales y en zonas donde el suelo está contaminado con BaP (ATSDR, 1995). Figura 1: Algunos de los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAPs) más dañinos para la salud humana (USEPA, 1987) En consecuencia, se han reducido los servicios ambientales que proporciona el suelo y los cuerpos de agua. Son pocos los estudios que relacionan el efecto de la contaminación por 16 hidrocarburos del petróleo a la macrofauna del suelo, por lo que se vuelven necesarios más estudios relacionados (Hernández-Castellanos, 2013). La creciente demanda para identificar indicadores biológicos en cuanto a la contaminación del ambiente corresponde a la necesidad de encontrar una manera eficiente, barata y rápida para la formulación de juicios y escalas de evaluación según el estado de salud del ambiente (Paoletti & Bressan, 1996). Al principio este método solo era usado para identificar la calidad en cuerpos de agua. 2.4. Nuevas Técnicas: Bioindicadores En los últimos años los métodos existentes para controlar, disminuir o eliminar la contaminación del suelo pueden ser de diferente naturaleza, ya se física, química (denominados también remediación) y biológica (biorremediación). En esta última se utiliza a los organismos para degradar el contaminante del suelo. Los organismos del suelo pueden ser muy útiles para la identificación, limpieza, propiedades y monitoreo de los cambios en el medio, ya que proveen de un sistema objetivo de medición que integran los parámetros físicos, químicos y biológicos (Debus & Hund, 1997). Un bioindicador se puede definir como: “una especie o grupo de especies que reflejan el estado biótico o abiótico de un medio, representa el impacto de los cambios en el hábitat, la comunidad u otros ecosistemas, o es indicador de la diversidad de la taxa o falta de diversidad en un área (McGeoch, 1998)”. Los bioindicadores son un valor numérico derivado por la medición de la presión, estado o condiciones ambientales en un área determinada que con el paso del tiempo representa una tendencia en las condiciones del ambiente. La clave del bioindicador es que es útil, objetivo, cuantitativo y reproducible. Los tipos de bioindicadores incluyen los microbiológicos, con la flora y con fauna, en esta última entran los invertebrados del suelo. 17 Como los invertebrados son sensibles al cambio en la condiciones del suelo, se consideran factibles para ser bioindicadores en las perturbaciones del suelo (Nahmani & Lavelle, 2002). 2.5. Invertebrados como bioindicadores Anderson (1988) clasifica a los invertebrados en 3 grupos, dependiendo su tamaño y su interacción con el medio, los cuales son: 1) Microfauna: estos invertebrados miden menos de 0.1 mm, incluye principalmente a los protozoarios, nemátodos y rotíferos. 2) Mesofauna: estos invertebrados miden de 0.1mm a 2mm. 3) Macrofauna: este grupo de invertebrados consiste en las especies lo suficientemente grandes como para modificar la estructura del suelo con sus movimientos, miden más de 2 mm de ancho y son visibles a simple vista. La taxa más importante de este grupo son los isópodos, dípteros, coleópteros, diplópodos, lombrices, hormigas, artrópodos y moluscos. Otros autores como Lavelle, et all., (1997) clasifican de igual manera a los invertebrados por sus rangos de tamaño con estas mismas características. Los invertebrados participan activamente en las interacciones que se desarrollan en el suelo entre los procesos físicos, químicos y biológicos. Los suelos tienen todos los atributos de los sistemas auto-organizados (Perry, 1995) y diferentes escalas en las que operan los invertebrados y los diferentes tipos de ingeniería de ecosistemas que se desarrollan. Este completo análisis de las actividades de invertebrados muestra que ellos pueden ser los mejores posibles indicadores de la calidad del suelo. Los invertebrados son también conocidos como los ingenieros del suelo (Lavelle et al., 2006). Un ejemplo de invertebrados que son considerados como los ingenieros físicos se encuentran las hormigas, termitas y lombrices (los 3 grupos más importantes como ingenieros del suelo) por su habilidad de alterar al ambiente mediante sus actividades las cuales han sido documentadas ampliamente. Un ejemplo de estas actividades documentadas se encuentra cerca de Manaus (Brasil) en donde diversas comunidades de estos ingenieros 18 del suelo en estado natural forestado producen una gran diversidad de estructuras biogénicas las cuales proveen al suelo de favorables propiedades hidráulicas. Cuando se deforestan, estos suelos tienden a perder gran parte de esta diversidad y llegan a sufrir invasiones de otras especies que solo proporcionan un solo tipo de estructura en el suelo (Barrion et al., 1997; Chauvel et al., 1999; Barros et al., 2001). Otros experimentos realizados por Blanchart et al. (1997), y Barros et al. (2001), demuestran que el funcionamiento físico del suelo puede ser profundamente modificado en los lugares donde se altera la actividad de los invertebrados. Los invertebrados considerados como ingenieros químicos son los organismos que pueden generar efectos desproporcionados según su tamaño (efectos muy grandes para organismos pequeños) mediante la realización de alguna actividad en la cual produce sustancias químicas con hormonas o generan algún efecto fisiológico. Se tiene de ejemplo a las termitas y lombrices las cuales por medio de su saliva y mucosa producen hormonas y sustancias ricas, las cuales juegan un papel importante en cuanto a la selección y estimulación de la actividad microbiana (Lavelle et al., 2006). Se tiene más documentación sobre la actividad realizada por lombrices, en cuanto a las termitas, existen expectativas de realizar investigaciones más profundas. Lavelle et al. (2006) proponen el grupo bajo el término de ingenieros biológicos a la consecuencia de los cambios en las comunidades causadas por la actividad de los invertebrados. La interacción de las plantas de las distintas comunidades del suelo da como resultado modificaciones muy significativas en la dinámica de este. Esto suele ser una consecuencia del efecto general de los invertebrados en los ciclos de nutrición. Por ejemplo, el efecto de las hormigas producido por la selección variada de semillas y el estímulo del crecimiento son otros pequeños procesos generados por estos ingenieros biológicos mediante los invertebrados del suelo los cuales pueden afectar el ecosistema y sus sistemas. Esta abundancia relativa y ubicación natural de los invertebrados así como las actividades que realizan, contribuyen con la productividad y la gestión del suelo y los servicios del ecosistema en varias formas (Neher, 1999a,b, 2001) 19 Estudios previos demuestran el efecto de HAP‟s en poblaciones microbianas así como poblaciones de lombrices, colémbolas, larvas de díptero o comunidades de nemátodos. (Cutright & Lee, 1994; Snow-Ashbrook & Erstfeld, 1998, 1999; Frouz, 1999; Saterbak et al., 1999; Krauss et al., 2000). Estos estudios fueron examinados tanto en las comunidades microbianas (nemátodos y microartrópodos) como en las comunidades de invertebrados en combinación con la descomposición de los contaminantes del suelo expuestos a diversos rangos (5 – 37,500 ppm) de concentraciones de HAP‟s. Los invertebrados del suelo son excelentes candidatos para estudiar el efecto de la actividad humana sobre el medio ambiente (McIntyre, 2000). Adicionalmente, los invertebrados tienen gran abundancia, fáciles de identificar y responden rápido a la alteración del suelo (Nahmani & Lavelle, 2002). Existe una gran cantidad de invertebrados del suelo. De acuerdo con una reciente estimación, la variedad de fauna en el suelo representa el 23% del total de los organismos hoy en día (Decaëns et al 2006). Existe gran variedad taxa que es sensible a los cambios en el hábitat, por lo tanto es posible enfocarse en distintos grupos funcionales como consumidores primarios o predadores para el monitoreo del ecosistema. Algunos autores indican que los invertebrados que viven en los suelos que han sido alterados, tienen un cambio de comportamiento y fisiología comparada con otros invertebrados del suelo (Coiffait, 1958) por esta misma razón son considerados como buenos bioindicadores sobre la salud del suelo. 