master en zootécnia y gestión sostenible: ganadería ecológica e
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MASTER EN ZOOTÉCNIA Y GESTIÓN SOSTENIBLE: GANADERÍA ECOLÓGICA E INTEGRADA TRABAJO FIN DE MASTER SUPLEMENTACIÓN DE GLUTAMATO, INICIO DE PUBERTAD Y METABOLITOS SANGUINEOS EN CABRAS: GLUCOSA Y COLESTEROL PRESENTA: ING. MARÍA DE JESÚS SOTO SÁNCHEZ DIRECTOR: DR. CESAR A. MEZA HERRERA TUTORES: DR. ANTON GARCÍA MARTÍNEZ DR. JUAN MANUEL SERRADILLA MANRIQUE El presente trabajo de fin de master “SUPLEMENTACIÓN DE GLUTAMATO, INICIO DE PUBERTAD Y METABOLITOS SANGUÍNEOS EN CABRAS: GLUCOSA Y COLESTEROL”, fue realizado por la Ing. María de Jesús Soto Sánchez, Dirigido por Ph.D. Cesar Alberto Meza Herrera, y asesorado por los C. Dr. Antón Rafael García Martínez y Dr. Juan Manuel Serradilla Manrique. Como requisito parcial para obtener el grado de: MASTER EN ZOOTÉCNIA Y GESTIÓN SOSTENIBLE: GANADERÍA ECOLÓGICA E INTEGRADA Córdoba España, Octubre del 2012 i Se hace patente un reconocimiento al apoyo recibido Para el desarrollo de la presente investigación: Programas de becas mixtas en el extranjero, para becarios CONACYT Nacionales 2011-2012. Programa de Maestría en ciencias en Recursos naturales y medio ambiente en zonas áridas 2011-2012 (UACH-URUZA). Dirección general de investigación y posgrado de la universidad autónoma Chapingo. Instituto de estudios de posgrado de la universidad de Córdoba España (IDEP-UCO). ii AGRADEMIENTOS A Dios por ser mi guía y a mi Familia por su apoyo incondicional Al Dr. Cesar A. Meza Herrera quien deposito sobre mí su confianza y me ha alentado con sus conocimientos a seguir preparándome profesionalmente, además de brindarme la gran oportunidad de llevar a cabo este trabajo de Máster. Gracias al Máster en Zootécnica y Gestión Sostenible: Ganadería Ecológica e Integrada del departamento de producción animal de la Universidad de Córdoba España. A todos los profesores que tuve la gran oportunidad de aprender de ellos, al director del máster y parte de mis tutores Dr. Antón García, a mi otro tutor pero no menos importante Dr. Juan Manuel Serradilla Manrique. Un agradecimiento muy especial Dr. Juan Vicente Delgado, que fue de mucho apoyo gracias por mostrarme otra manera de ver las cosas y sin dejar de mencionar a la secretaria del máster Ana Belén gracias por tu paciencia y tu alegría que con ella me contagiabas de buen humor. A todos y cada uno de los compañeros del máster hicimos muy buen grupo. iii ÍNDICE DE CONTENIDO ÍNDICE DE CUADROS............................................................................................................... vi ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................................. vi ÍNDICE DE GRÁFICAS .............................................................................................................. vi CUADRO DE ABREVIATURAS................................................................................................ vii I. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1 II. HIPÓTESIS .......................................................................................................................... 4 III. REVISON BIBLIOGRÁFICA ............................................................................................... 5 3.1 Importancia de la producción caprina en México ...................................................... 5 3.2 Etapa de Pubertad ........................................................................................................... 7 3.3 Estacionalidad reproductiva en la cabra .................................................................... 8 3.3.1 Efectos de Fotoperiodo........................................................................................ 9 3.4 Estado nutricional y la relación con la reproducción............................................... 10 3.5 La Glucosa ................................................................................................................. 11 3.5.1 Rol de la Glucosa en la Reproducción ............................................................. 12 3.5.2 La glucosa sobre los neurones de GnRH ........................................................ 13 3.6 El Colesterol ............................................................................................................... 13 3.6.1 El colesterol como precursor de hormonas ..................................................... 14 3.7 Los aminoácidos excitadores.................................................................................... 16 3.8 Neurotransmisores..................................................................................................... 17 3.8.1 Aminoácido Gluatamato .................................................................................... 17 3.8.2 El glutamato en la reproducción ....................................................................... 18 IV. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................ 20 4.1 Ubicación Geográfica ................................................................................................ 20 4.2 Los Animales y su Alimentación ............................................................................... 20 4.3 Diseño de tratamientos.............................................................................................. 21 4.4 Preparación de la solución buffer ............................................................................. 21 4.5 Registro de peso vivo (PV) y condición corporal (CC) ........................................... 21 4.6 Obtención de Muestras ............................................................................................. 22 4.7 Evaluación de la Actividad Reproductiva ................................................................. 22 4.8 Cuantificación de metabolitos ................................................................................... 23 iv 4.9 Análisis Estadístico .................................................................................................... 23 4.9.1 V. Modelos estadísticos ......................................................................................... 24 RESULTADOS .................................................................................................................. 25 VI. DISCUSIÓN ....................................................................................................................... 