Genetica I 2015 [Modo de compatibilidad]

GENÉTICA BACTERIANA I
Genética microbiana:
• qué son los genes
• cómo se replican
• cómo se transmite la información
a generaciones posteriores o entre
microorganismos
• cómo la expresión de sus información
determina las características particulares
de un organismo.
La información genética contenida en una célula procariota: genoma.
que incluye el “cromosoma”
“cromosoma” y los plásmidos
Los genes: son segmentos de DNA que codifican productos
funcionales y que están contenidos en los cromosomas
•Cromosoma procariótico:
•Única hebra de DNA bicatenario
•Haploides
•Circular y covalentemente cerrado
•Superenrollamiento negativo
•Transporta toda la información genética
necesaria para todas las estructuras y
funciones de la célula
•E. coli:
coli: casi 5000 kpb de DNA
•No posee envoltura nuclear
•Cromosoma eucariótico:
• DNA bicatenario lineal
•Múltiples cromosoma (S.
(S. cereviseae:
cereviseae: 8 p)
•Poseen histonas (nucleosoma)
•Núcleo con envoltura nuclear
•Diploides
Tomado de Brock. Microbiología de los microorganismos. 12°
12° edición
Gen: unidad de la herencia, segmento de DNA que especifica una
proteína, a través del RNAm, ó un tRNA, un rRNA, o cualquier otro RNA
no codificante.
Es responsable de:
- las características estructurales y metabólicas de un organismo
- la transmisión de estas características de una generación a otra.
Genoma: conjunto de genes contenidos en una célula ó en un
virus
Genotipo: constitución génica precisa de una célula.
Fenotipo: características observables tanto morfológicas como
fisiológicas
Gen: DNA: acido desoxirribonucleico
Secuencias de bases:
Purinas: adenina y guanina
Pirimidinas: timina y citosina
Solo se transcribe una de las dos
cadenas
RNAm: codifica para uno ó mas
proteínas
tRNA y rRNA: actúan en la síntesis
de proteínas, no codifican
información genética para la
fabricación de éstas.
Cada grupo de tres bases de una
molécula de RNAm codifica un solo
aminoácido, este triplete: codón
El código genético se traduce por el
sistema de síntesis de proteínas:
ribosomas (proteínas y rRNA),
tRNA y factores de transducción
Procariotas
Eucariotas
• Haploide
• Haploide - diploide
• 1 cromosoma circular
• varios cromosomas lineales
• 105 - 106 pb
• 107 – 109 pb
• casi totalmente secuencias
codificadoras y de regulación
• familias multigénicas y
secuencias redundantes
• Ausencia de intrones
• Presencia de intrones
• Algunos genes organizados en
operones: ARN policistrónico
• Unidades de transcripción simples
• transcripción
transcripción--traducción
acopladas
• regulación en etapas de
maduración de ARNm
Borrelia burgdorferi : 1 lineal,
Rhodobacter sphaeroides: 2 circulares
Saccharomyces cerevisiae 16,
Giardia lamblia 4
En procariotas
. transcripcióntranscripción-traducción
acopladas
. ausencia de intrones
Expresión génica se regula
principalmente en la
transcripción.
En procariotas: a partir de una
molécula de DNA se transcriben
muchas moléculas de RNAm
diferentes. Un solo RNAm lleva
la información de varios genes,
mas de una región codificadora
Estructura del ADN
Estructura del ADN
Tamaño de una molécula de DNA: E. coli:
4.640.000 pb ó 4.640 kpb ó 4,64 Mpb
(1000pb ó 1kpb ó kb)
Estructura secundaria, repeticiones invertidas y estructuras tallo bucle:
Es habitual en el DNA y RNA
Las repeticiones invertidas
en el ADN son sitios de unión
frecuentes para proteínas
especificas de unión al ADN
que regulan la transcripción.
Superenrollamiento del DNA:
El DNA de doble cadena es retorcido aún
más.
Topoisomerasas clase I: cortan una sola
hebra de DNA, elimina el
superenrollamiento adicional en el DNA,
lo relaja
Topoisomerasas clase II: cortan ambas
hebra de DNA e introduce
superenrrollamiento negativo en el DNA.
Para evitar que todo el cromosoma
bacteriano se relaje cada vez que se
realiza una muesca, se organiza en
dominios de superenrollamiento,
estabilizado por proteínas de unión
especificas.