2.5.1. Colémbolos Dentro de los grupos la macrofauna que viven en el suelo, se considera de gran importancia los ácaros oribátidos y colémbolos, por su número, diversidad, abundancia de especies y actividad. Estos grupos se consideran indicadores biogeográficos y ecológicos a causa de su gran aptitud para la especiación, estenotopía, ciclo corto de vida y el poco poder de dispersión de las especies adaptadas a la vida edáfica y a diferentes tipos de suelo, y por sus hábitos alimenticios, como degradadores de la materia orgánica (Johnston, 2000; Palacios– 20 Vargas, 2003). En el caso de los cultivos agrícolas, después de una perturbación, puede ocurrir una reducción selectiva de la diversidad de la fauna del suelo sobreviviendo principalmente ácaros y colémbolos (Paoletti & Bressan, 2006; Palacios–Vargas, 2003). Los Colémbolos son los miembros más importantes en la mesofauna involucrada en el procesos de descomposición, son vulnerables a los efectos causados por la contaminación (Bengtsson & Rundgren, 1984) Greensdale en el 2007 enlista puntos favorables del porque escoger a los colémbolos como bioindicadores presentes en todo todos los ecosistemas, la abundancia y su facilidad de recolectarlos en suficientes cantidad hace accesible su análisis. También, tienen un ciclo de vida corto, haciendo que respondan rápido a los cambios del ambiente y, como están en constante contacto con el suelo, son más sensibles cuando se les aplica estrés en el ecosistema. Poca población de colémbolos en el suelo estimula al crecimiento bacteriano y de hongos, sin embargo, alta población puede afectar negativamente a la población de hongos reduciendo la humidificación del suelo (Hanlon & Anderson, 1979). Los colémbolos han sido muy útiles para el monitoreo de los procesos de rehabilitación de un sitio mediante el examen de sus tazas de recolonización en el suelo (Hutson, 1980a,b; Greenslade and Majer, 1993) Debido al gran tamaño de sus poblaciones y su alta taza de reproducción los colémbolos tienen un tiene un impacto grande en la dinamica. (Teuben and Roelofsma,1990; Hopkin, 1997) 2.5.2. Isópodos Un valioso indicador ecotoxicológico de la modificación o daño en los ecosistemas terrestres es el incremento en la abundancia de poblaciones de isópodos, debido a su importancia en las cadenas tróficas y por sus hábitos alimenticios, lo cual ha sido evaluado en sitios contaminados con residuos petroquímicos. Dichos organismos fueron utilizados como bioindicadores en una área ocupada por una refinería, encontrándose diferencias significativas en su abundancia (Faulkner & Lochmiller, 2000). Es un grupo taxonómico usado en los análisis toxicológicos, uno de los más grandes crustáceos con aproximadamente 10,000 especies, la mayoría bioindicadores marinos y 21 bioindicadores de la toxicidad del suelo (Schultz, 1982) Los isópodos terrestres son de los pocos vertebrados que ya son usados en pruebas de toxicidad del suelo y se han hecho parámetros de evaluación dependiendo de la abundancia de los individuos (Faulkner & Lochmiller, 2000), su taza de reproducción (Niemeyer et al., 2009) y su sobrevivencia (Stanek et al. 2006). 2.5.3. Artrópodos Los artrópodos terrestres de la fauna de los saprófagos son los organismos más importantes para la evaluación de los efectos de acumulación de sustancias tóxicas presentes en el suelo, que tienen contacto directo con los contaminantes presentes en el (Gräff et al., 1997; Hopkin et al., 1989). Las anélidas, en especial oligochaeta, son frecuentes en los exámenes toxicológicos. Estos invertebrados tiene contacto con una gran cantidad de contaminantes presentes en los orificios generados por los movimientos o por la ingestión del contaminante del suelo (Spadotto et al. 2004) oligochaeta son considerados uno de los organismos más importantes y representativos de la macrofauna edáfica (Kale, 1988). Los artrópodos, en especial los microartrópodos son organismos que llegan a habitar ecosistemas difíciles, por eso son de suma importancia. Pueden ser usados como bioindicadores en sitios con condiciones en rehabilitación. (Dunger, 2005). La información en cuanto a los artrópodos de un sitio que está contaminado es importante ya que esto podrá servir para poder remediar la contaminación. 2.5.4. Termitas Otros invertebrados como las termitas, son un grupo de insectos dominantes en suelos áridos o semi áridos. Como estas especies viven en comunidades de millones de individuos el efecto del suelo sobre ellas es muy considerable (Nye, 1955; Lee & Wood, 1971; Lobry de Bruyn & Conacher, 1990). Wood (1988) identifica las formas en las que las termitas modifican el suelo como lo son: la alteración física de los perfiles del suelo, cambios en la textura, cambios en su naturaleza y distribución de la materia orgánica, cambios en la distribución de las plantas así como su fertilidad y construcción de galerías subterráneas. 22 La construcción de los enormes nidos y los sistemas de galería de las termitas involucran los cambios en el suelo (Collins, 1983). Estas estructuras son construidas por las heces fecales de las termitas, saliva y partículas de suelo en varios tamaños. Esto modifica la estructura y textura de suelo. Sin embargo, como se mencionó anteriormente, es poco el estudio sobre las termitas. 2.5.5. Hormigas Las hormigas se encuentran en la mayor parte del hábitat terrestre. La mayoría son predadores, son un componente crítico en el suelo superficial y en la composición del suelo. Las hormigas, como las termitas, son insectos sociales y sus colonias tienen efectos similares pero regularmente menos espectaculares sobre el ambiente (Nye, 1995; Lobry de Bruyn & Conacher, 1990; Rogers & Lavigne, 1974). Gran cantidad de estudios demuestran los impactos positivos y negativos de las hormigas en diferentes grupos de insectos herbívoros y la relación cercana que ciertas de plantas tienen con especies particulares de hormigas. Es poco sabido la importancia de las hormigas para regular la población de otros invertebrados del suelo. 2.5.6. Coleópteros y Dípteros Los coleópteros y dípteros son de suma importancia para el suelo. Usualmente esos son los grupos con la mayor riqueza pero no siempre con la mejor abundancia o biomasa. Insectos como los escarabajos y las moscas son particularmente importantes en la degradación del estiércol y hojas, posteriormente regresan los nutrientes al suelo (Greenslade, 1985; Kalisz & Stone, 1984). 2.5.7. Diplópodos La importancia de los diplópodos en el reciclaje de nutrientes, aeración y fertilización de los suelos es frecuentemente mencionado en la literatura (Dangerfield & Telford, 1989). Debido al hábitat de los diplópodos y que son colonizadores, estos organismos pueden tener gran influencia en la deposición de contaminantes en especial metales pesados y compuestos orgánicos. 23 En otros estudios se ha observado que los diplópodos pueden funcionar como bioindicadores de contaminación en el suelo por metales. Sin embargo, el efecto de contaminantes orgánicos y mezclas de sustancias complejas sobre estos invertebrados es poco conocida (Souza & Fontanetti, 2011). 