28 VII. CONCLUSIÓNES .............................................................................................................. 32 VIII. LITERATURA CONSULTADA ......................................................................................... 33 v ÍNDICE DE CUADROS Titulo Pág. Cuadro 1. Contenido de materia seca (MS %), fibra neutro detergente (FND %), fibra acido detergente (FAD %), digestibilidad in vivo (DGVI %) y proteína cruda (PC) de la alfalfa en la dieta ofrecida durante el periodo experimental. 20 Cuadro 2. Medias de mínimos cuadrados para peso vivo (PV4), condición corporal (CC4), concentraciones séricas de glucosa (Glucosa mg dL-1) y colesterol (Colesterol mg dL-1) y Porcentaje de cabras en pubertad (Pubertad %). 26 ÍNDICE DE FIGURAS Titulo Pág. Figura 1. Producción nacional de leche fresca caprina en México 2006-2010 6 Figura 2. Mecanismos de retroalimentación (feed-back) del eje neuroendocrino 8 Figura 3. Mecanismo Fisiológico de la acción del fotoperiodo. THR: tracto retinohipotalámico, NCS: núcleo supraquiasmatico, NPV: núcleo para ventricular, GCS: ganglio cervical superior, GP: glándula pineal, NA: noradrenanina, DA: dopamina, STH: serotonina, GnRH: hormona liberadora de gonadotropinas, LH: hormona luteinizante, FSH: Hormona foliculoestimulante 10 Figura 4 Estructura de la Glucosa 12 Figura 5.Estructura del Colesterol 14 Figura 6.Síntesis de Andrógenos y Estrógenos (Tomado de Yen 2001) 16 Figura 7. Receptores de glutamato y plasticidad sináptica 18 ÍNDICE DE GRÁFICAS Titulo Pág. Gráfica 1. Concentraciones séricas de colesterol a través del tiempo en cabras suplementadas con glutamato (AAE) y grupo control (CONT) bajo fotoperiodo natural decreciente en la Comarca Lagunera. 27 Gráfica 2. Concentraciones séricas de Glucosa a través del tiempo en cabras suplementadas con glutamato (AAE) y el grupo control (CONT) bajo foto periodo natural decreciente en La Comarca Lagunera. 27 vi CUADRO DE ABREVIATURAS ABREVIATURAS ESPAÑOL INGLES 17 red Enzima 17 reductasa Reductase enzyme 17 17b-HSD 17b-hidroxiesteroide deshidrogenasa 17b-hydroxysteroid dehydrogenase 20a-HSD 20a-hidroxiesteroide deshidrogenasa 20a-hydroxysteroid dehydrogenase 3b-HSD 3b-hidroxiesteroide deshidrogenasa/delta4delta5 isomerasa 3b-hydroxysteroid deshidrogenasa/delta4delta5 isomerase 5a-reductasa Enzima 5a-reductasa 5a-reductase enzyme 5b-reductasa Enzima 5b-reductasa 5b-reductase enzyme AAE Aminoacido excitador Excitatory amino acid Ca2 Calcio Calcium °C Grados centígrados Centigrade grades E2 Estrógeno Estrogen CONT Control Control ml Mililitro Milliliter CC Condicion corporal Body condition score CYP11A o P450 scc Citocromo del clivaje de la cadena lateral del colesterol Cytochrome cleavage of the side chain of cholesterol CYP17 17a hidroxilasa /C-17,20 liasa 17th hydroxylase / C-17, 20 lyase CYP17 o P450C17 Citocromo P450 17a-hidroxilasa/17,20 liasa Cytochrome P450 17a-hidroxilasa/17, 20 lyase CYP19 Enzima aromatasa aromatase enzyme FSH Hormona Folículo estimulante Follicle-stimulating hormone GABA Acido amino buritico Gamma-Aminobutyric acid Glu Glutamato Glutamate GluR Receptor de Glutamato Glutamate receptor GLUT Transportador de glucosa Glucose transporter GnRH Hormona Liberadora de Gonadotrofinas Gonadotropic-releasing hormone IGF-1 Factor de Crecimiento similar a la Insulina-I Like Growth Factor-I Insulin LH Hormona Luteinizante Luteinizing hormone NMDA N-metil-D-aspartato N-methyl-D-aspartate Na Sodio Sodium NADP Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NADPH Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato reducido Reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate ng Nanogramos Nanogram vii NAG N-acetilglutamato N-acetylglutamate NAGS N-acetilglutamato sintetasa N-acetylglutamate synthetase P4 Progesterona Progesterone PC Proteína cruda Crude protein PV Peso vivo Live weight RIA Radioinmunoanálisis Radioimmunoassay SNC Sistema Nervioso Central Central nervous system StAR Proteína reguladora de la esteroidogénesis aguda Regulatory protein of acute steroidogenesis ANOVA Análisis de la varianza Analysis of Variance viii I. INTRODUCCIÓN En el mundo, las zonas áridas representan más del 60% de la superficie terrestre, por lo que el desarrollo de sistemas de producción sustentables se ha convertido en una necesidad (Torres et al., 2009). El principal problema que se presenta en las zonas áridas y semiáridas en México con los animales en pastoreo, es el largo periodo de sequia que abarca en general los meses de enero a junio, época en la cual el contenido de nutrientes de las principales especies forrajeras baja en tal forma que no cubren los requerimientos mínimos para una adecuada nutrición. (Meza et al., 2004 & 2007; González et al., 2010; Meza et al., 2010a). En ecosistemas áridos, el sistema de producción caprino ha tomado gran importancia debido al desarrollo de múltiples estrategias por parte de la cabra para sobrevivir en dicho entorno agroecológico, como son la reutilización del nitrógeno (urea) disponible, hábitos alimenticios (ramoneo), un uso muy eficiente del agua metabólica además de mostrar una estacionalidad reproductiva. En efecto, esta especie animal sacrifica la reproducción para asegurar reservas energéticas y poder enfrentar la época de restricción nutricional (Gonzalez et al., 2010). En general, bajo esquemas semi-extensivos y extensivos, la especie caprina inicia la pubertad entre los 10-12 meses de edad. Sin embargo, si dicha edad cronológica coincide con la época de escasez de forraje, el caprino deberá esperar hasta la próxima época de lluvias y crecimiento de especies arbustivas y herbáceas, para 1 alinear de esta forma el inicio de la función reproductiva con una mayor disponibilidad de alimentos (Urrutia, 2009). Desde un punto de vista neuroendocrino, la pubertad puede ser definida como la reactivación de los neurones GnRH y por lo tanto con el establecimiento de la ciclicidad ovárica (Meza, 2008; López et al., 2009; Torres et al., 2009; Meza et al., 2010a). Existe una grupo de señales ambientales y génicas que afecta la reactivación de los neurones GnRH y la expresión de la pubertad, incluyendo perfil endocrino, época del año, estado metabólico, edad, estrés y peso vivo entre otros (Gonzalez et al., 2010). Lo anterior hace necesario el estudio de la relación entre la disponibilidad de alimentos, el estado metabólico y el inicio