*** Concurso Nacional de Proyectos FONDECYT 2005 COMPROBANTE DE RECEPCION DE INFORME FINAL NUMERO RESPONSABLE :ISOLDE GINA ROJAS RUDOLPH RUT :10184608-3 TIPO :FONDECYTREG. ETAPA :2007 : 1050581 DURACION : 3 A-no(s) TITULO : PARTICIPACION DEL MASTOCITO EN LA PATOGENESIS DE LA QUEILITI S ACTINICA. DISCIPLINA :Gl MEDICINA INTERNA, PATO (MEDICINA Gi) FECHA RECEPCION :18/03/2008 TIMBRE RECEPCION *** Concurso Nacional de Proyectos FONDECYT 2005 kk COMPROBANTE DE RECEPCION DE INFORME FINAL NUMERO RESPONSABLE :ISOLDE CINA ROJAS RUDOLPH RUT :10184608-3 :PONDECYTREG. ETAPA :2007 TIPO : 1050581 DURACION : 3 Ano(s) TITULO : PARTICIPACION DEL MASTOCITO EN LA PATOGENESIS DE LA QUEILITI S ACTINICA. DISCIPLINA :01 MEDICINA INTERNA, PATO (MEDICINA G1) FECHA RECEPCION :18/03/2008 TIMBRE RECEPCION -rrflC!3IDo ( ARTES 11 jv] 4 1 ? r- INFORME FINAL GOBIERNO DE CHILE CONICVT FONDECVT PROYECTO FONDECYT REGULAR 2007 3 años 10581 AÑO DE EJECUCIÓN DURACIÓN NÚMERO PROYECTO 10184608-3 Isolde Gina Rojas Rudolph RUT INVESTIGADOR(A) RESPONSABLE 81494400-k Departamento de Estomatología Quirúrgica, Facultad de Odontología, Universidad de Concepción FONO DIRECCION 41-220712218204385 Roosevelt 1550 E-mail [email protected] PERÍODO QUE INFORMA 15 / 03 103 / 2008 14 /2005 HASTA DESDE CONTENIDO (MARQUE CON UNA X EL CASILLERO QUE CORRESPONDA) NO INCLUYE INCLUYE Formulario de Informe Final Publicaciones Resumen de Tesis Título/Grado X X X X Información acerca de inventos y patentes Otros (especificar) Informe Incentivo Coop. Internacional (Si corresponde) Firma Investigador(a) Responsable Fecha: LLJ (>3y CONTENIDO DEL INFORME FINAL 1. CUMPLIMIENTO DE LOS OB)ETIVOS PLANTEADOS EN EL PROYECTO. Marque con una X el casillero correspondiente. Cumplimiento Objetivos Total Objetivo 1. Obtención de muestras x de quellitis actínica, labio normal y mucosa normal de X caracterización 1. Objetivo lesiones de QA de acuerdo a contenido de MCs, alteraciones epiteliales y conectivas Implementación, X 2. Objetivo de ejecución Estandarización y estudios inmunohistoquímicos para la medición de la expresión de PAR-2 y COX-2 a nivel de proteína Implementación, X 2. Objetivo Estandarización y ejecución de RTPCR para la medición de la expresión de PAR-2 y COX-2 a nivel de RNA mensajero Objetivos 2 y 3. Implementación, estandarización y ejecución de la por PGE2 de medición radioinmunoensayo (RIE) Implementación, X 3. Objetivo de ejecución estandarización y técnicas de irradiación de cultivos celulares Implementación, X 3. Objetivo de ejecución y estandarización técnicas de RIE para la medición de histamina y triptasa Implementación 3. Objetivo de desarrollo estandarización y celulares cultivos en estudios (fibroblastos y queratinocitos) para la determinación del efecto de UVB sobre triptasa mastocitos y proliferación y expresión de PAR-2 y COX-2 a nivel de RNAm y proteína de X Análisis Obtención y de redacción y resultados, manuscritos Parcial No el cumplimiento Fundamentar parcial o incumplimiento Actualmente se cuenta con un banco de tejidos de 44 QA, 21 LN y 11 mucosas normales se ha realizado aun la medición de PGE2 por RIE en cultivos celulares o en tejidos (explicado en punto 1 de otros aspectos) X No x Los estudios están completos para fibroblastos, pero no se han realizado para queratinocitos ya que no hubo éxito en el cultivo de la línea celular de queratinocitos adquirida (se intentó 2 veces) (explicado en extensión en punto 2 de otros Otro(s) aspecto(s) que Ud. considere importante(s) en la evaluación del cumplimiento de los objetivos planteados en la propuesta original o en las modificaciones autorizadas por los Consejos. A continuación procedo a explicar las razones del cumplimiento parcial de dos de las actividades propuestas para los objetivos del proyecto, una correspondiente a objetivos 2 y 3, y la otra a objetivo 3. 1. Implementación, estandarización y ejecución de la medición de PGE2 por radioinmunoensayo (RIE) en tejidos y sobrenadantes de cultivos celulares: durante el tercer año se intentó realizar la extraccion de PGs de dos biopsias humanas, sin embargo, resultó muy difícil pulverizar los tejidos mucosos ya que son altamente fibrosos. Además no se pudo proseguir con la técnica ya que fue difícil coordinar la utilización de un equipo esencial para esta técnica de extracción de tejidos que es el speed Vac. Cabe destacar que este equipo se solicitó a Fondecyt pero no fue otorgado. b) En cultivos celulares: se espera desarrollar durante el primer semestre del año 2008, por el alumno tesista Sr. Roger Yefi, se cuenta con los sobrenadantes almacenados a -80 0 C de cada experimento. 