2.6. Ventajas del uso de bioindicadores Existen ventajas y desventajas de utilizar a la fauna del suelo como bioindicador a tres niveles jerárquicos distintos: un único taxón (familia o especie), combinación de taxa (órdenes o familia) y la comunidad completa (también llamado ensamble). Se sugiere que, los bioindicadores deben ser considerados como un conjunto de herramientas que difieren en su idoneidad según las características del sistema perturbado y el plan de manejo. Por tanto, se sugiere que pueden ser utilizados de forma individual o combinando de manera de realizar diagnósticos con la máxima resolución y precisión (Herrera & Cuevas, 2006). La presencial y la abundancia numérica de los invertebrados del suelo ofrece una importante información sobre la funcionalidad del ecosistema y sus servicios (SpringerVerlag, 2006) Uno de los mayores debates científicos que surge por las recientes investigaciones, es la relación entre la estructura de la biodiversidad y su proceso funcional. Varios estudios tratan la variedad de los ecosistemas del suelo superficial y diferente productividad (Watkinson & Freckleton, 1997; Hartnett & Wilson 1999; Klironomos et al., 2000; Bradford et al., 2002; Wardle, 2002; Mulder & De Zwart 2003; Bardgett et al., 2005). Los invertebrados como bioindicadores de suelo pueden responder a varias condiciones de estrés en formas severas. Estos también pueden dar respuestas claras a los cambios ambientales debido al cambio de la diversidad taxonómica y la facilidad que se tiene de monitoreo (Paoletti et al., 1990). 24 CAPITULO III METODOLOGÍA 25 3. METODOLOGIA 3.1. Zona de muestreo El campo petrolero Miguel Alemán se encuentra localizado en las coordenadas 20º 32‟ Latitud norte, 97º 27‟ Longitud oeste, en la región totonaca, su clima es cálido, con una temperatura media anual de 24,4 ºC; con lluvias abundantes en verano, su precipitación media anual es de 1,010 milímetros y se encuentra a 50 metros sobre el nivel del mar. Su tipo de vegetación es secundaria y pastizal. Las actividades preponderantes en la zona de estudio son la actividad petrolera, agricultura y ganadería. En este campo petrolero se eligieron 3 pozos (Figura 2, Tabla 1) para la realización del muestro. Figura 2. Vista aérea de los sitios de muestro del campo petrolero Miguel Alemán 26 Tabla 1. Ubicación geográfica de la zona de estudio. NO. DE POZO UBICACIÓN PETROLERO GEOGRÁFICA 48 20º 27‟25.6 NL y 97º 21‟13.6 WL 69 20º 26‟56.3 NL y 97º 21‟41.5 WL 98 20º 27‟22.6 NL y 97º20‟8.5 WL 3.2.Suelo de la zona de muestro Su suelo es de tipo vertisol, que representa grietas anchas y profundas en época de sequía (Enciclopedia de los Municipios y Delegaciones de México, 2014). Más características de los suelos vertisoles se detallan en el apartado de antecedentes. 3.3.Muestreo de la macrofauna edáfica Se eligieron tres sitios contaminados (presas de recorte de perforación) de los pozos petroleros 48, 69, 98, y tres sitios aledaños a cada pozo libres de contaminación los cuales sirvieron como control. Los pozos contaminados son pasivos ambientales (los derrames ocurrieron entre 15 y 20 años atrás). En los sitios contaminados, se realizó un transecto a lo largo de la presa y un monolito de 25 x 25 x 30 cm (Figura 3) fue excavado a los 10, 20, 30 y 40m Cada monolito será revisado y la macrofauna edáfica (organismos del suelo vistos a simple vista) será colectada de manera manual, y colocados en recipientes de plástico conteniendo alcohol al 70 % (Anderson & Ingram, 1993). Figura 3: Monolitos (25 x 25 x 30 cm) realizados en la zona de estudio del Campo Petrolero Miguel Alemán 27 En el laboratorio, los diferentes organismos serán pesados y agrupados para determinar la diversidad, abundancia y biomasa. En cada monolito, será tomado un kg de suelo para determinar en el laboratorio las características del suelo: Textura, pH, Materia orgánica (M.O.), Nitrógeno total (NT), Fósforo extraíble (P), Potasio (K), Sodio (Na), Calcio (Ca) y Magnesio (Mg). Todos los parámetros físicos y químicos mencionados se medirán con base en las técnicas incluidas en la Norma Oficial Mexicana (NOM-021-SEMARNAT, 2000), la cual está basada en la Soil Science Society of America Methods of Soil Analysis (SSSA, 1996). Adicionalmente fue tomada una muestra de suelo aproximadamente de 200 g de cada monolito y colocada en recipientes de vidrio libres de contaminantes, cada muestra fue etiquetada y colocada en una hielera para su traslado al laboratorio y conservada a 4º C, de conformidad con lo establecido en la NOM-138-SEMARNAT//ss-2003 para “Límites máximos permisibles de hidrocarburos en suelos y las especificaciones para su caracterización y remediación”. Las variables analizadas fueron la fracción pesada, benzo (b) fluoranteno, benzo (k) fluoranteno, benzo (a) pireno, dibenzo (a,h) andraceno, indeno (1, 2,3, c-d) pireno y benzo (a) antraceno de acuerdo a la metodología propuesta por dicha norma. Los tres sitios no contaminados o controles fueron evaluados de la misma forma. 3.4. Análisis de información Se realizaron análisis de varianza (ANOVA) de una vía, sobre las características del suelo, la población de lombrices y la concentración de hidrocarburos, basadas sobre diferencias mínimas significativas usando un modelo lineal generalizado (p<0.05), (SAS Institute Inc., 1989). Las diferentes metodologías para la caracterización de los suelos se describen a continuación. 28 3.5.Análisis de suelo 3.5.1. Textura: En el presente método (procedimiento de Bouyoucos) se elimina la agregación debida a materia orgánica y la floculación debida a los cationes calcio y magnesio. No se eliminan otros cementantes como carbonatos. El tiempo de lectura se ha escogido de 40 segundos para la separación de partículas mayores de 0.05 mm (arena) y de 2 horas para partículas de diámetro mayores de 0.002 mm (limo y arena). Estos límites han sido establecidos por el Departamento de Agricultura de Estados Unidos (U.S.D.A. por sus siglas en inglés) y se han usado para construir el triángulo de texturas que se observa en la Figura 4 (NOM-021SEMARNAT-2000). Figura 4: Triangulo de texturas de U.S.D.A. para el análisis granulométrico de los suelos. Procedimiento: Pesar 60 g de suelo de textura fino o 120 g de suelo de textura gruesa en un vaso de precipitados de 500 mL, agregar 40 mL de agua oxigenada al 30% y poner a evaporar hasta sequedad, agregar otros 40 mL y observar la reacción. Evaporar nuevamente a sequedad. Repetir hasta que no haya efervescencia al agua oxigenada. Después de eliminar la materia orgánica y llevar a sequedad el suelo, pesar 50 g de suelo de textura arcillosa o 100 g de 29 suelo de textura arenosa y ponerlos en un vaso de precipitados de 250 mL. Adicionar agua hasta cubrir la superficie con una lámina de 2 cm. Agregar 5 mL de oxalato de sodio y 5 mL de metasilicato de sodio y dejar reposar durante 15 minutos. Si el suelo tiene mucha arcilla puede prolongarse el tiempo hasta media hora. Pasar las muestras de los vasos de precipitado a las copas del agitador mecánico, pasando todo el material con la ayuda de una piceta. Activar los agitadores y proceder a dispersar cinco minutos. Al finalizar el tiempo de agitación, bajar la copa del dispersor y pasar el contenido a una probeta de 1000 mL o al cilindro de Bouyoucos enjuagando la copa con ayuda de una piceta. Agregar agua destilada hasta completar un litro con el hidrómetro dentro de la suspensión en el caso de la probeta y si utiliza el cilindro de Bouyoucos llevar a la marca inferior (1113 mL) con el hidrómetro dentro de la suspensión. Sacar el hidrómetro y suspender el suelo con un agitador de mano operando durante un minuto. Tomar las lecturas del hidrómetro a los 40 segundos y después de 2 horas de terminada la dispersión con el agitador de mano. Para hacer una lectura, colocar el hidrómetro dentro de la probeta 20 segundos antes del momento de la determinación, cuidando de alterar lo menos posible la suspensión. Después de hacer la lectura se seca el hidrómetro, se lava, se seca y se toma la temperatura. Si por alguna razón al hacer la lectura se acumula espuma alrededor del hidrómetro, agregar unas gotas de alcohol etílico (NOM-021-SEMARNAT-2000). 