Superenrollamiento: para empaquetar el
DNA en el interior de la célula
Relajación: es necesaria para la replicación y
la transcripción.
En bacterias: DNA girasa (topoisomerasas clase II) : introduce
superenrollamiento negativo en el DNA.
Algunos antibióticos inhiben la topoisomerasas clase II
Principios
Básicos de la replicación del DNA
P
r
i
n
c
i
p
i
o
s
Cadena parental
B
a
c
i
Nueva
s
o
cadena
complementaria
Nueva cadena
complementaria
Replicación semiconservativa
-La adición de un nucleótido requiere de un
grupo hidroxilo libre en el extremo 3’.
-El 5’-trifosfato de desoxinucleósido se
incorpora al 3´- hidroxilo de nucleótido
anterior
-Replicación procede siempre del extremo
fosfato 5´ al extremo con el hidroxilo 3´.
-DNA polimerasas sintetizan DNA en
dirección 5´
3´ y añaden nucleótidos a un
grupo 3’ ya existente.
-Cebador: molécula de ac. nucleico a la cual
la enzima pueda añadir un nucleótido.
Fragmento corto de RNA, sintetizado por la
primasa.
Horquilla de replicación: zona de DNA
desenrrollado por la DNA helicasa
Proteína de unión a cadena sencilla:
estabiliza el DNA monocatenario.
En procariotas existe un solo punto
donde puede iniciarse, origen de la
replicación, secuencia especifica de
DNA de 250 bases reconocida por
proteínas especificas de iniciación:
- Dna A, Dna B (helicasa), DnaC
(proteína cargadora de la helicasa).
Se cargan dos helicasa, cada una en
direcciones opuestas, dos primasas y
dos DNA polimerasas.
La replicación se inicia en las dos
cadenas sencillas.
Cadena avanzada
Cadena retrasada: no hay 3’OH libre.
Múltiples cebadores de RNA.
Fragmentos de Okasaki.
DNA pol III ó Dna E: añade
desoxirribonucleótidos hasta
alcanzar el DNA sintetizado
previamente.
DNA pol I: sintetiza DNA, es
exonucleasa 5’----3’, que elimina el
cebador.
DNA ligasa: sella la muesca entre un
5’ PO4 y 3´OH.
Tres métodos generales de
replicación:
• El método θ (theta): dos puntos
de crecimiento
• El método σ (sigma): un punto de
crecimiento
• El método (lineal): varios puntos
de crecimiento
El método θ (theta): dos puntos de
crecimiento
Cromosomas y plásmidos de Gram –
(cromosomas circulares):
replicación es bidireccional, dos horquillas de
replicación que se mueven en sentidos opuestos,
lo que da origen a estructuras theta. Permite al
DNA replicarse lo mas rápido posible por medio
de múltiples horquillas de replicación
El método σ (sigma)
Replicación por círculo rodante
un punto de
(plásmidos en Gram +, algunos
crecimiento:
virus y conjugación).
La cadena positiva de la forma replicativa es
cortada (Proteína A), queda libre el extremo 3’ y
puede usarse como cebador para la síntesis de
una nueva cadena. La rotación continuada del
circulo conduce a al síntesis de una estructura
lineal de cadena sencilla. La proteína A corta y
liga los extremos de la cadena generando una
molécula de DNA de cadena sencilla.
Velocidad : 45 Kb/min a 37ºC, desenroscar:4500 vueltas /min
El método (lineal):
Varios puntos de crecimiento
-Microorganismos eucariotas y
algunos virus y bacterias
-Se utiliza un cebador proteico
-DNA polimerasa añade la base a
un grupo OH presentes en
proteínas especificas cebadoras
que se unen al extremo 5’. No se
eliminan.
