REACCIÓN DE SELIWANOFF El reactivo de Selivafoff esta formado por 0.05 g de resolcinol en 100 ml de ácido clorhídrico diluido (1:29). Esta reacción es positiva con las cetosas y negativa con las aldosas si se siguen las siguientes precauciones: 1) La aldosa no debe estar presente en un concentración superior al 2 %. 3) La concentración del HCl no debe exceder del 12 %. 3) La reacción no debe estar en ebullición más de 20 a 30 segundos. Técnica. A cada tubo agregar: Tubo 1: 1 ml de reactivo de Seliwanoff, gotas de solución de sacarosa Tubo 2: 1 ml de reactivo de Seliwanoff, gotas de solución de glucosa Tubo 3: 1 ml de reactivo de Seliwanoff, gotas de solución de extracto de uva Calentar con precaución los tres tubos en baño maría a ebullición (Tomar en cuenta precaución 3) 1. ¿Qué cambios observa en cada tubo de reacción? 2. ¿A que conclusión llega sobre los resultados? Parte Experimental: Disacáridos Considerando la estructura química de los disacáridos, explique cómo es de esperar que den las siguientes reacciones para la maltosa, lactosa y sacarosa: 1) Reacción de Molish 2) Reacción de Fehling 3) Reacción de Trommer 4) Reaccion de Seliwanoff Reacción de hidrólisis. Al ser lo disacáridos glúcosidos por excelencia, pueden ser hidrolizados, descomponiéndose en los monosacáridos que los forman fijando una molécula de agua a nivel del enlace o-glucosídico. La hidrólisis de los disacáridos se realiza fácilmente en medio ácido o mediante hidrólisis enzimática. Hidrólisis de la sacarosa: Inversión de la sacarosa Procedimiento: Medir 2 a 5 ml de una solución de sacarosa al 2% y añadir 3 a 5 gotas de HCl concentrado. Llevar a BM de agua hierviente por 20 a 30 min Neutralizar con NaOH al 40%, en presencia de papel de tornasol Sobre el hidrolizado practicar la reacción de Brown, Trommer. 1. ¿Qué cambios observa en el tubo de reacción? 2. Explique y compare los resultados obtenidos en la práctica de la clase anterior cuando se trabajo con extracto de solución de remolacha, y solución de sacarosa sin hidrolizar. LABORATORIO 2: Segunda parte POLISACÁRIDOS Los homopolisacáridos están formados por la unión de un gran número de unidades de monosacáridos, se diferencian de los oligosacáridos por que poseen un número de monómeros superior a 10. La unión entre monómeros es tambien O-glucosídica por perdida de una molécula de agua. Responden a la formula general (C6H10O5)n. Los homopolisacáridos que más abundantes en la naturaleza son el glucógeno, almidón y la celulosa. Parte Experimental: Polisacáridos Reacción general de los almidones 1. Preparación de solución de almidón: Aproximadamente a 30 ml de agua hirviendo añadir 0.5 g de almidón suspendido en agua fría, lentamente y agitando con una varilla de vidrio, dejar hirviendo por 1 min aproximadamente. Se obtiene un líquido claro, que cuando enfría adquiere una viscosidad acentuada. Si se obtiene extracto de papa preparar una solución y practicar la siguiente prueba 2. Prueba del Iodo: Medir 0.1 ml de la solución de almidón preparado, agregar 2 ml de agua destilada - Tubo 1 Medir 0.2 ml de la solución de extracto de papa, agregar 2 ml de agua destilada –Tubo 2 Agregar a ambos tubos 1 a 2 gotas de lugol (Solución de Iodo en IK, sol alcohólica) ¿Qué cambios observa en el tubo de reacción? Calentar en BM hirviente con precaución (No demasiado para evitar la volatización del Iodo) Enfriar ¿Qué observa y por que se produce dichos cambios? ¿Justifique porque? Hidrólisis del almidón Los enlaces O-glucosídicos del almidón; tanto de la amilosa como de la amilopectina, pueden ser hidrolizados por hidrólisis ácida e hidrólisis enzimática. Los productos de la hidrólisis del almidón son las dextrinas y maltosa, que son productos de su hidrólisis parcial. Hidrólisis enzimática. Las alfa-amilasas (ptialina-amilasa salival- y la amilasa pancreática) rompen las moléculas de amilopectina o de la amilasa en unidades de menor peso molecular, las que se denominan dextrinas. Según el grado de hidrólisis se pueden identificar por la prueba del Iodo, las amilodextrinas, que dan color azul con el Iodo; las etridextrinas, que color rojo o amarillo. Cuando la reacción al yodo es negativa, se denominan acrodextrinas. Procedimiento La enzima que se utilizara para este ensayo será la ptialina o amilasa salival 1. Preparación Solución de amilasa salival. Tomar un volumen de 50 ml de agua a temperatura de 40 a 50 ºC, tomar volúmenes de 10 a 15 ml y enjuagar la boca y verter el producto a un frasco de boca ancha, repetir el procedimiento hasta agotar el agua, obteniéndose así una solución de la enzima requerida. 2. En 1 tubo de ensayo medir 4 ml de solución de almidón (sustrato) y añadir 1 ml de solución de alfa amilasa. Incubar a 37ºC. 3. Tomar muestras a diferentes tiempos y realizar la prueba del yodo: Primero a los 5 minutos, 10, 15, 20 minutos. Observar y anotar los fenómenos que se producen durante el ensayo. ¿Qué sucede en cada una de las pruebas con yodo? ¿Que tipo de dextrina esta presente en cada tubo de reacción y porque ¿Por qué se observa una desaparición gradual del color inicial de la reacción- azul-? Justificar. Preguntas generales 1. 2. 3. 4. 5. ¿Que se entiende por Sacarosa invertida? ¿Cual es la enzima que hidroliza la sacarosa? Escriba las reacciones correspondientes ¿Cuál es la función del glucógeno? ¿Qué diferencias existe glucógeno, almidón y celulosa? ¿Qué es el almidón soluble? ¿Cómo se lo obtiene? (No confundir con la solución de almidón) 6. ¿Explique, por qué la solución de almidón da un color azul con el lugol? 7. Si se practicara la reacción de Fehling en el hidrolizado de almidón, es de esperar que de positiva la reacción? Explique por qué?. 8. ¿En que consiste la sacarificación del almidón? 9. Cuando se realiza la hidrólisis ácida del almidón, se llega a obtener glucosa como producto, junto con la maltosa y dextrinas. Cuando se realiza la hidrólisis enzimática, se llega hasta maltosa y dextrina. Explique por qué? 10. ¿Que tipo de azúcares son la maltosa y dextrinas y que aplicaciones industriales y alimentarias tienen? Indicar 2 de cada una