3.5.2. PH: Método electrométrico para la determinación del pH en muestras de suelo en una solución de agua pura. La evaluación electrométrica del pH se basa en la determinación de la actividad del ion H mediante el uso de un electrodo cuya membrana es sensitiva al H. En el caso de los suelos el pH se mide potenciométricamente en la suspensión sobrenadante de una mezcla de relación suelo: agua 1:2 (NOM-021-SEMARNAT-2000). Procedimiento: Colocar 10 g de suelo en un vaso de precipitado de 100 mL. Añadir 20 mL de agua, la cual da una relación 1:2. Agitar manualmente durante 1 minuto y dejar reposar 10 minutos. La operación se repite 2 veces. Agitar perfectamente la suspensión del suelo antes de efectuar la lectura correspondiente de pH. Se calibra el instrumento con las soluciones 30 amortiguadoras pH 4 y pH 7 teniendo cuidado de leer las muestras problema en el intervalo de pH correspondiente (Jackson, 1964). En la Tabla 2 Se muestra la clasificación del suelo según su pH Tabla 2. Clasificación del suelo según su pH. CLASIFICACION Fuertemente ácido Moderadamente ácido Neutro Medianamente alcalino Fuertemente alcalino pH < 5.0 5.1 - 6.5 6.6 - 7.3 7.4 – 8.5 > 8.5 3.5.3. Materia Orgánica: La determinación de Materia Orgánica (M.O.) del suelo se evalúa a través del contenido de carbono orgánico con el método de Walkey y Black. Este método se basa en la oxidación del carbono orgánico del suelo por medio de una disolución de Dicromato de Potasio ( y el calor de reacción que se genera al mezclarla con Ácido Sulfúrico ) concentrado. Después de un cierto tiempo de espera la mezcla se diluye, se adiciona Ácido Fosfórico ( ) concentrado para evitar interferencias de Fe +3 y el Dicromato de Potasio residual es valorado con el Sulfato Ferroso. Con este procedimiento se detecta entre un 70 y 84% del carbono orgánico total por lo que es necesario introducir un factor de corrección, el cual puede variar entre suelo y suelo. (NOM-021-SEMARNAT-2000). Procedimiento: Pesar 0.5 g de suelo seco y pasado por un tamiz de 0.5 mm y colocarlo en un matraz Erlenmeyer de 500 mL. Procesar un blanco con reactivos por triplicado. Adicionar exactamente 10 mL de 1 N girando el matraz cuidadosamente para que entre en contacto con todo el suelo. Agregar cuidadosamente con una bureta 20 mL de concentrado a la suspensión, girar nuevamente el matraz y agitar de esa forma durante un minuto. Dejar reposar durante 30 minutos. Añadir 200 mL de agua destilada. Añadir 5 mL de concentrado. Adicionar de 5 a 10 gotas del indicador de difenilamina. Titular 31 con la disolución de sulfato ferroso gota a gota hasta un punto final verde claro. (NOM021-SEMARNAT-2000). Con los datos obtenidos es posible calcular el porcentaje de Carbono Orgánico (Ec. 1) y posteriormente determinar el porcentaje de Materia Orgánica (Ec. 2). % C Orgánico = N x ( ) x 0.39 (Ec. 1) Dónde: B = Volumen de sulfato ferroso gastado para valorar el blanco de reactivos (mL). T = Volumen de sulfato ferroso gastado para valorar la muestra (mL). N = Normalidad exacta del sulfato ferroso (valorar por separado al momento de analizar las muestras). g = Peso de la muestra empleada (g). mcf = factor de corrección de humedad. % Materia orgánica = % C Orgánico x 1.724 (Ec. 2) Los valores de referencia para clasificar la concentración de la materia orgánica en los suelos minerales y volcánicos se presenta en la Tabla 3. Tabla 3. Valores de referencia para la clasificación de la Materia Orgánica en suelos. CLASE Muy Bajo Bajo Medio Alto Muy Alto % M.O. SUELOS SUELOS NO VOLCÁNICOS VOLCÁNICOS < 4.0 < 0.5 4.1 - 6.0 0.6 - 1.5 6.1 - 10.9 1.6 – 3.5 11 – 16 3.6 - 6.0 > 16.1 >6.0 32 3.5.4. Nitrógeno (método Micro-Kjeldahl): La determinación de nitrógeno total por este procedimiento involucra dos pasos: (a) digestión de la muestra para convertir el nitrógeno a (b) la determinación de en el digestado. La digestión de la muestra es desarrollada por calentamiento de la muestra con ácido sulfúrico concentrado y sustancias como el que promueven la oxidación de la materia orgánica y la conversión del nitrógeno orgánico a amonio por incremento de la temperatura de digestión y también emplea catalizadores como el Cu y Se, que aumentan la velocidad de oxidación de la materia orgánica por el ácido sulfúrico. El amonio en el digestado es determinado por titulación del amonio liberado por destilación del digestado con álcali (NOM-021-SEMARNAT-2000). Procedimiento: Colocar una muestra de suelo previamente tamizada a través de malla 60 y que contenga aproximadamente 1 mg de N en un frasco micro-Kjeldahl seco (1,0.5, y 0.25 g de muestra para suelos con 2, 4 y 8% de materia orgánica, respectivamente). Adicionar 1.1 g de mezcla de catalizadores , 3 mL de ácido sulfúrico concentrado calentar en la unidad digestora a temperatura media alta hasta que el digestado se torne claro. Ebullir la muestra por 1 hr a partir del momento en que se torne claro. La temperatura en esta fase debe regularse de modo que los vapores de ácido sulfúrico se condensen en el tercio inferior del cuello del tubo de digestión. Una vez completada esta fase, dejar enfriar el frasco y agregar suficiente agua para colocar en suspensión, mediante agitación, el digestado (15 a 20 mL son generalmente suficientes). Dejar decantar las partículas de sílice evitando la precipitación de cristales de sulfato de amonio. Transferir el contenido líquido a la cámara de destilación del aparato, lavando el matraz de digestión con pequeñas porciones de agua. Colocar en el tubo de salida del aparato de digestión un matraz Erlenmeyer de 125 mL conteniendo 10 mL de la solución + indicadores. Adicionar cuidadosamente 10 mL de NaOH 10 N de modo que la sosa se deposite en el fondo de la cámara de destilación. Conectar el flujo de vapor e iniciar la destilación. Destilar hasta que el volumen alcance la marca de los 75 mL en el frasco Erlenmeyer. Determinar el nitrógeno amoniacal presente en el destilado titulando con el ácido sulfúrico 0.01 N. Debe usarse una microbureta de 10 33 mL con graduaciones de 0.01 mL. El cambio de color de la mezcla de indicadores en el punto final de la titulación, es de verde a rosado fuerte. Se preparan blancos siguiendo exactamente el mismo procedimiento que en las muestras (NOM-021-SEMARNAT-2000). Con los datos obtenidos se calcula el porcentaje de N Total con la Ecuación 3 (Ec. 3). % N Total = (Vm-Vb) x N x ( ) x 10 (Ec. 3) Dónde: Vm = Volumen de ácido sulfúrico empleado en titular la muestra Vb = Volumen de ácido sulfúrico empleado en titular blanco N = Normalidad exacta del ácido sulfúrico 14 = Peso equivalente del nitrógeno 10 = Factor de conversión a porcentaje P = Peso de la muestra de suelo en g. Los resultados de los análisis de nitrógeno inorgánico pueden interpretarse como lo indica la Tabla 4. Tabla 4. Valores de referencia para la clasificación del Nitrógeno inorgánico en suelos. CLASE Nitrógeno Total % Muy bajo Bajo Medio Alto Muy Alto < 0.05 