-100 nucleótidos/seg
- Sitios específicos de replicación
- Un solo punto o cientos
OH
•Parada de replicación: las dos horquillas de replicación chocan
cuando los dos círculos de DNA están completos. Secuencias Ter
reconocidas por proteínas llamada Tus que bloquean el avance,
Topoisomerasa IV; separa las dos moléculas de DNA entrelazadas
para que se divida en cada célula hija (Proteína Fts)
Modelo actual de la replicación en
E. coli (Replisoma)
• Las topoisomerasas reduce la tensión
producida en el desenrollamiento de la
hélice (DNA girasa ó Topoi II)
• La helicasa abre y la primasa ceba
(primosoma)
• Las proteínas de unión a ADN
mantienen la estabilidad del ADN
simple hebra
• Holoenzima
Holoenzima::
dos
DNA
Pol
III
conectadas por un dímero
• La polimerasa en la hebra conductora
sintetiza una hebra continua
• La polimerasa en la hebra retrasada se
mueve en la dirección opuesta
opuesta:: sintetiza
el ADN en fragmentos de Okazaki
• Al completar cada fragmento se disocia
del ADN pero se mantiene el complejo
enzimático para hacer la síntesis de un
nuevo fragmento.
fragmento.
Corrección de errores en la replicación del DNA:
Pol I y Pol III: poseen actividad exonucleasa 3’----------5’ que elimina un
nucleósido equivocado.
Pol I : poseen actividad exonucleasa 5’---------- 3’ que elimina e cebador.
RNA: contiene ribosa y uracilo. Monocatenario
•Otras clases de RNA: implicados en regulación
RNA polimerasa no necesita de cebadores.
Holoenzima RNA pol: cinco subunidades
Nucleo: sintetiza RNA
Factor sigma : reconoce el sitio en el DNA para
el comienzo de la síntesis de RNA.
Dentro de la secuencia del
promotor existen secuencias
mas cortas y altamente
conservadas que son
reconocidas por el mismo
factor Sigma : Secuencias
consenso.
Estas se sitúan antes del
inicio de la transcripción:
Región -10: caja Pribnow
Región -35.
La cadena que se transcribe
es la de abajo (verde claro)
Alternativos
Las repeticiones invertidas en el
DNA transcripto forman una
estructura tallo bucle que termina
la transcripción cuando va
seguida de una serie de uracilos
Unidad de transcripción: unidades que
comienzan en el sitiode inicio y de
terminación enlazadas en el
cromosoma. Algunas poseen un solo
gen, pero otras dos ó mas genes que
se cotranscriben.
La mayoría de los genes codifican para
proteínas, pero otros codifican RNA
que no se transcibe: rRNA y tRNA.
Los procariotas tienen rRNA 16S,
rRNA 23S y rRNA 5S.
Existen agrupaciones que contienen un
gen para cada rRNA y se
cotrancriben.
En procariotas, los mRNA son
degradados rápidamente por
ribonucleasas, mientras que los
rRNA y tRNA no por su estructura
altamente plegada, REGULACION.
El ensamblaje en un operón de genes
relacionados permite su regulación
de forma coordinada por una región
especifica anterior al operón.
Operador o centro de unión del
activador
Un grupo de genes
relacionados entre si y que se
cotranscriben a la vez a partir
de un solo promotor para
generar un sólo mRNA
policistrónico: OPERON
Código genético: correspondencia de cada triplete de tres
bases del mRNA, codón, codifica un aminoácido especifico.
43: 64
Código degenerado: muchos aminoácidos están codificados por mas de un codón.
Un codón del mRNA es reconocido por el apareamiento específico de sus bases
con una secuencia complementaria de tres bases llamada anticodón en los
tRNA.
Transducción:
Transducción: Codones de parada o codones sin sentido: no codifican
ningún aa, indican el final de la traducción: UAA,UAG yUGA
Codon de inicio: AUG.
Fundamental comenzar en el
nucleótido correcto o pauta 0.
La fidelidad del la pauta de lectura
correcta depende de las
interacciones entre mRNA y rRNA,
y del ribosoma que reconoce un
AUG específico en el mRNA como
codón de inicio con la ayuda de
una secuencia situada antes en el
mRNA: Secuencia de ShineDalgarno
Transducción:
tRNA: es especifico tanto para el codón como para su aa correspondiente y son
puestos en contacto por enzimas especificas: aminoacil-tRNA-sintetasas
•Cadena sencilla y estructura
secundaria. 73 y 93 nucleótidos de
extensión
•Regiones doble cadena y bases
inusuales
•Parte variable: anticodon
•Otras partes interaccionan con:
rRNA, componentes proteicos del
ribosoma, proteínas de
transducción no ribosómicas y con
la aminoacil-tRNA-sintetasas
•En el extremo 3’ o brazo aceptor
tienen tres nucleótidos
desapareados: CCA añadidos por la
nucleotidil- transferasa terminal. El
aa se une covalentemente a la
adenosina e incorporado a la
cadena polipeptídica.