2. Si bien se adquirió una línea celular de cultivos primarios de queratinocitos humanos no tuvimos éxito en su cultivo, se intentó una segunda vez sin éxito. Además no pudimos proseguir con la obtención de cultivos primarios de queratinocitos de explantes de mucosa bucal, ya que se detectó una incompatibilidad en el crecimiento de las células LAD2 en presencia de explantes, por lo que se necesita otra estufa de cultivo. Por esto se dio prioridad a desarrollar los experimentos con los cultivos primarios de fibroblastos que ya se habían obtenido. Además cabe destacar que este proyecto estaba planificado para 4 años, de los que sólo se aprobaron tres, se ha trabajado intensamente cada año del proyecto, y se espera completar durante el primer semestre las actividades antes mencionadas. 3 II. RESULTADOS OBTENIDOS Describa brevemente los resultados obtenidos en el proyecto en un máximo de cinco páginas, tamaño carta, espacio seguido. Para cada uno de los objetivos específicos, describa o resuma los resultados. Relacione las publicaciones y/o manuscritos enviados a publicación con los objetivos específicos. Incluya en anexos, la información de apoyo que estime pertinente y necesaria para la evaluación. Objetivo 1: Caracterizar las lesiones de Queilitis actínica (QA) de acuerdo a su contenido de mastocitos (MCs), y alteraciones morfofuncionales a nivel epitelial y conectivo 1. Determinar la densidad y distribución de MCs de acuerdo a su contenido de proteasas, triptasa y quimasa, en lesiones de QA y compararlos con tejidos normales 2. Determinar el daño epitelial a través de la expresión de proteínas reguladoras del ciclo celular en QA y compararlos con tejidos normales 3. Determinar el daño en el tejido conectivo a través de la cuantificación de la elastosis en lesiones de QA mediante técnicas histoquímicas 1. Aumento de la densidad de MCs triptasa-positivos a nivel papilar o subepiteilal, y a nivel reticular en QA (anexo resultados 1 figuras 6 y 8 y anexo de resultados II, figuras 2 y 3): similar a lo publicado por nuestro grupo previamente usando un tamaño muestra¡ menor (QA n=15; labio normal n=8) (Rojas et al. 2004, 3 Oral Pathol & Med), se observó en las nuevas biopsias un aumento significativo de mastocitos triptasa -positivos y quimasa -positivos en lesiones de QA comparados con tejidos normales (QA n=45; labio normal n=24). En QA los MCs triptasa-positivos se encontraban también aumentados a nivel subepitelial o papilar, en comparación con la mayor densidad a nivel reticular en tejidos normales, lo que sugería una interacción de triptasa con receptores a nivel epitelial, y una contribución del MC a inflamación y daño conectivo. 2. Aumento del número de fibroblastos y de elastosis en lesiones de QA en comparación con labio normal, y su asociación con mastocitos tri ptasa -positivos (Anexo resultados 1, figuras 1-10): Estos estudios fueron realizados por la alumna de tesis de Magíster, la Dra. Yadira Boza, cuya defensa de tesis fue rendida en Agosto de 2007 (anexo 4.1). Utilizando 33 muestras de QA y 16 muestras de LN, se detectó la densidad de fibras colágenas y elásticas mediante el método histoquímico de Verhoeff Van Gieson y análisis morfométrico y mediante RT-PCR para detectar expresión a nivel RNA mensajero de colágeno 1 y III, y elastina. Los resultados mostraron un aumento significativo de las fibras elásticas en papilar y reticular de las muestras de QA en comparación con LN, con un aumento de la proporción de fibras elásticas/fibras colágenas en QA (cercano a 1:1 en comparación con la proporción de 1:2 en labio normal). No se detectaron diferencias significativas a nivel de RNAm en la expresión de colágeno y elastina. Además se realizó tinción inmunohistoquímica doble de fibroblastos y MCs triptasa-positivos, encontrándose que ambos tipos celulares estaban significativamente aumentados en las lesiones de QA en comparación con labio normal, con una proporción fibroblasto-MC de 2:1. Análisis de correlación de Pearson mostraron una asociación significativa entre la densidad de fibras elásticas y la densidad de fibroblastos y mastocitos. Estos resultados sugieren un rol preponderante de la interacción mastocito-fibroblasto en la patogénesis de la etastosis en la QA, el que se analizó en el objetivo III de este proyecto. 3. Alteración de la expresión de proteínas reguladoras del ciclo celular a nivel epitelial en QA (anexo de resultados 1, figuras 11-13): En estudios preliminares de este proyecto, en que se utilizó un tamaño muestra( menor (QA n=13; LN n=7), nuestro grupo encontró que en QA había un aumento de la expresión de la proteína pro-apotótica p53 y una disminución de la proteína antiapoptótica bcl-2 en comparación con labios normales, sugiriendo mayor actividad pro-apoptótica en QA (Martínez et al 2005, J Oral Pathol & Med). Los resultados del presente proyecto, utilizaron un tamaño muestra¡ mayor (QA n=26; LN n=16), y se analizó la expresión de genes regulados por p53, como el anti-apoptótico mdm-2 (que a su vez es inhibidor de p53) y el pro-apoptótico o inductor de arresto celular p21, por inmunohistoquímica. Se utilizaron secciones seriadas y colocalizadas de QA