0.05 – 0.10 0.10 – 0.15 0.15 – 0.25 > 0.25 3.5.5. Fosforo Extraíble (Método Olsen): Este método es ampliamente utilizado en estudios de fertilidad de suelos para la determinación de fosforo disponible tanto en suelo neutros como alcalinos. El fosforo es extraído del suelo con una solución 0.5 M ajustada a un ph de 8.5 34 Procedimiento: Pesar 2.5 g de suelo previamente tamizado y colocarlo en un matraz Erlenmeyer de 50 mL. Adicionar 25 mL de solución extractante (se tapan los matraces con tapones de hule previamente cubiertos con una película de plástico para evitar contaminación). Agitar por 5 minutos en agitador de acción reciproca a 180 oscilaciones por minuto (opm), colocar los matraces en posición vertical. El extracto se filtra en papel whatman 5, 42 o similar. Simultáneamente se corren blancos de reactivos. Tomar alícuotas de 2 a 40 mL de extracto, dependiendo de la concentración de P en solución (alícuotas de 5 a 10 ml son en general adecuados para suelos bajos o medios en P) y se colocan en un matraz aforado de 50 mL. Adicionar agua hasta completar aproximadamente 40 mL. Agregar 5 mL del reactivo mezclado, agitar y completar el volumen. Esperar 30 minutos y leer en un espectrofotómetro a 882 nm. Paralelamente se prepara una curva de calibración de fósforo como se indica en la Tabla 5. (Bray & Kurtz, 1945; CSTPA, 1974) Tabla 5. Preparación de la curva de calibración de fosforo. Solución P Solución Ácido ascórbico 5 -------------------------------ml--------------------------0 5 o 10 40 5 1 “ “ 5 2 “ “ 5 3 “ “ 5 4 “ " 5 6 “ “ 5 Conc. de fosforo ppm 0 0.10 0.20 0.30 0.40 0.60 a en matraz aforado de 50 mL b según la alícuota que se tome c la necesaria para tener aproximadamente 40 mL Con los datos obtenidos se determina el P con la siguiente ecuación (Ec. 4). P (mg/kg) = ppm en CC x Dm x Dv ppm CC = partes por millón en la curva de calibración Dm = dilución de masa (volumen extractante/g de muestra) Dv = dilución de volumen (aforo/alícuota) 35 (Ec. 4) Los resultados de los análisis se interpretan de forma aproximada con la Tabla 6. Tabla 6. Valores de referencia para la clasificación del P en suelos. CLASE Bajo Medio Alto mg/kg de P < 5.5 5.5 – 11 > 11 3.5.6. Cationes Intercambiables (Ca, Mg, K, y Na): Método para la determinación de la capacidad de intercambio catiónico (CIC) y bases intercambiables (Ca 2+, Mg 2+, Na+ y K+) de los suelos, empleando acetato de amonio 1N, pH 7.0, como solución saturante. El método para la determinación consiste en la saturación de la superficie de intercambio con un catión índice, el ion amonio; lavado del exceso de saturante con alcohol; desplazamiento del catión índice con potasio y determinación del amonio mediante destilación. El amonio se emplea como catión índice debido a su fácil determinación, poca presencia en los suelos y porque no precipita al entrar en contacto con el suelo. La concentración normal que se usa asegura una completa saturación de la superficie de intercambio y como está amortiguada a pH 7.0, se logra mantener un cierto valor de pH. El lavado con alcohol pretende desplazar el exceso de saturante y minimizar la pérdida del amonio adsorbido (NOM-021-SEMARNAT-2000). Procedimiento: Pesar 5 g de suelo secado al aire y tamizado por malla de abertura de 2 mm y transferirlo a un tubo de centrífuga de 50 mL Agregar 33 mL de solución de acetato de amonio. Tapar y agitar en posición horizontal durante 10 minutos. Luego, centrifugar hasta que el líquido sobrenadante esté claro. Esto se logra fácilmente centrifugando a 2500 revoluciones por minuto (rpm). Decantar el líquido en un matraz de 100 mL y repetir la extracción otras dos veces, aforar con acetato de amonio y guardarlo para la posterior determinación de las bases intercambiables (solución A). Agregar 30 mL de la solución de cloruro de amonio 36 1N; agitar durante 10 minutos y luego centrifugar hasta que el líquido sobrenadante esté claro y desecharlo. Adicionar 30 mL de la solución de cloruro de amonio 0.25N, agitar durante 10 minutos, centrifugar y desechar el sobrenadante. Lavar la muestra con porciones de alcohol de 30 mL agitando durante 10 minutos, centrifugar y eliminar el sobrenadante cada vez. El lavado termina cuando la prueba de cloruros en el decantado sea mínima. Prueba de cloruros. Pipetear 10 mL del sobrenadante alcohólico en un tubo de ensaye y agregar 4 o 5 gotas de nitrato de plata, si se observa un ligero precipitado blanco, la reacción es positiva y se debe continuar el lavado hasta que la prueba de cloruros sea negativa. Reemplazar el amonio adsorbido con tres porciones de 33 mL de cloruro de sodio al 10%, agitando durante 10 minutos y centrifugando cada vez. Decantar cada reemplazo en un matraz volumétrico de 100 mL y completar al volumen. Determinar el amonio a partir de una alícuota de 10 mL, la cual se transfiere a un matraz Kjeldahl de 300 mL, se le agregan aproximadamente 8 mL de NaOH al 40% y se conecta al aparato de destilación microkjeldahl. Recoger el producto de la destilación en un matraz Erlenmeyer que contenga 10 mL de mezcla de indicador y ácido bórico. Determinar por titulación con HCl 0.01N (NOM-021-SEMARNAT-2000). La capacidad de intercambio catiónico expresado en Cmol(+) Kg-1 de suelo (CIC) se calculará con la Ecuación 5 CIC = 200 (V) (N) (Ec. 5) Dónde: V = volumen (mL) de HCl empleado al titular lo destilado en la solución borada. N = normalidad del HCl. Determinación de Ca y Mg Pipetear 0.5 mL de la solución A en un tubo de ensaye. Añadir 9.5 mL de la solución diluida de lantano y mezclar. Medir la concentración de Ca y Mg en las series estándar, el blanco y la muestra por espectrofotometría de absorción atómica a una longitud de onda de 37 422.7 y 285.2 nm, respectivamente, usando una flama de aire-acetileno NOM-021SEMARNAT-2000). Para calcular Ca (Ec. 6) y Mg (Ec. 7) se usan las siguientes ecuaciones respectivamente Ca (cmol/kg) = 9.98 x (Ec. 6) Mg (cmol/kg) = 16.447 x (Ec. 7) Dónde: a= Concentración de Ca o Mg medido en la muestra (mg/L) b= Concentración de Ca o Mg medido en el blanco (mg /L). w= Peso del suelo seco (g) Determinación de Na y K por flamometría Pipetear 1.0 mL de la solución A en un tubo de ensaye. Añadir 1.0 mL de la solución de cloruro de cesio acidificada. Añadir 8 mL de agua y mezclar. Medir la concentración de Na y K en las muestras el blanco y las series estándar por espectrofotometría de emisión de flama. Para calcular Na (Ec. 8) y K (Ec. 9) se usan las siguientes ecuaciones respectivamente. Na (cmol/kg) = 4.347 x (Ec. 8) Mg (cmol/kg) = 2.557 x (Ec. 9) Dónde: a= Concentración de Ca o Mg medido en la muestra (mg/L) b= Concentración de Ca o Mg medido en el blanco (mg /L). w= Peso del suelo seco (g) 38 3.6. Hipótesis La ausencia o disminución de organismos de la macrofauna edáfica en suelos contaminados por hidrocarburos podría ser un mecanismo bioindicador de contaminación en el suelo. 3.7.Objetivos 3.7.1. Objetivo general Determinar el efecto de la contaminación por hidrocarburos de petróleo sobre la macrofauna edáfica. 3.7.2. Objetivos específicos Identificar la macrofauna del suelo existente en la zona de estudio. Caracterizar los hidrocarburos en el suelo contaminado. Caracterizar los parámetros físicos y químicos del suelo contaminado en la zona de estudio. 