Transducción:
Reconocimiento de los t RNA:
Contactos entre sec. nucleotídicas específicas
en el brazo aceptor y bucle D del tRNA y aa
específicos de la sintetasa. Además el anticodon
con su sec. especifica
Activación y carga:
AA + ATP------------- aminoacil-AMP+P-P
Permanece unido a la sintetasa hasta que choca
con el tRNA
aminoacil-AMP + tRNA ---------aminoacil-tRNA +
AMP
P-P es escindido por una pirofosfatasa
Como se utiliza un ATP y se forma un AMP se
necesitan un total de dos enlaces fosfatos para
cargar un tRNA con un aa.
El aminoacil-tRNA abandona la sintetasa y viaja
a ribosoma donde se sintetiza el polipéptido.
Formados por rRNA, proteínas ribosomales y proteínas no ribosómicas. 70S
Iniciación: Se forma el complejo de iniciación:
30S, mRNA, tRNA de formilmetionina y prot. de
iniciación: IF1,2 y 3. GTP. Luego 50S. 70 S
funcional
Sec. De Shine –Dalgarno: sec de 3 a 9 nucleóti.
antes del codón de inicio del mRNA que ayuda a
unirlo al ribosoma. Se encuentra en el 5´mRNA y
es complementario con el 3’ del rRNA 16S, lo que
permite la transducción de mRNA policistrónico,
por reconocimiento de cada codón de iniciación.
Unión de un formilmetionil-tRNA iniciador al
codón de inicio AUG.
Elongación, traslocación y terminación:
mRNA se desliza unido al 30S.
La 50S interacciona con el Trna.
Sitio A (SA): aceptor, se une el nuevo tRNA
cargado por factores de elongación proteicos
(EF-Tu)
Sitio P (SP): péptido, el tRNA sujeta al péptido en
crecimiento.
Prot. no ribosómicas ó factores de elongación:
EF-Tu y EFTs.GTP.
Formación del enlace péptidico.
El tRNA que sujeta al péptido se trasloca del SA
al SP, dejando el SA (EF-G y GTP).
El ribosoma avanza tres nucleótidos y expone un
nuevo codón, empujando el tRNA ahora vacío al
Sitio E.
Finalización: cuando se alcanza el codón de
parada por medio de factores de liberación.
Transducción:
La traducción de varios ribosomas y un solo mRNA: Polisoma.
Aumenta la velocidad y eficiencia de la transducción
Estabilidad vs evolución
mecanismos de reparación = estabilidad génica
mecanismos de variabilidad = base de la evolución
• mutación: modificación heredable en la
secuencias de bases de un genoma
(pequeños cambios en la célula)
• recombinación: intercambio físico de DNA
entre elementos genéticos (grandes
cambios en la célula)
célula)
Mutante: portadores de un cambio en
su genoma, su fenotipo puede estar
alterado.
Cepa salvaje: aislada de la naturaleza.
gen: hisC; prot:HisC; fenotipo: His+:
capaz de sintetizar su propia histidina.
Técnica de réplica en placa:
para detectar mutantes
nutricionales defectivos.
.
Mutaciones seleccionable:
resistencia a los
fármacos de los mutantes con respecto a la
progenie. Ventaja selectiva al mutante.
Mutación no seleccionable: perdida de color
de un organismos pigmentado, no tiene
ventajas ni desventajas sobre la progenie.
(rastreo).
La colonia de la placa madre que esta
ausente en la placa de réplica (mutante) se
puede purificar y caracterizar
Una mutante con una necesidad nutricional
para el crecimiento: auxótrofo y el progenitor
del cual deriva protótrofo.
Ejm: Los mutantes de E.coli con fenotipo His –
son auxótrofos de Histidina
Causas de mutaciones:
•Errores en la replicación del DNA
•Mutágenos: químicos, luz UV o rayos X.
Posibles efectos:
•Sin ningún efecto: mutación silenciosa
•Producción de una proteína defectuosa o
incompleta: mutación de cambio de sentido
ó sin sentido
•Producción de una proteína con función
disminuida
Mutaciones:
Espontáneas: sin intervención humana, radiación natural o radicales de
oxígeno . Errores de apareamiento durante la replicación del DNA.