y LN, encontrándose una co-expresión aumentada de p53 y mdm-2 a nivel epitelial en QA, y ausencia de diferencias en la expresión de p21 entre QA y LN. Análisis de correlación de Spearmann mostraron 4 que en LN la expresión de p21 y mdm-2 estaban asociadas entre sí y a la expresión de p53, sin embargo, en QA sólo había una asociación entre la expresión de p53 y mdm-2, y falta de asociación entre p53 y p21, así como entre mdm-2 y p21. La importancia de estos resultados radica en que sugieren una alteración de la función de p53 en QA, ya que un aumento de p53 no llevaría a un aumento de p21, proteína necesaria para inducir arresto celular y reparación del daño genómico. Realizando análisis de regresión logística se encontró que un aumento de la expresión de p53 es un indicador de la presencia de esta lesión premaligna en el labio. Estos resultados fueron aceptados para publicación en la revista Oral Oncology (se adjunta manuscrito en anexo 1.1). Objetivo II: Caracterizar la expresión de PAR-2, COX-2 y la producción de PGE2, en QA y compararlas con tejidos normales 1. Determinar y cuantificar la expresión de PAR-2 y COX-2 a nivel de RNA mensajero en lesiones de QA y tejidos normales por RT-PCR. 2. Determinar y cuantificar la expresión de COX-2 a nivel de RNA mensajero en lesiones de QA y tejidos normales por inmunohistoquímica. 3. Cuantificar la expresión de PGE2 en QA y tejidos normales por radioinmunoensayo. 4. Correlacionar la expresión de PAR-2, COX-2 y la producción de PGE2 con la densidad de mastocitos, expresión de marcadores apoptóticos a nivel epitelial y elastosis en lesiones de QA Análisis de los resultados del Objetivo II mostraron: Aumento de la expresión de PAR-2 en QA (anexo resultados II, figuras 1 y 2). Un total de 45 muestras de QA y 24 muestras de labio normal fueron analizadas por inmunohistoquímica, y de éstas un total de 13 muestras de QA y 12 de labio normal fueron analizadas por RT-PCR. Un aumento significativo en la expresión de PAR-2, tanto a nivel de proteína como de RNA mensajero (normalizado con GAPDH) se encontró en QA en comparación con labio normal. PAR-2 se observó en el estrato basa¡ epitelial en muestras de labio normal, y en casi todo el espesor del epitelio en QA (manuscrito en preparación, anexo 1.3). Aumento de la expresión de COX-2 en QA (anexo resultados II, figuras 1 y 2). Un total de 45 muestras de QA y 24 muestras de labio normal fueron analizadas por inrnunohistoquímica, y de éstas un total de 13 muestras de QA y 12 de labio normal fueron analizadas por RT-PCR. A nivel de RNA mensajero se encontró un incremento de 1,6 veces en la expresión de COX-2 en QA en relación al labio normal, sin alcanzar significancia. A nivel de proteína se observó un aumento significativo en la expresión de COX-2 en QA en comparación con labio normal. COX-2 se observó en el estrato basa¡ epitelial en muestras de labio normal, y en casi todo el espesor del epitelio en QA (manuscrito en preparación, anexo 1.3). 3. Co-expresión epitelial de PAR-2 y COX-2, y su correlación entre sí y con la densidad de MCs triptasa-positivos en labio normal y QA ( anexo de resultados II figuras 2-4). Tanto PAR-2, COX-2 y triptasa fueron detectados en cortes seriados co-localizados de labio normal y QA, lo que permitió detectar una co-expresión de COX-2 y PAR-2 a nivel epitelial, y subyacente a nivel subepitelial se observó una alta densidad de MCs triptasa -positivos en QA. Los niveles de PAR-2 y COX-2 detectados por inmunohistoqu¡mica eran no detectables o bajos en labio normal, y moderados a elevados en QA. Análisis de correlación de Spearmann mostraron una asociación significativa en la expresión de PAR-2 y COX-2, y entre COX-2 y la densidad de mastocitos triptasa-positivos. Análisis de regresión logística (método forward stepwise de Wald) mostró que COX-2 es un marcador predictor de QA. Estos resultados sugieren una interacción de triptasa con el receptor PAR-2 en queratinocitos del labio, lo que podría estar contribuyendo a un aumento en la expresión de COX-2 en QA, como se ha demostrado en diversos estudios de cánceres gastrointestinales, alteraciones fibroproliferativas y de las vías respiratorias. Con estos resultados se redactó una publicación que está lista para ser enviada a la revista Oral Oncology (anexo 1.3). La hipótesis de activación de PAR2 por triptasa la cual llevaría a un aumento de la expresión de COX-2 está siendo probada en el objetivo III, por el tesista Roger Yefl. 4. No se han obtenido los resultados de medición de PGE2. Tuvimos la limitante de falta de acceso a un speed y ac que era necesario para la técnica de extracción de PGs desde tejidos, lo que no nos permitió realizar en el plazo del proyecto esta técnica. Otros análisis de correlación: analizando otras posibles correlaciones entre COX-2, PAR-2 y MCs triptasa-positivos con densidad de fibroblastos, expresión de p53 y elastosis, sólo