39 CAPITULO IV RESULTADOS 40 4. RESULTADOS 4.1.Abundancia y Biomasa de la Macrofauna edáfica En La zona de estudio del Campo petrolero Miguel Alemán se encontraron 20 taxa, 18 en estado maduro y 2 en estado inmaduro (larvas) (Tabla 7). Tabla 7. Organismos de la macrofauna del suelo (invertebrados) encontrados en la zona de estudio del campo petrolero Miguel Alemán. PHYLUM Arthropoda CLASE Arachnida Chilopoda Diplopoda Crustacea Insecta Entognatha Mollusca Gastropoda ORDEN Araneae Acari Isopoda Coleóptera Larva Coleóptera Staphylinidae Thysanura Formicidae Isoptera Diptera Larva Diptera Hemiptera Orthoptera Dermáptera Hymenoptera Diplura Collembola - NOMBRE COMUN Arañas Ácaros Ciempiés Milpiés Cochinillas Escarabajos estafilínidos Tisanuros Hormigas Termitas Moscas, mosquitos Chinches Grillos, saltamontes Tijerillas Abejas, avispas Doble cola Collembolos Caracoles La abundancia total de la macrofauna edáfica fue mayor en el suelo contaminado (suelo de la presa de recorte de perforación de cada pozo) comparado con el suelo no contaminado (suelo aledaño a cada pozo libre de contaminación), sin embargo esto no fue estadísticamente significativo para p < 0.05 (Figura 5). 41 1400 1200 ind. m-2 1000 800 600 400 200 0 S contaminado S no contaminado Figura 5. Abundancia total de la macrofauna edáfica (invertebrados) en el campo petrolero Miguel Alemán, S = suelo, las barras indican el error estándar. La Biomasa total de la macrofauna edáfica fue mayor en el suelo no contaminado en comparación con el suelo contaminado, sin embargo esto no fue estadísticamente significativo para p> 0.05. S= suelo, las barras indican el error estándar (Figura 6). 40 35 g. m-2 30 25 20 15 10 5 0 S contaminado S no contaminado Figura 6. Biomasa total de la macrofauna edáfica (invertebrados) en el campo petrolero Miguel Alemán, S = suelo, las barras indican el error estándar. 42 Las diferentes taxa localizas en el campo petrolero Miguel Alemán no presentaron diferencias estadísticamente significativas entre el suelo contaminado y el suelo no contaminado, a excepción del orden Araneae, donde sí se observaron diferencias significativas para p< 0.05, NE = no encontrada (Tabla 8). Tabla 8. Abundancia de las diferentes taxa encontradas en el campo petrolero Miguel Alemán Taxa Acari Araneae Chilopoda Coleoptera Gasteropoda Dermaptera Diplopoda Diplura Diptera Formicidae Hemiptera Isoptera Larva Coleoptera Orthoptera Staphylinidae Hymenoptera Larva diptera Collembola Isopoda Thysanura Suelo contaminado 6.66±7.96 30.66±9.92 5.33±3.93 42.66±17.50 250.66±193.39 1.33±2.30 2.66±3.11 2.66±4.61 5.33±3.93 78.66±102.07 1.33±2.30 228±316.27 Suelo no contaminado 1.33±2.30 12±6.92 13.33±9.54 20±11.87 237.33±137.29 1.33±2.30 4±3.61 2.66±3.11 1.33±2.30 94.66±102.87 1.33±2.30 25.33±28.01 21.33±8.58 2.66±3.11 4±4.97 1.33±2.30 9.33±7.20 NE NE NE 20±9.72 2.66±3.11 N.E N.E N.E 4±3.61 4±3.61 1.33±2.3 F p 1.239 7.139 1.800 3.444 0.009 0.000 0.234 0.000 2.302 0.036 0.000 1.222 0.277 0.013 0.193 0.076 0.923 1.000 0.633 1.000 0.143 0.850 1.000 0.280 0.031 0.000 0.860 1.000 La Biomasa de las diferentes taxa encontradas en la zona de estudio entre el suelo contaminado y no contaminado no presentaron diferencias estadísticamente significativas, a excepción del orden Diptera que si presentó diferencias significativas (p= 0.04), NE = no encontrada (Tabla 9). 43 Tabla 9. Biomasa de las diferentes taxas encontradas en el campo petrolero Miguel Alemán. Taxa Acari Araneae Chilopoda Coleoptera Gasteropoda Dermaptera Diplopoda Diplura Diptera Formicidae Hemiptera Isoptera Larva Coleoptera Orthoptera Staphylinidae Hymenoptera Larva diptera Collembola Isopoda Thysanura Suelo contaminado 0.002±0.002 0.56±0.91 0.006±0.007 0.097±0.05 11.81±6.62 0.0005±0.0009 0.019±0.03 0.030±0.05 0.0005±0.0005 0.078±0.10 0.0001±0.0002 0.536±0.90 1.79±2.35 0.02±0.03 0.0021±0.003 0.00013±0.0002 0.099±0.07 Suelo no contaminado 0.00013± 0.0002 0.12±0.17 0.048±0.03 0.058±0.054 18.35±14.22 0.0004±0.0006 0.14±0.18 0.021±0.029 0.0022±0.000 0.016±0.011 0.0016±0.002 0.013±0.014 3.18±3.17 0.022±0.027 F p 1.405 0.248 0.684 4.051 0.720 0.520 0.040 1.391 0.058 3.142 1.126 0.834 0.997 0.417 0.056 0.405 0.478 0.843 0.250 0.810 0.040 0.299 0.370 0.328 0.371 0.548 0.029 0.865 0.0013±0.001 0.0012±0.002 0.00035±0.0006 4.2. Riqueza de Taxa En la zona de estudio del campo petrolero Miguel Alemán, 20 taxa fueron encontrados, de los cuales 14 se encontraron tanto en el suelo contaminado como en el suelo no contaminado estos fueron: Acari, Araneae, Chilopoda, Coleóptera, Gasterópoda, Dermáptera, Diplópoda, Diplura, Diptera, Formicidae, Hemiptera, Isóptera, Larva Coleóptera y Orthoptera; mientras que en el suelo contaminado únicamente se encontraron a los órdenes Staphylinidae, Hymenoptera y Larvas de díptera y en el suelo no contaminado se encontraron tres órdenes: Collembola, Isopoda y Thysanura (Figura 7). 44 Figura 7. Riqueza de taxa de la macrofauna edáfica en el campo petrolero Miguel Alemán. 4.3. Parámetros físicos y químicos del suelo Los parámetros físicos y químicos del suelo contaminado comparado con el suelo control el cual está libre de contaminante, no presentaron diferencias significativas entre sí, solamente presentaron diferencias significativas el fósforo y la arena para p< 0.05 (Tabla 10). 45 Tabla 10. Parámetros físicos y químicos del suelo en el campo petrolero Miguel Alemán. Suelo p contaminado no contaminado F pH 7.6±0.2a 7.5±0.2a 1.2 0.28 M.O. (%) 7.9±3.9a 5.9±1.8a 2.5 0.12 N T( %) 0.3±0.1a 0.3±0.1a 0.1 0.75 C/N 12.5±3.6a 10.1±1.9a 3.8 0.06+ P mg kg-1 12.3±8.1a 4.5±1.3b 10.7 0.00** Na cmol kg-1 0.9±0.2a 0.9±0.4a 0.0 0.97 K cmol kg-1 0.7±0.4a 0.6±0.2a 1.3 0.25 Ca cmol kg-1 14.4±10.6a 14.6±10.7a 0.0 0.96 Mg cmol kg-1 1.7±0.6a 1.5±0.5a 0.6 0.42 CIC cmol kg-1 28.3±6.1a 31.1±8.3a 0.8 0.36 C.E. µS/cm 178.9±20.8a 194.2±18.8a 3.5 0.07+ Arcilla % 53.2±14.7a 45.8±7.5a 2.3 0.13 Limo % 32.9±7.9a 29.1±8.6a 1.2 0.26 Arena % 14.1±11.1a 25±10.6b 5.9 0.02* Fracción pesada Por arriba de Norma 0 Parámetros Por medio de la comparación de los resultados con la NOM-021-SEMARNT-2000 se idénticos al suelo contaminado y el solo no contaminado como del grupo de los suelos Vertisoles. 4.4. Caracterización de los Hidrocarburos en la zona de estudio En la zona de estudio se detectó la presencia de hidrocarburos poliaromáticos (Tabla 11), estos parámetros se encuentran dentro de los límites permisibles por NOM-138SEMARNAT/SS-2003, sin embargo la fracción pesada sobre pasa los límites establecidos por dicha norma que establecen que para suelo residenciales y agrícolas de 3000 mg/kg y suelos industriales de 6000 mg /kg base seca. ND = No Detectado. 46 Tabla 11. Hidrocarburos en el suelo en el campo petrolero Miguel Alemán. Sitio Hidrocarburos Fracción pesada Benzo(B)fluoranteno Benzo(k)fluoranteno Benzo(a)pireno Dibenzo(a,h) antraceno indeno (1,2,3,c-d) pireno Benzo (a) antraceno Suelo contaminado 8386±44.82 0.040±0.003 0.041±0.001 0.039±0.002 0.041±0.002 0.043±0.001 0.041±0.001 F p Suelo No contaminado ND 26251.5 0.0000 ND 141.6 0.0002 ND 930.2 0.0000 ND 380.2 0.0000 ND 240.2 0.0001 ND 1849.0 0.0000 ND 1681.0 0.0000 4.5. Correlación de los diferentes parámetros analizados El análisis que correlaciona las 24 variables analizadas en este estudio mostró una correlación positiva entre pH y N, M.O. y Ca, la relación CN y Abundancia, Benzo (b) fluoranteno con Benzo (k) fluoranteno, Dibenzo (a, h) antraceno, Indeno (1,2,3,c-d) pireno y Benzo (a) antraceno; y las variables pH con Mg, Ca con Arcilla, Ca con Arena, Mg con N y Arcilla con Arena se correlacionaron negativamente (Tabla 12). 