Inducidas: con intervención humana. Usadas en ingeniería genética
Puntuales: sólo cambian un único par de bases. reversibles
- Sustitución: modificación química del ADN: radicales de O2, (guanina en 8
–hidroxiguanina)
- inserción de una base anómala durante la replicación
- perdida o ganancia de un par de bases
A
G
Transiciones
Transversiones
T
- Inserción
-Deleción
C
Mutaciones por sustituciones de pares de bases:
su efecto en el fenotipo
- Silenciosa (3°
(3° base)
- sin sentido
C
A
- modificadora de función
- supresora de función
- neutrales
De cambio de sentido
1° ó 2° base
Sin
sentido
3°base
Mutaciones de varios pares de
bases
Las inserciones o deleciones afectan
el marco de lectura:
Inserciones: un trozo de DNA se inserta
en un gen.
Deleciones : eliminación de un
fragmento de un gen
VPC
Traslocaciones: gran sección de DNA
cromosómico se desplaza a una nueva
ubicación (reordenaciones por errores
en la recombinación)
Inversiones: en las que la orientación
de un segmento del DNA cambia con
respecto al DNA circundante.
Las mutaciones por desplazamiento en
la pauta de lectura provocan cambios
mas drásticos en el DNA, a menudo
tienen como resultado la pérdida
completa de la funcionalidad del gen.
VLV
VL
Mutagénesis dirigida:
proceso para llevar a
cabo mutaciones
especificas en el genoma
(tecnología de DNA
recombinante y DNA
sintético)
Frecuencia de mutaciones
espontáneas en un gen típico
de 1000 pb: 10-6 y 10-7 por
generación ó 10-6 y 10-7 Kpb
durante un sólo ciclo de
replicación.
Mutagénesis por
transposones:
proceso que utiliza
elemento transponible
que se inserta en
cualquier lugar en un
gen pudiendo producir
la perdida de la
funcionalidad de dicho
gen.
La mutaciones puntuales son, normalmente reversibles,
mediante un proceso de reversión.
Revertiente: cepa en la que se reestablece el fenotipo original que había cambiado
en el mutante
• Revertientes de un mismo sentido: la mutación que restura la actividad se
produce en el mismo sitio que la mutación original. Si la retromutacion no sólo
es en el mismo sitio, sino que además restablece la secuencia original:
revertiente verdadero.
• Revertientes de segundo sitio: la mutación se produce en un sitio diferente en el
DNA. Pueden causar restauración de un fenotipo salvaje si funcionan como
mutaciones supresoras (mutaciones que compensan el efecto de la mutación
original y restablecen el fenotipo original)
– 1- una mutación en algún lugar del mismo gen que restaura la función
enzimática. (Ej. desplazamiento en la pauta de lectura)
– 2- una mutación en otro gen que restablezca la función original del gen
mutado
– 3- una mutación en otro gen cuyo resultado es la producción de una enzima
que sustituya la enzima mutada.
Las delecciones e inserciones provocan
cambios mas drásticos en el DNA, a
menudo tienen como resultado la pérdida
completa de la funcionalidad del gen. Son
irreversibles, salvo por recombinación
A diferencia de las mutaciones puntuales,
las delecciones a gran escala no revierten,
pero las inserciones a gran escala pueden
revertir como resultado de una deleción
posterior que elimine la inserción.
Las mutaciones pueden ser revertidas o
suprimidas por una segunda mutación
Reversión: restaura secuencia original
Supresión intercistrónica: mutación en otro locus
restablece el fenotipo
Supresión intracistrónica: mutación en el mismo
locus restablece el fenotipo
Las mutaciones pueden ser inducidas por
agentes químicos, físicos o biológicos.
Mutagénesis: Mutágenos
Mutagénesis:
químicos:
• análogos de base
nucleotídica
• productos
alquilantes
(nitrosoguanidina
nitrosoguanidina))
• productos que
reaccionan con el
ADN
Sustitución de
pares de bases
• agentes
intercalantes
(acridina, Br de etidio
etidio))
desplazamiento del
marco de lectura
inserción o deleción
HNO2 desamina A, C y G
Adenina
Citocina
Guanina
hypoxantina
uracilo
xantina
Análogos de bases
Citocina
Adenina
5-Br uracilo
(ceto)
Guanina
5-Br uracilo (enol)
Adenina
Citocina
Tautomería de las bases: mutaciones espontáneas
Citosina y timina presentan tautómeros (poco frecuentes)
El patrón de donores y aceptores de puente de hidrógeno de
los tautómeros genera apareamientos C-A y T-G
introduciendo errores en la replicación.