de la función reproductiva, con objeto de diseñar estrategias que nos permitan hacer entrar a las cabras a etapa reproductiva a una edad más temprana y estar en posibilidad de lograr concepciones en épocas del año fuera del tiempo normal de reproducción; lo anterior es de particular importancia dentro del esquema de mercadeo de productos caprinos (López et al., 2009). La pubertad es el periodo en el que se presenta un incremento en la liberación de GnRH del hipotálamo (Ojeda, 2006), sin embargo, los mecanismos primarios responsables de este incremento no están bien definidos. En un estudio realizado en ratas ovariectomizadas tratadas con estrógenos se observó un aumento preovulatorio de gonadotropinas inducida por progesterona. La fuente de esa progesterona en estas condiciones fisiológicas podría ser del ovario y/o la glándula suprarrenal. Dado que las neuronas de GnRH no poseen receptores a 2 estrógenos ni a progesterona, su función es modulada por neurotransmisores del sistema nervioso central (SNC) y/o otros productos neurosecretores (Choi, 2008). Entre estos neurotransmisores, están los aminoácidos excitadores (AAE; glutamato y aspartato), los cuales juegan un papel importante en la regulación de la liberación pulsátil de gonadotropinas, y la inducción de la pubertad. (Torres et al., 2009). El glutamato, es el principal aminoácido excitador del SNC, ya que tiene un marcado efecto estimulador sobre el eje reproductivo en mamíferos. El glutamato y sus receptores están involucrados en la maduración y mantenimiento de los mecanismos neurales que gobierna el pico preovulatorio de LH en roedores jóvenes en edad reproductiva (Genevieve et al., 2005; Darrell y Virendra, 1995). En el mismo sentido, las hormonas esteroidales son responsables de activar los procesos de espermatogénesis y foliculogénesis, además de que dichas hormonas están involucradas en el comportamiento sexual de machos y hembras (Meza et al., 2010a). Por su parte, el colesterol es precursor de estas hormonas esteroidales, por lo que es necesario mantener adecuados niveles séricos que contribuyan al establecimiento de la ruta esteroidogeneica (Gimpl, 2007). En el mismo sentido, la glucosa es la principal fuente energética requerida para llevar a cabo los procesos y mecanismos fisiológicos normales en el eje hipotálamo-hipófisis-gónadas, tanto en hembras como machos (Burdakov, 2010). Asimismo, glucosa y colesterol están positivamente relacionados con el estado nutricional, y a su vez el estado nutricional se correlaciona postivamante con la eficiencia reproductiva (Scaramuzzi, 2006). 3 El objetivo del presente estudio fue determinar si la suplementación con glutamato promueve un adelanto de la pubertad y esto a su vez se relaciona con incrementos en los niveles séricos de glucosa y colesterol, al estar positivamente relacionados con un balance energético positivo y con un incremento en la función reproductiva. II. HIPÓTESIS La suplementación con glutamato promueve un inicio precoz de la pubertad, y esto se relaciona de manera positiva con los niveles séricos de colesterol y glucosa en en cabras prepúberes. 4 III. REVISON BIBLIOGRÁFICA 3.1 Importancia de la producción caprina en México La cabra probablemente fue de los primeros rumiantes en ser domesticados, se considera que fue domesticada hace más de 10,000 años en la antigua Mesopotamia (Mellado, 1997) y ha sido una de las especies más útiles al hombre, sobre todo como proveedoras de carne y leche. Durante el siglo pasado, en el periodo de las grandes guerras y los periodos de posguerra, la crianza de caprinos se incrementó para aminorar la escasez de leche. Sin embargo durante los últimos años, su importancia como especie doméstica con un gran potencial productivo y reproductivo ha sido aislada, aunque ofrece aspectos importantes en cuestiones de desarrollo principalmente por su alto potencial productivo además de que sus características organolépticas están bien definidas (Aréchiga et al., 2008). Los caprinos, fueron introducidos en México por los Españoles, probablemente la mayoría de los animales fueron embarcados en las Islas Canarias, aunque los estudios genotípicos y fenotípicos, indican una mayor influencia Navarra y Andaluza de las cabras originarias que llegaron a nuestro país, habiéndose adaptado desde entonces en gran parte al territorio nacional (Mayén, 1989; citado por Guerrero, 2010). Según las últimas estimaciones del Sistema de Información Agrícola y Pesquera de SAGARPA, en México hay una población de 8,993,221 cabras y el 87% de cabezas de esta especie se ubica en el área rural, en las regiones áridas y semiáridas. Las cabras producen 5 anualmente 163.6 millones de litros de leche. Dentro de los Estados más productores de leche, sobresalen Coahuila con el 37.2 % del total nacional, Durango 21%, Guanajuato 16.8%, Nuevo León 9.9%, Jalisco 3.7% y Zacatecas 3.2 % (SIAP, 2010). Miles de toneladas Leche de Cabra México 170 165 167 165 164 165 161 160 155 2006 2007 2008 2009 2010 Año Figura 1. Producción nacional de leche fresca caprina en México 2006-2010 Aunque las cabras contribuyen relativamente poco a la producción nacional de leche y carne (120-150 millones de litros y 36,000 toneladas cada año, 2% y 1% respectivamente), son importantes desde el punto de vista social, ya que representan un medio de ingreso y fuente de alimentos para numerosas familias campesinas, principalmente en las zonas áridas y semi-áridas del norte de México y en la Sierra Madre del Sur entre Puebla, Oaxaca y Guerrero (SAGARPA, 2010). En la mayor parte de los estados de México predominan los sistemas extensivos y semi-intensivos de producción caprina, quedando relegada la producción intensiva característica de regiones como La Laguna (Salinas, 1993; Echavarría et al., 1999). 6 Entre los sistemas semi-intensivos destaca el tipo de pastoreo trashumante, en el que se pastorea el matorral durante la época de lluvias, luego los residuos de cosecha al final del ciclo agrícola de primavera-verano y finalmente en estabulación se dan alimentos caseros y comerciales durante los meses restantes. Son negocios familiares de campesinos que tienen también actividades agrícolas o de otro tipo y venden ocasionalmente su fuerza de trabajo. Estos sistemas se establecen alrededor de industrias que les compran la leche (Echavarría-Cháirez, et al., 1999). 