47 Tabla 12. Correlación de las 24 variables analizadas Conduc. P MO C Na K Ca Mg CIC N CN Arcilla Limo Arena Frac. P. Benzo b Benzo k Benzo a Dibenzo Indeno Benzo antra Abund. Biomasa pH .654 (-) .476 (+) .835 (+) .835 (+) .584 (-) .254 (-) .489 (+) .041 (-) .098 (-) .009 (+) 1 (+) .523 (-) .598 (+) .499 (+) .771 (-) .281 (-) .281 (-) .281 (-) .281 (-) .281 (-) .281 (-) .997 (+) .767 (-) Conduc. p MO C Na K Ca Mg CIC N .870 (+) .182 (-) .181 (-) .762 (-) .400 (+) .164 (-) .695 (+) .555 (+) .662 (-) .346 (-) .131 (+) .056 (-) .155 (-) .118 (+) .935 (+) .935 (+) .935 (+) .935 (+) .935 (+) .935 (+) .344 (-) .5580 (-) .689 (-) .689 (-) .108 (-) .730 (-) .965 (+) .435 (-) .574 (-) .467 (+) .524 (-) .999 (-) .926 (-) .974 (+) .753 (+) .195 (-) .195 (-) .195 (-) .195 (-) .195 (-) .195 (-) .527 (-) .291 (-) .000 (+) .581 (+) .582 (-) .346 (+) .876 (-) .737 (-) .844 (+) .165 (+) .312 (-) .237 (+) .337 (+) .064 (-) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .162 (+) .398 (+) .581 (+) .581 (-) .346 (+) .876 (-) .737 (-) .844 (+) .165 (+) .312 (-) .237 (+) .336 (+) .964 (-) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .884 (+) .162 (+) .399 (+) .838 (+) .927 (+) .543 (+) .682 (+) .575 (-) .416 (+) .893 (-) .818 (+) .917 (+) .644 (-) .303 (+) .303 (+) .303 (+) .303 (+) .303 (+) .303 (+) .419 (+) .182 (+) .235 (-) .295 (+) .155 (+) .262 (-) .746 (-) .269 (+) .344 (-) .245 (-) .518 (+) .535 (+) .535 (+) .535 (+) .535 (+) .535 (+) .535 (+) .743 (-) .980 (-) .530 (-) .391 (-) .498 (+) .511 (+) .034 (-) .198 (+) .009 (-) .282 (-) .770 (-) .770 (-) .770 (-) .770 (-) .770 (-) .770 (-) .508 (+) .744 (+) .139 (+) .032 (-) .959 (+) .564 (+) .639 (-) .539 (-) .812 (+) .240 (+) .240 (+) .240 (+) .240 (+) .240 (+) .240 (+) .962 (+) .726 (+) .107 (-) .902 (-) .425 (+) .500 (-) .400 (-) .673 (+) .379 (+) .379 (+) .379 (+) .379 (+) .379 (+) .379 (+) .899 (-) .865 (+) .991 (-) .532 (-) .607 (+) .507 (+) .780 (-) .272 (-) .272 (-) .272 (-) .272 (-) .272 (-) .272 (-) .994 (-) .758 (-) Continuación Tabla 16 CN Arcilla Limo Arena Frac. P. Benzo b Benzo k Benzo a Arcilla Limo Arena Frac. P Benzo b Benzo k Benzo a Dibenzo Indeno .477 (-) .402(+) .501(+) .229 (-) .719(+) .719(+) .719(+) .719(+) .719(+) .075(-) .024(-) .248(+) .804(+) .804(+) .804(+) .804(+) .804(+) .099(+) .173(-) .879(-) .879(-) .879(-) .879(-) .879(-) .273(-) .780(-) .780(-) .780(-) .780(-) .780(-) .948 (-) .948 (-) .948 (-) .948 (-) .948 (-) .000(+) .000(+) .000(+) .000(+) >.050(+) >.050(+) >.050(+) .000 (+) >.050(+) Benzo antra Abund. .719(+) .804 (+) .879(-) .780(-) .948 (-) .000(+) >.050(+) >.050(+) .003(+) .474 (-) .399(+) .499 (+) .226 (-) .722(+) .722(+) .722(+) Biomasa .233(+) .711 (-) .635(+) .735 (+) .462 (-) .486(+) -486 (+) .486 (+) 48 dibenz o >.050 (+) >.050 (+) .722 (+) .486 (+) indeno >.050 (+) .722 (+) .486 (+) Benzo antra Abund . .722 (+) .486 (+) .236 (+) CAPITULO V DISCUSION GENERAL 49 5. DISCUSIÓN GENERAL 5.1. Discusión En el campo petrolero Miguel Alemán fueron encontradas 20 taxa de invertebrados pertenecientes a la macrofauna edáfica, esta cifra es parecida a la reportada en otro estudio en un sitio perturbado, donde se encontraron 16 de invertebrados en un suelo contaminado por hidrocarburos (Uribe-Hernández et al., 2010), lo que refleja que la contaminación tiene un efecto sobre la abundancia de los organismos del suelo. En este estudio la abundancia total de la macrofauna edáfica fue mayor en el sitio contaminado, lo que refleja posiblemente que al tratarse de un pasivo ambiental de más de 15 años de ocurrido el derrame, los niveles de contaminantes han disminuido y los invertebrados se han ido adaptando a tales condiciones de contaminación, aunque los niveles de contaminación se encuentran por encima de lo permitido por la Norma oficial Mexicana NOM 138. Sin embargo taxa como Chilopoda, diplopoda y Formicidae mostraron una mayor abundancia en el suelo no contaminado, lo que refleja la mayor sensibilidad de estos organismos a la contaminación por hidrocarburos. En la biomasa total ocurre lo contrario, es decir esta es mayor en el suelo no contaminado lo que refleja que los organismos de mayor talla son más sensibles a la contaminación por hidrocarburos como es el caso de la taxa Aranea, Gasteropoda y Diplopoda. Taxa como Collembola, Isopoda y Thysanura solo se encontraron en el suelo no contaminado, lo que indica su alta sensibilidad a la contaminación. Basados en trabajos anteriores de autores como Santurofu et al., (2012) y Faulkner & Lochmiller (2000) utilizando a los Collembolos e Isópodos como bioindicadores es posible concluir que estos organismos reflejan el estado biótico o abiótico del campo petrolero Miguel Alemán y podrían ser una respuesta al impacto de los cambios en el hábitat y en el ecosistema. Se ha observado en otros estudios (McGeoch, 1998) que los invertebrados son sensibles a cambios en la condiciones del suelo, por tanto se consideran factibles para ser considerados como bioindicadores de contaminación (Nahmani & Lavelle, 2002). 50 Las características físicas y químicas del suelo en el campo petrolero Miguel Alemán al parecer han amortiguado el impacto de la contaminación a los organismos del suelo, ya que los altos niveles de Materia orgánica y Nitrógeno existentes en la zona favorecen su aporte de energía, junto con la gran cantidad de arcilla existente, ya que se ha visto que estas condiciones favorecen una mayor abundancia de la macrofauna del suelo (Lavelle et al., 2006). Se sabe muy poco del impacto que las diversas actividades humanas como la contaminación causan a los organismos invertebrados del suelo y de la sensibilidad que estos presentan ante los contaminantes, por lo encontrado en este estudio se podría señalar que los invertebrados del suelo podrían ser candidatos para ser considerados organismos bioindicadores de contaminación, sin embargo más estudios son necesarios. Con base en los resultados obtenidos, los organismos que solo fueron encontrados en la zona contaminada (Staphylinidae, Hymenoptera y Larva de Dipteros), es decir, que no fueron sensibles a la contaminación por hidrocarburos podrían tener potencial para la remediación de suelos contaminados por hidrocarburos, por lo que se sugiere la realización de estudios encaminados a utilizar a dichos organismos en la remoción de estos contaminantes en climas tropicales. 51 5.2. Conclusión En sitios contaminados por hidrocarburos como el caso del campo petrolero Miguel Alemán es posible utilizar la abundancia y biomasa de algunos organismos de la macrofauna edáfica como bioindicadores de la contaminación. En pasivos ambientales el efecto de la contaminación es menor sobre la abundancia y biomasa de la macrofauna edáfica ya los niveles de contaminantes han disminuido y los invertebrados se han ido adaptando a tales condiciones de contaminación. Se comprobó que los organismos como los Collembolos e Isopodos, que han sido utilizados previamente como bioindicadores en otras zonas, también pueden ser utilizados en regiones con clima tropical por su alto nivel de sensibilidad a la contaminación. Se recomienda la realización de más trabajos para comprobar si los invertebrados localizados en la zona contaminada podrían servir como organismos remediadores de suelos contaminados por hidrocarburos generando una nueva técnica de remediación, más económica y sin causar efectos negativos sobre el ambiente. 