se encontró una asociación estadísticamente significativa entre la expresión de p53 y la densidad de fibroblastos en tejidos de labio normal, la cual no se observó en QA. Además, utilizando todos estos marcadores en un modelo de regresión logística (forward stepwise de Wald) se encontró que COX-2 es el marcador significativo de predicción de QA, lo que resalta la importancia de detectar por inmunohistoquímica este marcador al momento del diagnóstico. La detección de COX-2 se ha incorporado como parte del diagnóstico de las lesiones de QA en la clínica de medicina oral de la Facultad de Odontología de la Universidad de Concepción. Objetivo III: Determinar el efecto de la interacción MC-fibroblasto y MC-queratinocito en presencia de luz UVB sobre la expresión de PAR-2, COX-2 y la producción de PGE2 in Vitro 1. Determinar los efectos de la luz UVB sobre la expresión de PAR-2 y COX-2 y producción de PGE2 en queratinocitos y fibroblastos humanos 2. Determinar los efectos de la luz UVB sobre la liberación por parte del MC de triptasa y otros mediadores del daño actínico (ej. Histamina, beta-hexosaminidasa) 3. Determinar el efecto de triptasa y medio condicionado de MCs irradiados con luz UVB sobre queratinocitos y fibroblastos con respecto a su expresión de OAR-2, COX-2 y su producción de PGE2 4. Realizar co-cultivos de MCs con fibroblastos o con queratinocitos en presencia de luz UVB, y determinar los efectos de esta interacción sobre la expresión de PAR-2, COX-2 y la producción de PGE2 en presencia de inhibidores de triptasa Este objetivo se está llevando a cabo por el alumno tesista de la carrera de Bioquímica, Sr. Roger Vefi, el cual terminaría su tesis a mediados de este año. Cabe destacar que este proyecto Fondecyt originalmente fue planificado para 4 años, de los cuales sólo se financiaron tres. Durante el desarrollo del proyecto se debieron implementar y estandarizar gran parte de las técnicas y métodos que se están utilizando en este objetivo. Esto incluye, obtención de cultivos primarios de fibroblastos a partir de explantes, cultivo y expansión de líneas celulares de mastocitos y queratinocitos, implementación y caracterización de la técnica de irradiación de cultivos celulares. Además en respuesta a los resultados obtenidos en los primeros 2 objetivos (aumento de la densidad de fibroblastos en QA y su asociación con MCs), se consideró importante incluir estudios de proliferación celular para los cuales se están utilizando 2 técnicas, incorporación de timidina tritiada y ensayo MU. Como se mencionó anteriormente, no se tuvo éxito en el desarrollo de cultivos primarios y líneas celulares de queratinocitos, por lo que no se incluyen resultados con este tipo celular. Por esta razón debió modificarse la hipótesis y objetivos de la tesis del alumno Roger Yefi, la cual se concentra en la interacción mastocitofibroblasto in vitro (se adjunta resumen actualizado de la tesis) lo que cuenta con la aprobación de los miembros de la comisión. Además la medición de PGs está pendiente, pero se cuenta con los sobrenadantes respectivos, por lo que se espera poder realizar las mediciones en el transcurso de este semestre. Por lo tanto los resultados que se discuten a continuación fueron obtenidos con cultivos primarios de fibroblastos y con la línea celular de mastocitos LAD2. 1. La Irradiación con luz UVB de fibroblastos de mucosa oral inhibe su proliferación en las primeras 48 horas post-irradiación (anexo de resultados III, figs 1-3). Se utilizaron fibroblastos sincronizados y no sincronizados, cuya proliferación fue medida por incorporación de timidita tritiada y ensayo MU, observándose una disminución significativa de la proliferación postirradiación con dosis de 300 y 600 J/m2 de luz UVB. No se observaron efectos con dosis menores de irradiación UVB (data no mostrada), por lo que se eligió seguir trabajando con dosis de 600 3/m2. 2. La irradiación con luz UVB de fibroblastos de mucosa oral altera la expresión de genes proInflamatorios y de la matriz extracelular (MEC) (anexo de resultados III, figuras 4-8). Análisis de los niveles de expresión a nivel de RNA mensajero de genes pro-inflamatorios como PAR2 y COX-2, y genes de la MEC como colágeno (tipo 1 y 111) y elastina, mostró que fibroblastos de mucosa oral normales expresan estos genes. Además se pudo detectar por inmunocitoquímica la expresión de COX-2, vimentina y pro¡ il-4-hidroxilasa, y se está trabajando en detectar PAR-2. La rei irradiación con luz UVB induce un aumento significativo de la expresión de RNA mensajero para PAR2 a las 9 horas post-irradiación (en fibroblastos no sincronizados), de COX-2 a las 12 horas postirradiación (fibroblastos sincronizados) y de elastina a las 36 horas post irradiación (fibroblastos no sincronizados). No se encontraron diferencias en la expresión de colágeno entre fíbroblastos irradiados y no irradiados. 