3.2 Etapa de Pubertad Independientemente del sistema de producción y la función objetivo del mismo, el inicio de la función reproductiva o pubertad, es una eta crucial en la definición de la viabilidad de cualquier sistema de producción, ya que en esta etapa se inicia el proceso de producción ya sea orientado a carne o leche (Gonzalez et al., 2011). Se ha demostrado que en el proceso de la pubertad o madurez sexual se presenta gracias a la activación del sistema secretor de la hormona liberadora de las gonadotropinas (GnRH). Una serie de estudios en mamíferos adultos han aportado información sobro el conjunto de compuestos que intervienen en la secreción de GnRH hormonas, aminoaciodos, péptidos entre otras (Terasawa 2001) La presencia de la pubertad está definida por la reactivación del eje hipotalamo-hipofisis-gonadas; sin embargo previamente a esta etapa, la secreción de GnRH sobre la hipofisis está significativamente inactiva (Meza, 2008). Por lo 7 anterior, al inicio de la pubertad, la función hipotalámica está disminuida y la amplitud de los pulsos de GnRH se incrementa gradualmente. Los niveles de las hormonas gonadotrópicas folículo estimulante (FSH) y luteinizante (LH) se incrementan paulatinamente durante la pubertad estimulando la maduración de folículos y la producción de estrógenos en los ovarios (Roth et al., 2001). Figura 2. Mecanismos de retroalimentación (feed-back) del eje neuroendocrino 3.3 Estacionalidad reproductiva en la cabra En muchas especies animales para asegurar la sobrevivencia cuando los recursos alimenticios en su medio ambiente son escasos limitan su función reproductiva en forma estacional. Estas adaptaciones son causadas principalmente por el fotoperiodo, induciendo alteraciones en las secreciones de melatonina por la glándula pineal (Moffatt- Blue et al, 2006). El fotoperiodo es una de las señales más importantes para la regulación anual para estimular o inhibir la 8 actividad reproductiva y también se involucra en el crecimiento en algunos mamíferos (Gazal et al., 2002). Aunque el fenómeno de la estacionalidad reproductiva en los trópicos no está bien definido, existe cierta tendencia en la cabra a presentar mayor actividad reproductiva en ciertos periodos del año, cuando las condiciones del medio ambiente son más favorables, para el mantenimiento de la gestación y la crianza de sus crías (Wilkins, 1990; Thatcher et al., 1994). La mayoría de razas caprinas y ovinas originarias del norte de Europa muestran variaciones importantes en el estro y la ovulación. Las hembras de estas especias animales presentan actividad sexual desde agosto-septiembre hasta enero-febrero y un reposo sexual el resto del año. 3.3.1 Efectos de Fotoperiodo Los pequeños rumiantes como otras especies de mamíferos la percepción de la luz tiene lugar en fotoreceptores localizados en la retina del ojo. Esta información fótica es conducida por el tracto retino-hipotálamo hasta los núcleos supraquiasmáticos y paraventriculares del hipotálamo, antes de pasar por el ganglio cervical superior y llegar finalmente a la glándula pineal. Esta glándula sintetiza y secreta la hormona melatonina, en mayor grado durante la noche. La melatonina modifica la retroacción negativa de los esteroides sobre la actividad neuroendocrina (Karsch et al., 1984). Distribuida de manera correcta la 9 melatonina es capaz de restituir la totalidad del efecto del fotoperiodo (Malpaux et al., 1993) Figura 3. Mecanismo Fisiológico de la acción del fotoperiodo. THR: tracto retino-hipotalámico, NCS: núcleo supraquiasmatico, NPV: núcleo para ventricular, GCS: ganglio cervical superior, GP: glándula pineal, NA: noradrenanina, DA: dopamina, STH: serotonina, GnRH: hormona liberadora de gonadotropinas, LH: hormona luteinizante, FSH: Hormona foliculoestimulante 3.4 Estado nutricional y la relación con la reproducción. El estado nutricional del animal es un modulador clave de los mecanismos neuroendocrinos que regulan la secreción de GnRH. Por lo que la restricción nutricional causa crecimiento lento, reduce las concentraciones periféricas de glucosa y retarda el inicio de pulsos de GnRH en ovinos (Rodríguez 2005). El consumo inadecuado de energía inhibe la función ovárica, como resultado de la disminución en la secreción hipotalámica de LH donde los metabolitos glucosa y 10 aminoácidos además de algunas hormonas como la leptina, insulina y IGF tienen una función importante (Pinos, 2001). Estudios han demostrado que la secreción pulsátil de LH disminuyo con una progresiva duración de subnutrición en ovejas ovariectomizadas prepúberes o adultas. Así también, la liberación de LH es afectada por la condición corporal; en ovejas con condición baja (menor o igual a 2), la liberación de LH fue menor comparada con ovejas de mayor condición corporal (mayor o igual a 3) (Tatman et al., 1990). Estos efectos nutricionales indirectos son aparentemente mediados a través de la alteración del pulso generador de GnRH y en turno selectivamente reduciendo la secreción pulsátil de LH, sin algún efecto adverso aparente sobre los patrones de secreción de FSH (Diskin et al., 2003) 3.5 La Glucosa La glucosa en una hexosa es decir un molécula que contiene 6 carbonos en su estructura (Figura 4), es la principal fuente de energía en el organismo de todo ser vivo, es almacenada principalmente en hígado en forma de glucógeno. Por lo tanto, el control preciso del consumo de energía, almacenamiento y transporte de glucosa es indispensable para mantener cada uno de los procesos en las diferentes etapas y mantener las concentraciones en plasma dentro de los rangos fisiológicos normales (Jordán et al., 2010). 11 Figura 4 Estructura de la Glucosa La glucosa entra a nivel célula gracias a trasportadores que se encuentran en la membrana de ésta; dependiendo del órgano donde la glucosa efectué su función habrá diferentes trasportadores, entre los más importantes están los GLUT1 y GLUT4. 3.5.1 Rol de la Glucosa en la Reproducción Estos dos trasportadores (GLUT1 y GLUT4) se han observado en las células de la teca y granulosa en el folículo. Cuando la glucosa se absorbe puede afectar la función folicular por medio de dos mecanismos interrelacionados; el primero es mediante cambios en la disponibilidad de energía que alteran la bioquímica endócrina, por lo tanto estimulan la esteroidogénesis en las células del folículo, un segundo mecanismo de acción sucede cuando se altera la capacidad androgénica debido a la modificación de la expresión y función de los trasportadores de la glucosa en los tejidos ováricos y por último una combinación de las anteriores, es decir a un aumento en la absorción de glucosa altera la capacidad esteroidogénica que a su vez afecta la expresión y la función de los trasportadores de glucosa (Williams et al 2001). 