52 5.3. Glosario Alícuota: Parte que se toma de un volumen (alícuota líquida) o de una masa (alícuota sólida) iniciales, para ser usada en una prueba de laboratorio, cuyas propiedades físicas y químicas, así como su composición, representan las de la sustancia original. Normalmente las alícuotas son el resultado de repartir un volumen inicial en varias partes iguales. Se suele medir en mililitros (mL) o gramos (g). Antraceno: Hidrocarburo aromático sólido, blanco, con fluorescencia violeta, que se emplea en la fabricación de colorantes y detectores de centelleo Artrópodos: Animales invertebrados que forman el filo más diverso del reino animal. Estos animales tienen el cuerpo cubierto por un exoesqueleto conocido como cutícula y formado una serie lineal de segmentos ostensibles, con apéndices de piezas articuladas. Los arácnidos, los insectos y los crustáceos son artrópodos. Autodepuración: La autodepuración es el proceso de recuperación después de un episodio de contaminación orgánica. En este proceso los compuestos orgánicos son transformados progresivamente por la descomposición bioquímica, aumentando su estabilidad. Cada etapa se caracteriza por su distinta composición física y química. BaP: Benzo (a) Pireno pertenece a una clase de hidrocarburos aromáticos y que comparten una estructura química básica, el anillo de benceno. Son compuestos poco solubles en agua por tener propiedades hidrofóbicas consistentes en 2 o más anillos bencénicos, ya sea en forma simple o múltiple, formando cadenas o racimos. Biodiversidad: La biodiversidad o diversidad biológica es la variedad de la vida. Este reciente concepto incluye varios niveles de la organización biológica. Abarca a la diversidad de especies de plantas, animales, hongos y microorganismos que viven en un espacio determinado, a su variabilidad genética, a los ecosistemas de los cuales forman parte estas especies y a los paisajes o regiones en donde se ubican los ecosistemas. También incluye los procesos ecológicos y evolutivos que se dan a nivel de genes, especies, ecosistemas y paisajes. 53 Bioindicador: una especie o grupo de especies que reflejan el estado biótico o abiótico de un medio, representa el impacto de los cambios en el hábitat, la comunidad u otros ecosistemas, o es indicador de la diversidad de la taxa o falta de diversidad en un área Biomasa: Cantidad total de materia viva presente en una comunidad o ecosistema. Biorremediación: La biorremediación es una tecnología emergente que utiliza organismos vivos (plantas, algas, hongos y bacterias) para absorber, degradar o transformar los contaminantes y retirarlos, inactivarlos o atenuar su efecto en suelo, agua y aire. Cation: Un catión es un ión con carga eléctrica positiva, es decir, que ha perdido electrones. Los cationes se describen con un estado de oxidación positivo. Colémbolo: Orden de insectos de pequeño tamaño, sin alas, con boca masticadora, en algunos casos chupadora, y que viven sobre materia orgánica en descomposición. Contaminación: Introducción de un agente contaminante dentro de un medio natural, causando inestabilidad, desorden y también daños en el ecosistema. Contaminante: Cualquier factor cuya presencia en un determinado ambiente y circunstancia, constituyan o desencadenen contaminación. Es la sustancia, o forma de energía que normalmente no está presente en el medio ambiente marino, al menos en los niveles que se encuentran confrecuencia y que aparentemente no causan efectos nocivos, Si la concentración se incrementa con el tiempo puede producir efectos nocivos. Densidad: La densidad es la razón entre la masa de un cuerpo y el volumen que ocupa. Depuración: Eliminación de la suciedad, impurezas o sustancias nocivas Destilación: Operación de separar, mediante vaporización y condensación en los diferentes componentes líquidos, sólidos disueltos en líquidos o gases licuados de una mezcla, aprovechando los diferentespuntos de ebullición de cada una de las sustancias ya que el punto de ebullición es una propiedad intensiva de cada sustancia, es decir, no varía en función de la masa o el volumen, aunque sí en función de la presión. 54 Dípteros: Orden de insectos de metamorfosis complicada, con la boca de tipo chupador, un par de alas membranosas y otro par transformado en órganos que le dan la estabilidad (llamados balancines). Ecotoxicología: La ecotoxicología estudia el destino y los efectos de los contaminantes en los ecosistemas, intentando explicar las causas y prever los riesgos probables. La ecotoxicología prospectiva evalúa la toxicidad de las sustancias antes de su producción y uso. La ecotoxicología retrospectiva se ocupa de confirmar si la sustancia produce daños en el ecosistema HAPs: Grupo de sustancias químicas que se forman durante la incineración incompleta del carbón, el petróleo, el gas, la madera, las basura y otras sustancias orgánicas, como el tabaco y la carne asada al carbón. Hidrocarburos: Los hidrocarburos son compuestos orgánicos formados únicamente por átomos de carbono e hidrógeno. HTP: Los términos hidrocarburos totales de petróleo se usan para describir una gran familia de varios cientos de compuestos químicos originados de petróleo crudo. Invertebrados: Se denomina invertebrados a todos aquellos animales que no se encuadran dentro del subfilo de los vertebrados del filo cordados. No poseen columna vertebral o esqueleto interno articulado. Isópodos: Orden de crustáceos malacostráceos que carecen de caparazón, tienen el cuerpo ancho y deprimido, todos los apéndices iguales, la cabeza soldada al primer segmento torácico y los ojos sin pedúnculo. Larvas: es un cierto animal en estado de desarrollo, que ya ha abandonado su huevo y puede alimentarse por sí mismo, pero que aún no ha desarrollado la forma y la organización que caracteriza a los adultos Macrofauna: organismos mayores a 2 mm 55 de su especie. Materia Orgánica: Conjunto de células animales y vegetales descompuestas total o parcialmente por la acción de microorganismos. Mutagénico: Agente físico, químico o biológico que altera o cambia la información genética de un organismo y ello incrementa la frecuencia de mutaciones por encima del nivel natural. Oleoductos: Se denomina oleoducto a la tubería e instalaciones conexas utilizadas para el transporte de petróleo, sus derivados y biobutanol, a grandes distancias. Parámetros: Valor numéricos o dato fijo que considera en el estudio o análisis de una cuestión. pH: Coeficiente que indica el grado de acidez o basicidad de una solución Taxa: un taxón o taxon es un grupo de organismos emparentados, que en una clasificación dada han sido agrupados, asignándole al grupo un nombre en latín, una descripción si es una especie, y un tipo Textura: La textura del suelo es la proporción en la que se encuentran distribuidas variadas partículas elementales que pueden conformar un sustrato. Según sea el tamaño, porosidad o absorción del agua en la partícula del suelo o sustrato, puede clasificarse en 3 grupos básicos que son: la arena, el limo y las arcillas. Toxicidad: La toxicidad es la capacidad de cualquier sustancia química de producir efectos perjudiciales sobre un ser vivo, al entrar en contacto con el. Tóxico es cualquier sustancia, artificial o natural, que posea toxicidad (es decir, cualquier sustancia que produzca un efecto dañino sobre los seres vivos al entrar en contacto con ellos). Transecto: Área de muestreo, normalmente lineal o alargada, elegida como base para estudiar una característica particular del suelo 56 5.4.Referencias Aguilar, L., 2009.La Contaminación Ambiental. Recuperado de: http://contaminacionambiente.blogspot.mx/ Anderson, J.M. & J.S.I. Ingram, 1993. Tropical Soil Biology and Fertility: A Handbook of Methods. 2nd Edn., CAB. International, Oxfordshire, Wallingford, UK., ISBN: 085198-821-0. Anderson, J.M., 1988. Invertebrate mediated transport processes in soils. Agric, Ecosystems and Environment 24:5-19. ATSDR, 1995. Agency for Toxic Substances and Disease Registry. Toxicological Profile for Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs). U.S. Department of Health & Human Services. Bardgett, R.D.; Bowman W.D.; Kaufmann, R.; Schmidt, S.K. 2005. 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