3. La activación de mastocitos LAD2 resulta en la liberación de beta-hexosamiflidasa y triptasa (anexo de resultados III figuras 9-12). Para medir activación de mastocitos se están utilizando dos técnicas, una colorimétrica de liberación de beta-hexosaminidasa, y la otra de liberación de triptasa por RIE. Los estudios preliminares se están realizando con betahexosaminidasa, un mediador almacenado en los gránulos del MC y que se libera junto a histamina y triptasa, cuya medición es de bajo costo. Se han realizado estudios preliminares de liberación de beta-hexosaminidaSa por MCs irradiados por UVB y se ha encontrado un aumento de la liberación de beta-hexosarninidasa con 3003/m2. Además se ha medido la liberación de beta-hexosaminidaSa en respuesta a la estimulación de células LAD2 con compuesto 48/80. Se encontró que UVB más 48/80 aumenta la liberación de beta-hexosamiflidasa. Además se encontró que el compuesto 48/80 en concentraciones del rango de 0.16-1 xg/mi induce liberación de triptasa por mastocitos LAD-2. Además se caracterizó el contenido de histamina de esta línea celular; publicado en Rudolph et al 2008, anexo 1.2). 4. El medio condicionado de mastocitos LAD2 activados por compuesto 48180 estimula la proliferación de fibroblastos irradiados con luz UVB a niveles similares al control (anexo de resultados III, figuras 13 y 14). Medio condicionado de mastocitos activados por compuesto 48/80 fue agreagado a fibroblastos en cultivos con o sin irradiación UVB. Se utilizaron distintas concentraciones de mastocitos, desde la relación fibroblasto-mastocito de 2:1, que es lo que se observa in vivo, a relaciones de 10.000:1. Se observó que en las relaciones de 2:1, 100:1, 1000:1 y 10.000:1, el medio condicionado de MCs estimulaba un aumento significativo de la proliferación de fibroblastos irradiados con UVB en relación a fibroblastos irradiados sin medio condicionado. S. Triptasa recombinante estimula la proliferación de fibroblastos irradiados con luz UVB a niveles similares o superiores al control (anexo de resultados III, figuras 15 y 16). Utilizando fibroblastos sincronizados y no sincronizados se midió proliferación por el ensayo MU y de incorporación de timidita tritiada, encontrándose un aumento significativo de la proliferación de fibroblastos irradiados a las 24 horas post-irradiación. 6. Efecto del medio condicionado de mastocitos y triptasa sobre la expresión de genes proinflamatorios y de la MEC por fibroblastos irradiados con UVB (anexo de resultados III, figura 17-19). Utilizando la técnica de RT-PCR se midió la expresión de PAR-2, COX-2, colágeno (1 y III) y elastina en fibrobiastos incubados con triptasa o medio condicionado de MCs. De los experimentos realizados, sólo se encontró un aumento significativo en la expresión de elastina a las 24 horas post-irradiación de fibroblastos incubados con medio condicionado de MCs en relación a los controles no irradiados y a los fibroblastos irradiados. Hasta el momento no se han encontrado diferencias significativas en la expresión de los otros mediadores, por lo que se está realizando un número mayor de experimentos. 7. Estudios a realizar durante el primer semestre del 2008: se medirá la liberación de PGE2 por parte de fibroblastos irradiados en presencia o ausencia de medio condicionado de MCs y triptasa. Se utilizarán inhibidores de triptasa y PAR-2 para analizar el posible rol de la vía triptasa/PAR-2/COX2/PGE2 en la proliferación de fibroblastos de mucosa oral. * ------------ 7 III. PRODUCTOS GENERADOS POR EL PROYECTO En esta sección debe incluir todo documento o material cuyo contenido corresponda substancialmente a los objetivos del proyecto que se informa y en los que se indique el NO del proyecto FONDECYT. Aténgase a los formatos que se incluyen para cada tipo de producto generado. Adjunte copia de los documentos no enviados previamente a FONDECYT. Utilice las hojas adicionales que sean necesarias. Si Ud. tiene un proyecto de Incentivo a la Cooperación Internacional, destaque con (c) las publicaciones generadas como producto del mismo a continuación de las que corresponden al Regular 1. Artículos en revistas científicas nacionales o extranjeras con Comité Editorial. Marque con una 'EX" lo que corresponda. Para trabajos En Prensa! Aceptados/ Enviados adjunte copia de carta de aceptación o de envío. Autor(a)(es/as) Título (Idioma Original) A Martínez, U Brethauer, J Borlando, ML Spencer, IG Rojas* (anexo 1.1) Epithelial expression of p53, mdm-2 and p21 in normal hp and actinic cheihitis Nombre Completo de la Revista. Oral Oncology Ref. bibliográfica Pág. _______ (publicado online en NO Año: 2008 Vol. http://intl.elsevierhealth.com/journals/oron/) LI En preparación Enviada X Publicada ¡En LI Aceptada Prensa Proyecto DIUC 204.103.015-1.0 Estado de la publicación a la fecha.