12 En un estudio realizado con ovejas Manchegas adultas presentaron un aumento del número de folículos al ofrecer suplementos nutricionales generadores energía a corto plazo (Letelier et al, 2008). En lo anterior se ha sugerido que el mecanismo de este efecto probablemente involucra acciones directas foliculares de nutrición mediada por el sistema intra-follicular insulina-glucosa (Scaramuzzi et al., 2006). 3.5.2 La glucosa sobre los neurones de GnRH Otra función de la glucosa sobre la reproducción recae en la regulación metabólica del hipotálamo. Estos hallazgos sugieren que la disponibilidad de glucosa es uno de los reguladores metabólicos del generador de pulsos GnRH y desempeña un papel clave en el control nutricional de la reproducción en especies de rumiantes (Ohkura et al., 2004). 3.6 El Colesterol El colesterol es el tercer tipo de lípido en importancia cuantitativa en las membranas de las células animales donde contribuye al mantenimiento de la fluidez de membrana y establece interacciones con ciertas proteínas de membrana que pueden regular la actividad de estas (Figura 5). El colesterol es precursor biosintético de las hormonas esteroides, de la vitamina D y de los ácidos biliares; abunda como tal en la bilis y en las lipoproteínas plasmáticas, se encuentra tanto libre como esterificado con ácidos grasos de cadena larga. Por todo esto, el colesterol en una molécula esencial en el organismo, pero no un nutriente esencial (Burger, 2000). 13 Figura 5.Estructura del Colesterol 3.6.1 El colesterol como precursor de hormonas El colesterol es el precursor para todos los esteroides. La principal fuente de colesterol es provista por la circulación en forma de Lipoproteína de baja densidad (LDL). El colesterol también puede ser generado de novo dentro de la corteza adrenal a partir del Acetil CoA. Además existe evidencia de que la glándula suprarrenal puede utilizar el colesterol presente en las Lipoproteínas de alta densidad (LHL) a través de su captación por ciertos receptores de HDL, recientemente caracterizados (Carr y Simpson, 1981). Existen numerosos trabajos que sugieren que es el colesterol que se incorpora a las células esteroidogénicas, y no aquel que es sintetizado de novo el que juega un papel fundamental en la producción de hormonas esteroideas (Tureck y Strauss, 1981). Las células esteroidogénicas se encuentran rodeadas de ésteres de colesterol los cuales también se encuentran almacenados en estas células, y el colesterol es transportado en forma de esteres por lipoproteínas de baja densidad o de alta densidad. En general, la HDL posee un rol menor en el aporte de colesterol, excepto en el caso de roedores que parece ser la de mayor importancia. 14 El colesterol es transportado al interior de la célula por un proceso de endocitosis mediado por receptores asociados a la membrana plasmática. Luego, para el inicio de la síntesis de esteroides, el colesterol debe atravesar el espacio acuoso que se encuentra entre la membrana externa rica en colesterol de la mitocondria y la membrana interna pobre en colesterol, y de esta forma ponerse en contacto con la proteína CYP11A (P450scc o citocromo del clivaje de la cadena lateral del colesterol). Este proceso es llevado a cabo por la proteína reguladora de la esteroidogénesis aguda (StAR) (Stocco, 2001). Esta proteína transportadora, de 30 kDa, seria la mediadora ante una inducción aguda de la esteroidogenesis. Tanto la pregnenolona como la progesterona pueden ser utilizados como sustrato de este complejo enzimático para formar la dehidroepiandrosterona (DHEA) y androstenediona, respectivamente. Dado que las células teca intersticiales poseen alta actividad de estas enzimas, se las considera la principal fuente celular de andrógenos foliculares. La vía de síntesis de andrógenos dada a través de la pregnenolona, se denomina vía delta 5, siendo la vía delta 4 la que se desarrolla utilizando a la progesterona como sustrato (Figura 6). 15 Figura 6.Síntesis de Andrógenos y Estrógenos (Tomado de Yen 2001) 3.7 Los aminoácidos excitadores Los aminoácidos son esencialmente moléculas constituidas por un péptido y una proteína. Como es sabido, las aminas biogenasas, las monoaminas, presentan aminoácidos como precursores, por lo que no es de extrañar que también los aminoácidos puedan funcionar como neurotransmisores. Los aminoácidos reconocidos como neurotransmisores son cinco: el acido gammaamino butírico (GABA), la glicina, la taurina, el acido glutámico y el acido aspártico. Los tres primeros son aminoácidos neutros, tienen un efecto inhibitorio, mientras que los últimos dos son excitadores. El glutamato y el aspartato están presentes en altas concentraciones en el SNC y son liberados de forma dependiente del Ca2+ ante estimulación eléctrica. El glutamato y el aspartato provienen del ciclo de 16 Krebs y actúan a nivel central como excitadores por que actúan sobre receptores específicos: NMDA, AMPA y Kainato (Ortiz y Mareco, 2004). 3.8 Neurotransmisores Los neurotransmisores son el producto de síntesis específico por parte de la neurona y que es liberado al medio extracelular en el proceso que se denomina sinapsis, ejerce su acción sobre receptores específicos de membrana. Estos receptores específicos de membrana se sitúan tanto en neuronas y otras células. Los neurotransmisores pueden actuar a corto o largo plazo, pueden actuar en el mismo sitio donde son secretados sin embargo también hay neurotransmisores que actúan en otros puntos donde se producen. 3.8.1 Aminoácido Gluatamato El glutamato es el principal aminoácido excitador del cerebro, el cual ejerce sus acciones a través de receptores ionotrópicos y metabotrópicos. La comunicación a través de esos receptores es crítica para una transmisión sináptica normal y contribuye al desarrollo del sistema nervioso y la plasticidad sináptica. La transmisión en las sinapsis excitatoria se lleva a través de los receptores post-sinápticos AMPAR y NMDAR. La transmisión sináptica basal está mediada por los AMPAR, que son rápidamente activados por el glutamato, mientras que los NMDAR, más lentos, regulan diversas formas de plasticidad sináptica (Ortiz y Mareco, 2004). 