¿Qué ocurre cuando estas formas tautoméricas son
incorporadas al ADN en la etapa de replicación?
G
G
C
T*
G
C
G
T
G
C
G
C
A
T
G
C
G
C
mutante
Agentes físicos: radiaciones
Radiaciones no ionizantes ó ultravioleta:
Las bases del DNA absorben
fuertemente a 260 nm.
Formación de dímeros de pirimidina: se
unen covalentemente entre si, (CT) en la
misma cadena de DNA, lo que impide el
paso o aumenta la probabilidad de
lectura errónea por la DNA polimerasa.
Muy útil para aislamiento de células
mutantes a dosis adecuadas.
Radiaciones ionizantes: rayos X y γ
Producen ionización del agua: radicales
libres OH. que reaccionan con
macromoléculas; DNA, produciendo
lesiones
Radiaciones no ionizantes:UV
Produce dímeros de
timina o pirimidinas
Deformación de la
hélice del ADN que
induce errores durante
la replicación
Reconocimiento por
sistema reparador
La reparación es
susceptible de cometer
errores
Sistemas de reparación del DNA
Si el DNA se puede corregir antes de que la célula se divida, no se producirá
mutación.
Procesos de reparación del DNA: libres de errores
•Reversión directa
•Reparación de daño en una sola cadena
•Reparación de daño en ambas cadenas
•Reversión directa
Se aplica a las bases que han sido alteradas químicamente: eliminación química
directa del grupo alquilo en bases alquiladas. No hace falta una cadena molde.
Foto reactivación: corta los dímeros de pirimidina por la fotoliasa
•Reparación de daño en una sola cadena: se elimina el DNA dañado de una sola
cadena y la cadena opuesta intacta se usa de molde para reemplazar las bases
que faltan (reparación de escisión de bases y apareamientos defectuosos)
•Reparación de daño en ambas cadenas: se da en el entrecruzamiento y cortes en
ambas cadenas que son reparadas por mecanismos de recombinación y puede
ser necesaria la reparación propensa a errores.
Mutaciones surgidas de la
reparación del DNA: el sistema
SOS
Cuando se produce un daño a gran
escala en el DNA se utiliza un
sistema de reparación
propenso a errores, que
permite que la célula se
replique y se divida pero lo
hace a costa de introducir
mutaciones él mismo: sistema
regulador SOS que realiza la
reparación sin necesidad de
una cadena molde lo que
provoca muchas mutaciones.
El Sistema SOS es un regulón:
genes regulados de manera
coordinada y que se
transcriben por separado.
Lex A: proteína represora, impide
la expresión del regulón
Rex A: se activa por a presencia de
daño en el DNA.
La forma activada de RexA
estimula la autoinactivación de
LexA por corte, lo que
desreprime a SOS, permitiendo
la expresión coordinada de
proteínas de reparación de
DNA.
DNA polimerasa V
El ADN está expuesto a numerosos factores que promueven cambios en la
información.
La célula cuenta con diferentes mecanismos de reparación o de corrección
que en
en general utilizan la hebra sana para reparar la dañada.
Los sistemas de corrección pueden ser más o menos proclives a error:
Subunidad proteica de DNA pol III codificada por el gen dnaQ puede sufrir
mutaciones que conducen a cepas mutadoras o hipermutadas
Sistema regulador SOS. Rec A y LexA.
LexA. DNA pol IV y V
V: implicados en la
sintesis translesión.
Cuando los cambios no son corregidos resultan en mutaciones que pueden
afectar una función dada.
Menos de 1 en 1000 de los cambios introducidos en el ADN son mantenidos
mantenidos,,
el resto reparados.
reparados.
Test de Ames: para detectar químicos mutágenos y
carcinógenos: buscar un aumento en la tasa de retromutación en cepas
auxótrotofas en presencia de un mutágeno
Oxigenasas de
función mixta:
enzimas hepáticas
que activan
mutágenos o
carcinógenos
En la presencia del carcinógeno, la Salmonella His- (cepa auxótrofa), no crece
en el medio mínimo, pero inducirá una retromutación ó reversión a his+
revertiendo el crecimiento por el compuesto químico