* Otras fuentes de financiamiento, si las hay Autor(a)(es/as) Título (Idioma Original) E MI Rudolph, Y Boza, R Yefl, S Luza, E Andrews, AB Penissi, P Garrido, IG Rojas (anexo 1.2) The influence of mast cell mediators on migration of SW756 on Cervical carcinoma celis Nombre Completo de la Revista. Journal of Pharmacological Science Ref. bibliográfica Año:2008 Vol. 106 Estado de la publicación a la fecha.* O Enviada x Publicada ¡En LI Aceptada Prensa Fondecyt 1020458 y DIUC 205.32.13-1 Otras fuentes de financiamiento, si las hay Autor(a)(es/as) Título (Idioma Original) Pág. 208-218 O En preparación Rojas IG*, Martínez A, Brethauer U, Grez P, Yefi R, Luza S, Marchesani E, Rudolph MI (anexo 1.3) COX-2 expression In Actinic Cheilitis and its association with PAR-2 and tryptase-positive mast cells Nombre Completo de la Revista. Oral Oncology Ref. bibliográfica Año: Estado de la publicación a la fecha.* LI Otras fuentes de financiamiento, si las hay NO 2 N° Publicada LI Aceptada ¡En Prensa DIUC 203103011-1.0. 8 Pág. O Enviada X En preparación Autor(a)(es/as) IG Rojas & MI Rudolph. Título (Idioma Original) El Mastocito y sus proteasas en inflamación Oral Nombre Completo de la Revista. Ref. bibliográfica Estado de la publicación a la fecha.* Revista Chilena de Periodoncia y Oseointegración Año:2005 Vol. 2 N° 2 Pág. 18-23 O Aceptada X Publicada ¡En Prensa O Enviada ,X En préparación Otras fuentes de financiamiento, si las hay Autor(es) Spencer ML, Retamal 1, Edwards R, Ortega J, Martínez MA, Rojas IG. Título del Artículo Increased microvascular density is associated with tryptase during hp carcinogenesis Journal of Oral Pathology and Medicine Nombre Completo de la Revista. Ref. bibliográfica Año: Estado de la publicación a la fecha.* LI Publicada ¡En Prensa / Pág. N° O Enviada O Aceptada En preparación Otras fuentes de financiamiento, si las hay Autor(es) Boza Y, Rudolph MI, Luza S, Rojas IG. Título del Artículo Elastosis is associated with increased f'ibroblast and mast cell density in actinic cheilitis i Oral Pathology and Medicine Nombre Completo de la Revista. Ref. bibliográfica Estado de la publicación a O Publicada /En la fecha.* Prensa Otras fuentes de financiamiento, si las hay Pág. Año: O Enviada O Aceptada I En preparación Título del Artículo Characterization of mast cell subpoputations in oral hichen planus Autor(es) U Brethauer, A Martínez, MI Rudolph, F Marchesarii, IG Rojas Nombre Completo de la Revista. J Oral Pathology and Medicine Ref. bibliográfica Año: Estado de la publicación a la fecha.* O Publicada /En Prensa Otras fuentes de financiamiento, si las hay O Aceptada Pág. O Enviada I1 En preparación - 2. Otras publicaciones/ productos. Autor(a)(es/as) Dictante Título (Idioma Original) Tipo de publicación o producto Marque con una "X" lo que corresponda Gina Rojas Rudolph Conferencia "inflamación y carcinogénesis de labio inducida por luz ultravioleta" (anexo 2.1) Monografía Libro Capítulo de Libro Mapa Exposición de Arte Otro. Especificar: Conferencia E fl E E E E E E Seminario ¡Taller ¡Curso Informe Técnico Software Patente Editor(es) (Libros o Capítulos Libros) Nombre de la Editorial! Organización leras Jornadas de Investigación de la Facultad de Odontología de la Universidad de Concepción Lugar y Fecha de Publicación País: Chile de Ciudad: Concepción Fecha: 4 de Enero de 2008 Autor(a)(es/as) Dictante Título (Idioma Original) Tipo de publicación o producto Marque con una "X- lo que corresponda Gina Rojas Rudolph Conferencia "inflamación y carcinogénesis de labio inducida por luz ultravioleta: estudios in vivo e in vitro " (anexo 2,2) E Seminario ¡Taller /Curso E Monografía Libro E Informe Técnico E E Software E Capítulo de Libro E Patente E Mapa Exposición de Arte E Otro. Especificar: Conferencia Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial/ Organización Simposio Medicina y Patología Oral, XX Reunión Anual IADR División Chile Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Santiago Fecha: 9 de Noviembre de 2007 10 Autor(a)(es/as) Dictante Título (Idioma Original) Tipo de publicación o producto Marque con una "X" lo que corresponda Pamela Davis Conferencia "Caracterización de la expresión de Triptasa, COX-2 y PAR-2 en tejidos con inflamación periodontal" (anexo 2.3) Monografía fl Seminario /Taller /Curso E] Informe Técnico LI Libro LI Software LI Capítulo de Libro E] Mapa LI Patente Arte Exposición de LI Otro, Especificar: Conferencia E Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial/ Organización II Curso de Metodología de Investigación en Periodoncia Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Santiago Fecha: 7 de Diciembre de 2007 Autor(a)(es/as) Dictante Título (Idioma Original) Gina Rojas Rudolph Tipo de publicación o producto LI E] E] LI Marque con una X" lo que corresponda Charla 1000 Científicos, 1000 Aulas de EXPLORA CONICYT: 'Cáncer bucal, sus causas y cómo prevenirlo" (anexo 2.4) Monografía Libro Capítulo de Libro Mapa [1] Exposición de