17 Figura 7. Receptores de glutamato y plasticidad sináptica En estudios recientes se encontró que existen receptores para glutamato en tejidos periféricos tales como hueso, donde el glutamato está relacionado en la formación y mantenimiento de los dos tipos de células del hueso (Ducy et al., 2000), testículo donde participa en la síntesis de testosterona, mientras que en el ovario regula el numero de receptores, en la glándula pineal participa en la síntesis y secreción de melatonina (Yatsushiro et al., 2000) en el páncreas modula la secreción tanto de glucagon como de insulina (Hayashi et al., 2003), mientras que en órganos como el hígado (Bai et al., 2001) pulmones (Dickman et al., 2004) riñones (Gill y Pulido et al., 2001) y corazón (Gill et al., 2000) la función del glutamato no está bien definida. 3.8.2 El glutamato en la reproducción El glutamato parece jugar en rol central en la regulación de la reproducción, mediando las señales esteroidales en el hipotálamo de GnRH para controlar la secreción de LH de la pituitaria. Estudios han demostrado con evidencia que los esteroides gonadales aumentan la liberación de glutamato hipotalámico durante el 18 tiempo del pico de LH. Estos estudios realizados en cabras prepúberes han demostrado que el glutamato afecta positivamente la reproducción sobre el número de cabras entrando a la pubertad en fotoperiodos decrecientes. Estos estudios donde se suministro una infusión de glutamato vía intravenosa incrementaron y adelantaron la pubertad (Torres et al., Lopez et al., 2009 y Meza et al., 2011). 19 IV. MATERIALES Y MÉTODOS 4.1 Ubicación Geográfica El estudio se realizó en la Unidad Experimental Caprina Sur de la Unidad Regional Universitaria de Zonas Áridas, Universidad Autónoma Chapingo. La Unidad se localiza en el municipio de Tlahualilo, a 3 km de Bermejillo, Durango México. Entre las coordenadas geográficas 25o53´31´´ Latitud Norte y 103o36´11´´ Longitud Oeste, con una altitud de 1,117msnm. Las condiciones ambientales en el área son clima seco cálido BW, precipitación de 217 mm anuales, y una temperatura promedio de 22.3 oC, con una temperatura mínima de 4 oC en enero y la máxima superior a los 40oC en junio. 4.2 Los Animales y su Alimentación Se utilizaron 18 cabras encastadas 7/8 Saanen y 1/8 Criollo de 3 meses de edad con un peso promedio aproximado a 16kg. Se alimentaron dos veces al día (0700 y 1800) con una dieta a base de heno de alfalfa (14%PC) y maíz rolado (11.2%) tratando de cubrir el 110% de sus requerimientos nutricionales. Se les ofreció agua y sales minerales ad libitum. Cuadro 1. Contenido de materia seca (MS %), fibra neutro detergente (FND %), fibra acido detergente (FAD %), digestibilidad in vivo (DGVI %) y proteína cruda (PC) de la alfalfa en la dieta ofrecida durante el periodo experimental. Alfalfa MS FDN FAD PC DGVI 92.06 59.91 42.09 14.32 62.97 20 4.3 Diseño de tratamientos Las cabras (n =18) fueron distribuidas aleatoriamente en dos grupos con peso vivo y condición corporal homogéneos con 10 y 8 repeticiones por tratamiento (AAE y CONT, respectivamente) con diseño completamente al azar, donde la unidad experimental fue la cabra. Cada grupo fue previamente formado aleatoriamente. Tratamiento 1: Suplementadas con L-glutamato (AAE, n=10; 16.52±1.04kg, CC 3.4±0.12) en infusiones endovenosas de 7 mg kg-1 PV de Lglutamato cada lunes y viernes durante todo el periodo del experimento y Tratamiento 2: Grupo control (CONT, n=8; PV 15.96± 0,98 kg, CC 3,15 ± 0,11) recibieron una aplicación de agua destilada y esterilizada por vía endovenosa al mismo tiempo que se les suministrara las infusiones de glutamato al grupo AAE para provocar el estrés al que se someterán las cabras del grupo AAE. 4.4 Preparación de la solución buffer Se pesaron 4 g de L-glutamato en polvo (C5H10N2O3, Merck, Alemania) en una balanza analítica para disolverse en 50 mL de agua destilada, la solución fue ajustada a un pH neutro (7.0) con HCL 0.1N. Todo el proceso de preparación y manejo de la solución se realizo en un ambiente estéril. 4.5 Registro de peso vivo (PV) y condición corporal (CC) Se registro el peso de los animales una vez por mes (a partir de julio) previo a su alimentación, acondicionándose una bascula (modelo G-30), a una jaula que permitirá la inmovilización de las cabras. La condición corporal fue 21 medida mediante palpación dorsal y costal, utilizando una escala de 5 puntos de contenido de grasa en la región lumbar de 1 (muy flaca) a 5 (muy gorda) la cual se realizó cada mes al mismo tiempo que se registro el peso vivo. 4.6 Obtención de Muestras Se realizó un muestreo sanguíneo a partir del mes de junio dos veces por semana. Las muestras sanguíneas fueron colectadas de cada cabra mediante venopunción de la vena yugular, utilizando agujas estériles de 0.8 x 38 mm (Precision Glide BectonTM y Dickson, NJ, USA) y tubos colectores estériles Vacutainer de 10 ml (Corvac, Sherwood Medical, Std. Louis, MO). Las muestras fueron llevadas al laboratorio donde se dejaron reposar por 30 minutos a temperatura ambiente hasta observarse la formación de coágulo. Las muestras fueron centrifugadas a 1500 rpm durante 15 minutos. A cada muestra de suero colectada y su réplica fueron almacenadas en microtubos de polipropileno MCT150C (AxygenMR Scientific) de 1.5 mL a una temperatura de 4° C. 4.7 Evaluación de la Actividad Reproductiva Se cuantificó la concentración de progesterona (P4), para poder evaluar la actividad reproductiva de la cabra, esta cuantificación se obtuvo mediante radioinmunoanálisis (RIA). Las cabras que presentaron dos o más muestras consecutivas con concentración séricas de P4 igual o mayor a 1 ng mL -1 fueron clasificadas como reproductivamente activas y las cabras con dos muestras consecutivas con una concentración de progesterona menor a 1 ng mL-1 fueron clasificadas como reproductivamente inactivas. 22 4.8 Cuantificación de metabolitos La cuantificación de colesterol y glucosa se realizó mediante análisis espectrofotométricos (Coleman 15 Junior II). La glucosa fue analizada utilizando el kit 115-A basado en la oxidación de la glucosa, mientras que los niveles séricos de colesterol fueron analizados mediante el kit EnzyChromTM (ECCH-22-100, Bioassay Systems, Hayward, CA; USA). 4.9 Análisis Estadístico Los pesos vivos (PV) y la condición corporal (CC) fueron evaluados mediante un análisis de varianza con un diseño completamente al azar con 2 tratamientos de 10 y 8 unidades experimentales por tratamiento (AAE y CONT, respectivamente) (Snedector y Corchran, 1967). Las concentraciones séricas glucosa y colesterol fueron cuantificadas por medio de un ANOVA con un diseño completamente aleatorizado, con un arreglo de parcelas divididas para muestras repetidas en el tiempo (Gill y Hafs, 1971). El efecto de tratamiento fue incluido en la parcela mayor utilizando el término de cabra dentro de tratamiento para calcular el error. El tiempo de muestreo y la interacción del tratamiento por tiempo fueron incluidos en la parcela menor, utilizando el cuadrado medio residual para probar sus diferencias. En el evento de una diferencia significativa entre grupos experimentales, la separación de medias consideró la opción PDIFF, para probar sus diferencias mediante el procedimiento LSMEANS del procedimiento GLM (PROC GLM) del SAS (Littell et al., 1991). Debido a que los datos de las concentraciones de los metabolitos mostraron una alta variabilidad, se realizó su 23 transformación mediante raíz cuadrada con objeto de homogenizar los datos y proceder a hacer los análisis estadísticos pertinentes (Bland y Douglas, 1996). Las proporciones de cabras que presentaron o no el inicio de la pubertad fueron comparados con una prueba de ji-cuadrada. 4.9.1 Modelos estadísticos Modelo 1: Para peso vivo (PV) y condición corporal (CC) Modelo: Yij = μ + Ti + IDj(i) + tk + T(ik) + Eijk Yij μ = = Ti IDj(i) tk Tt(jk) = = = = Eijk = Modelo 2: medida en la i-ésima cabra en el j-ésimo tratamiento. Media general, común a todas la unidades experimentales antes de aplicar los tratamiento Efecto del i-ésimo tratamiento, donde i = 1, 2 (AAE, CONT) Efecto de la j-ésima cabra en el i-ésimo tratamiento (ERROR A) Efecto del k-ésimo tiempo de muestreo, donde k = 1,…, 26 Efecto de la interacción del i-ésimo tratamiento dentro del k-ésimo tiempo de muestreo Error experimental del i-ésimo tratamiento más la j-ésima cabra más el k-ésimo tiempo de muestreo (~ NID, μ=0, σ2 e) Xi2 para evaluar la distribución del % de cabras en pubertad h c X 2 0 i 1 j 1 (nji Eij ) Eij Donde los componentes de la ecuación representan: X2 0 = Estadística de prueba para probar Ho h = Tratamiento (AA, CC) c = Tiempo de muestreo (1,……,15). nij = Concentración de progesterona de la i ésima cabra en el j ésimo tratamiento. 24 Eij Valores esperados de concentración de progesterona bajo el supuesto de homogeneidad de poblaciones de grupos de tratamiento para la i-ésima cabra en el j-ésimo tratamiento. Calculados mediante: Eij ( ni c j ) n Donde los componentes de la ecuación representan: ni = Número de cabras por tratamiento cj = Número de cabras muestreadas por tiempo n = Número total de cabras V. RESULTADOS No existieron diferencias (P>0.05) entre tratamientos para las variables peso vivo (PV) y condición corporal (CC). Mientras que los valores iniciales de PV y CC fueron de 16.65 kg y 3.31 unidades, los valores finales para estas variables fueron 23.2 kg y 3.37 unidades, respectivamente. En el mismo sentido, no existió diferencia (P>0.05) entre tratamientos respecto a los promedios séricos de glucosa y colesterol (Cuadro 1). Sin embargo, se observó un efecto (P<0.05) sobre el porcentaje de cabras mostrando pubertad en favor del grupo suplementado con glutamato, observándose un 70% de las cabras en actividad reproductiva 25 correspondiente al grupo experimental, es decir 7/10 cabras entraron en pubertad, mientras que solo el 25% de las cabras del grupo control entraron en pubertad, 2/8 cabras (Cuadro 2). Cuadro 2. Medias de mínimos cuadrados para peso vivo (PV4), condición corporal (CC4), concentraciones séricas de glucosa (Glucosa mg dL -1) y colesterol (Colesterol mg dL-1) y Porcentaje de cabras en pubertad (Pubertad %). 1 2 ab Variables AAE CONTROL P EE2 PV4 23.75a 22.76a 0.34 0.72 0.06 0.10 a 3.38 a CC4 3.69 Colesterol mg dL 77.89a 76.97a 0.56 1.10 Glucosa mg dL 94.5a 93.9a 0.33 0.46 Pubertad %1 70.0a 25.0b 0.05 46.0 Dos o más muestras consecutivas con valores de P4 en suero ≥ 1 mg mL marco inicio de la pubertad EE, error estándar de medias de mínimos cuadrados Literales diferentes en la misma fila indican diferencias significativas (P<0.05) Con respecto a los valores séricos promedio de colesterol y glucosa a través del tiempo, la suplementación con AAE afectó el patrón de la concentración de colesterol, observándose diferencias entre tratamientos (P<0.05). En efecto, las mayores concentraciones séricas de colesterol a favor del grupo tratado se presentaron entre el 2/3 y 3/3 del estudio, observando el valor máximo hacia el 3/3 del período (Gráfica 1). Sin embargo, con respecto a los niveles séricos de glucosa a través del tiempo no existieron diferencias entre tratamientos (P>0.05) (Grafica 2). 26 90 Colesterol (mg/dL -1) a 86 82 78 74 70 ab ab ab ab ab ab ab ab ab a b b b AAE b b b Cont b Tiempos de Muestreo Gráfica 1. Concentraciones séricas de colesterol a través del tiempo en cabras suplementadas con glutamato (AAE) y grupo control (CONT) bajo fotoperiodo natural decreciente en la Comarca Lagunera. Gráfica 2. Concentraciones séricas de Glucosa a través del tiempo en cabras suplementadas con glutamato (AAE) y el grupo control (CONT) bajo foto periodo natural decreciente en La Comarca Lagunera. 27 VI. DISCUSIÓN Los resultados obtenidos en el presente estudio, soportan la hipótesis planteada al inicio del experimento: la suplementación con glutamato incrementa el porcentaje de cabras alcanzando el estatus de pubertad. Sin embargo, la hipótesis original se acepta solo parcialmente ya que aunque existió un efecto positivo sobre las cabras tratadas con glutamato, esto no se relacionó con las concentraciones séricas promedio de colesterol y glucosa, aunque se observó un incremento de las concentraciones de colesterol en el grupo tratado, particularmente hacia el 3/3 del período experimental, coincidente con el mayor porcentaje de cabras mostrando pubertad. Estudios realizados donde se evalúa el efecto del glutamato en la reproducción han concluido que este aminoácido excitador juega un rol crítico para la función endocrina, la pubertad, la pulsatilidad de LH y el comportamiento reproductivo. De acuerdo a los resultados de Mahesh y Brann, (2005) el glutamato probablemente esté afectando directamente a los neurones de GnRH, promoviendo la secreción de LH y FSH en el estado prepuberal. Los antagonistas de los receptores