Arte Otro. Especificar: Charla E] Seminario ¡Taller /Curso E] Informe Técnico LI Software E] Patente Editor(es) (Libros o Capítulos Libros) de Nombre de la Editorial! Organización Colegio San Pedro Nolasco, Concepción Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Concepción Fecha: 10 de Octubre 2007 Áir(a)(es/as) Dictante Título (Idioma Original) 1 Tipo de publicación o producto Marque con una "X - lo que corresponda Yadira Boza Orea muno Conferencia "Caracterización de la elastosis y su asociación con la interacción mastocito-fibroblasto en quellitis actínica" (Anexo 2.5) E Seminario ¡Taller /Curso Monografía E Informe Técnico E Libro E Software Capitulo de Libro E E Patente Mapa E E Exposición de Arte Otro. Especificar: Conferencia E Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Facultad de Odontología, Universidad de Concepción Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Concepción Fecha: 27 de Julio de 2007 Autor(a)(es/as) Dictante Gina Rojas Rudolph Título (Idioma Original) "Curso de Actualización en inmunología Oral: Acercando la ciencia Básica a la Clínica" (anexo 2.6) Tipo de publicación o producto E Monografía E Libro E Capítulo de Libro E Mapa E Exposición de Arte Marque con una 'X" lo que corresponda x Seminario ¡Taller /Curso E Informe Técnico E Software E Patente Otro. Especificar: Conferencia Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Colegio de Cirujano Dentistas de Chile, filial Concepción. Lugar y Fecha de Publicación País: Chile L Ciudad: Concepción Fecha: 5 y 12 de Mayo de 2007 (21 horas) 12 Autor(a)(es/aS) Dictante Alejandra Martínez Título (Idioma Original) La realidad del cáncer bucal en América latina(Anexo 2.7) Tipo de publicación o producto E Monografía E Libro E Capítulo de Libro E Mapa E Exposición de Arte Marque con una -X- lo que corresponda x Seminario ¡Taller ¡Curso E Informe Técnico E Software E Patente Otro. Especificar: Conferencia Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Facultad de Odontología, Universidad de Concepcón y Laboratorio Johnson &Johnson Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Concepción Fecha: 4 de Mayo de 2007 Autor(es) Dra. Isolde Gina Rojas Rudolph Título 'Inflammation and hp carcinogenesiS" Tipo de publicación o producto Marque con una "X" lo que corresponda Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Lugar y Fecha de Publicación X Seminario ¡Taller! Curso Monografía Informe Técnico Libro Software Capítulo de Libro Patente Mapa Exposición de Arte Otro. Especificar: Presentación en Inglés fl E E n E E Presentacion de Líneas de Investigacion de la Universidad de Concepción al Dr. Douglas E. Vaughan, Chairman de la División Cardiovascular de Vanderbilt University (Programa de Biomedicina) Ciudad: Concepción País: Chile Fecha: 27 de Noviembre de 2006 13 Autor(es) Dra. IG Rojas Título Conferencia: "Bases celulares y moleculares del desarrollo del cáncer oral" Tipo de publicación o producto E E fl Marque con una "X"Io que corresponda Monografía Libro Capítulo de Libro Mapa Exposición de Arte Otro. Especificar: Conferencia E E E E E E Seminario /Taller /Curso Informe Técnico Software Patente Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial/ Organización Salón Dental Chile Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Concepción Fecha: 9 Noviembre 2006 Dra, Isolde Gina Rojas Rudolph Título Conferencia: "Rol del mastocito en la patogénesis de la enfermedad periodontal" Tipo de publicación o producto E E D E E Marque con una "X- lo que corresponda Monografía Libro Capítulo de Libro Mapa Exposición de Arte Otro. Especificar: Conferencia E E LI O Seminario ¡Taller! Curso Informe Técnico Software Patente Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Reunión de la Sociedad de Periodoncia de Chile filial Concepción Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Concepción Fecha: 30 Septiembre 2006 14 ---------------------------Dra. Isolde Gina Rojas Rudolph Autor(es) Título Tipo de publicación o producto Marque con una "X" lo que corresponda Conferencia: "Inflamación y Carcinogénesis de labio inducida por luz ultravioleta" LI Seminario /Taller/ Curso O Monografía ¡j Informe Técnico LI Libro LI Software Capítulo de Libro o LI Patente LI Mapa - LI Exposición de Arte Otro. Especificar: Conferencia Editor(es) (Libros o Capítulos de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Primera jornada de investigación en Biomedicina de la Universidad de Concepción Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Fecha: 10 de Ciudad: Concepción Junio 2006 1 Autor(es) IG Rojas Título "Estudiando la carcinogéneSiS oral en la Facultad de Odontología de la Universidad de Concepción" Tipo de publicación o producto Marque con una 'X" lo que corresponda Monografía LI Libro E Capítulo de Libro LI Mapa Ex posición de Arte Otro. Especificar: x Seminario /Taller /Curso [] Informe Técnico E Software LI