ionotrópicos de glutamato inhiben la liberación de LH y abolió el pico preovulatorio de LH inducido por esteroides. Antagonistas de los receptores NMDA y AMPAR también pueden inhibir la liberación pulsátil de LH en animales castrados. Por otro lado tanto el peso vivo como la condición corporal han sido relacionados con cambios en el estado metabólico del animal, los cuales ocurren 28 previo al inicio de la pubertad (Meza, 2008; Meza et al., 2010a,b). Adicionalmente, en un estudio realizado en humanos, se evaluó el inicio de la pubertad en diferentes regiones de México, concluyendo que la aparición de esta etapa de transición a la madurez reproductiva se relacionó con ganancias de peso, talla, e índice de masa corporal (Vázquez 2009). Sin embargo, Meza et al, (2011) reportaron que la suplementación de glutamato en cabras prepúberes adelantó tanto el inicio como el porcentaje de pubertad, pero que dicho escenario no estuvo relacionado con cambios en el peso vivo, ni en la condición corporal. Por lo anterior, los resultados obtenidos en el presente estudio sugieren que el inicio de la pubertad en caprinos está relacionado con el efecto que glutamato ejerce sobre el hipotálamo, particularmente sobre los neurones GnRH. Además, al no existir diferencias en PV y CC, se desprende que este inicio anticipado de la pubertad se relacione a un efecto directo del glutamato sobre la función hipotalámica-hipofisiaria-gonadal. Torres (2009) concluyó que el inicio de la pubertad pareciera implicar un mecanismo independiente de insulina para regular la función del eje hipotálamohipófisis-gónadas en cabras jóvenes ya que las concentraciones séricas de insulina no se asociaron con la aparición de la pubertad en las cabras tratadas con glutamato. En otro estudio, una infusión de corta duración de glucosa incrementó el número de folículos, lo cual sugiere que la glucosa estimula el crecimiento del folículo y debido a esto las concentraciones de insulina se mantuvieron elevadas, pero esto como respuesta a la homeostasis de la glucosa en presencia de un alto nivel de la misma (Scaramuzzi, 2011). En nuestro estudio, no se presentaron 29 diferencias en las concentraciones de glucosa a través del tiempo, esto pudiera ser debido a la eliminación de este metabolito por la absorción mediada por GLUT4, principalmente por el tejido adiposo, además que también las células de la granulosa contienen este trasportador de glucosa (Williams et al, 2001; Nishimoto et al, 2006) Cabe mencionar que las infusiones de corta duración de glucosa estimulan el número de folículos, pero al final no promovieron la ovulación, y la presencia de la pubertad se caracteriza por los efectos en cadena del eje H-H-G, la frecuencia de los pulsos de LH y disminución al tiempo entre pulsos que culminara con la ovulación de un folículo (Meza, 2008). El patrón de secreción de colesterol al través del tiempo, se vio afectado a favor del grupo AAE, lo cual se relacionó positivamente con un mayor porcentaje de hembras mostrando el inicio de la pubertad en el grupo tratado con glutamato. Existe evidencia de que las concentraciones de colesterol estas estrechamente ligadas a la activación de la función reproductiva ya que el estado metabólico y disponibilidad de nutrientes son algunos de los vitales componentes ambientales necesarios para el establecimiento de la función reproductiva. Diferencias significativas en las concentraciones de colesterol total fueron reportadas en humanos en diferentes etapas dentro del periodo de pubertad, lo cual se relacionó con el niveles nutricionales, en niños de zonas rurales con una subnutrición se observaron menores concentraciones de colesterol total y presentaron tardíamente la pubertad mientras que en niños de zonas urbanas con 30 una adecuada alimentación mostraron pubertad precoz asociado a niveles altos de colesterol (Vázquez, 2009). En contradicción con lo anterior en nuestro estudio se controlo la cantidad y calidad del alimento ofrecido a las cabras de igual forma en ambos grupos experimentales, podríamos asumir que las cabras del grupo tratado con glutamato con mayor porcentaje de pubertad y que además tuvieron mayores concentraciones de colesterol total a través del tiempo y hay que recalcar que no hubo diferencias en PV y CC por lo que nuestros datos resultan ser aun más interesantes. Lo anterior sugiere que la actividad del glutamato no solo se restringió a la estimulación del hipotálamo, sino que también pude estar actuando sobre otros órganos metabólicos. Al respecto, en los últimos años se han reportado receptores a glutamato en el hígado en el cual el colesterol se sintetiza y se almacena, el cual a su vez este entrando en la ruta esteredogenica como precursor de hormonas esteroidales, las cuales son responsables de activar los procesos de espermatogénesis y foliculogénesis, además de que dichas hormonas están involucradas en el comportamiento sexual de machos y hembras (Meza et al., 2010). Esto podría ser una excelente estrategia de alimentación, cuando los recursos nutricionales no están disponibles o son de mala calidad, perjudicando a la reproducción y por ello la parte económica de un sistema de producción caprino. 31 VII. CONCLUSIÓNES La suplementación con glutamato generó un inicio precoz de la pubertad con respecto al grupo control, paralelo a un incremento en el porcentaje de cabras en mostrando pubertad. Dicho escenario se relacionó positivamente con incrementos a través del tiempo en las concentraciones de colesterol en las cabras tratadas. Lo anterior sugiere que el inicio y porcentaje de pubertad pudiera estar relacionada con el metabolismo energético, particularmente los niveles séricos de colesterol; dichos resultados son de importancia tanto clínica como productiva. Este efecto positivo del glutamato sobre el inicio de la pubertad, no estuvo relacionado con incrementos ni en peso vivo ni en condición corporal, al entender este efecto de la suplementación sobre la reproducción sería de gran utilidad ya que las cabras en sistemas en pastoreo con deficiencias alimenticias tendrían la oportunidad de entrar en etapa reproductiva conforme a su ciclo biológico y no requerir necesariamente de incrementos en peso vivo o condición corporal. 32 VIII. LITERATURA CONSULTADA Aréchiga C.F., Aguilera J.I., Rincón R.M., Méndez de Lara S., Bañuelos V.R., Meza C.A. 2008. 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