Patente Semana Nacional de la Ciencia y la Tecnología del programa EXPLORA. Editor(es) (Libros o Capítulos XI de Libros) Nombre de la Editorial! Organización Liceo La Asunción Lugar y Fecha de Publicación País: Chile Ciudad: Talcahuano Fecha: Oct. 2005 15 IG Rojas [Autor(es) iiiio Rol del mastocito en la carcinogénesiS oral. Tipo de publicación o producto fl LI EJ EJ Marque con una "X" lo que corresponda Seminario ¡Tallen Curso fl Informe Técnico EJ Software LI Patente Monografía Libro Capitulo de Libro Mapa LI Exposición de Arte Otro. Especificar: X Editor(es) (Libros o Capítulos Dictada a los alumnos del Programa de Doctorado en Ciencias Biológicas de Libros) Nombre de la Editorial/ Organización Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción Lugar y Fecha de Publicación Ciudad: Concepción País: Chile Fecha: Marzo-2005 Adjunte copia del resumen o 3. p resentaciones a Congresos Nacionales e Internacionales. no la ha enviado previamente. texto de la ponencia y de la tapa de/libro de Resúmenes, si Autor(a)(es/aS) MARTÍNEZ A*, BRETHAUER U, BORLANDO 3, SPENCER ML, ROJAS IG. Expresión Epitelial de p53, mdm-2 y p21 en Labio Normal y Queilitis Actínica (anexo 3.1) Nombre del Congreso XX Reunión Anual de la International Association for Dental Research (IADR) División Chile Fecha: 8-10 Diciembre Ciudad: Santiago País: Chile Lugar y Fecha 2007 Título (Idioma Original) Autor(a)(es/aS) SALAZAR P, WENDLER M*, MARTINEZ A, GREZ P, ROJAS IG. Título (Idioma Original) Aumento De La Densidad De Plasmocitos En Queilitis Actínica. (anexo 3.2) Nombre del Congreso XX Reunión Anual de la International Association for Dental Research (IADR) División Chile Fecha: 8-10 Diciembre Ciudad: Santiago País: Chile Lugar y Fecha 2007 [Ár(a)(es/as) RETAMAL IN*, AZOCAR F, DURÁN C, SPENCER M, ROJAS IG. Caracterización De Angiogénesis En Lesiones Premalignas Y Malignas De Labio. (anexo 3.3) Nombre del Congreso XX Reunión Anual de la International Associatiofl for Dental Research (IADR) División Chile Fecha: 8-10 Diciembre Ciudad: Santiago País: Chile Lugar y Fecha / 2007 Título (Idioma Original) 11,1 Autor(a)(es/aS) MAURELIA MA*, LOBO O, RICKE CB, ARAYA C, MARTÍNEZ A, ROJAS IG. Frecuencia De Quellitis Actínica En Pescadores De Arauco, VIII Región. (anexo1 3.4) Nombre del Congreso XX Reunión Anual de la International AssociatiOn for Dental Research (IADR) j División Chile Diciembre Fecha: 8-10 Ciudad: Santiago País: Chile Lugar y Fecha 2007 Título (Idio ma Original) Autor(a)(es/aS) R Yefl, Y Boza, MI Rudolph, IG Rojas. Título (Idioma Original) Efecto de triptasa sobre la proliferación de fibroblastos de la mucosa bucal irradiados con luz UVB (anexo 3.5) Nombre del Congreso XXI Reunión Anual de la Sociedad de Biología Celular de Chile Lugar y Fecha Autor(a)(es/as) Título (Idioma Original) País: Chile Fecha: 7-10 de Octubre M 2007 Ciudad: Pucón 'IG Rojas*, Y Boza, S Luza, TM Oberyszyn, KL Tober, MI Rudolph. Effects of Ultraviolet B light on fibroblast proliferation and extracellular miix synthesis during hp carcinogeneSis (anexo 3.6) Nombre del Congreso 98th Annual Meeting of the American Cancer Association (AACR) Ciudad: Los California Angeles, Fecha: 14-18 de Abril de 2007 Lugar y Fecha País: EEUU Autor(es) ML Spencer, IN Retamal, RA Edwards, A Martínez, MI Rudolph & IG Rojas de Título Ponencia Nombre del Congreso Lugar y Fecha Autor(es) de Título Ponencia Nombre del Cong reso Lugar y Fecha la Increased tryptase-positive mast cells and angiogenesis during Hp carcinogenes (anexo 3.7) 96 Annual Meeting United States and Canadian Academy of Pathology (USCAP) País: EEUU Ciudad: San Diego, CA Fecha: Marzo 24-30, 2007 IG Rojas, Martínez A, Grez P, Luza S, Boza Y, Brethauer U, Marchesani F, Rudolph J MI. Aumento de la expresión de triptasa, PAR-2, y COX-2 en queilitis actínica la XIX Reunión anual de la IADR-Chile País: Chile Ciudad: Valparaíso 17 Fecha: 5-7 Octubre de Boza Y, Rudolph MI, Luza S, Gamonal J, Rojas IG. Autor(es) de Título Ponencia Nombre del Congreso la Caracterización de la elastosis en lesiones de quellitis actínica XIX Reunión anual de la IADR-Chile País: Lugar y Fecha Fecha: 2006. Ciudad: Valparaíso Chile la Variaciones en la expresión de Sindecán-1 durante la carcinogénesis de labio XIX Reunión anual de la IADR-Chile País: Chile Lugar y Fecha Fecha: 2006 Ciudad: Valparaíso de la Caracterización de angiogénesis y su asociación con mastocitos triptasa-positivos en el cáncer de labio y Congreso de Odontología Nombre del Congreso Fecha: Ciudad: Temuco Lugar y Fecha País: Chile Autor(es) IG Rojas, A Martínez, U Brethauer, F Marchesani, MI Rudolph de Título Ponencia 5-7 Octubre RA Edwards, M Spencer, A Martínez, IG Rojas. Autor(es) de Título Ponencia Octubre de Martínez A, Spencer M, Grez P, Rojas IG. Autor(es) de Título Ponencia Nombre del Congreso 5-7 la Characterization of tryptase, COX-2 and premalignant lesions of the lip 16-17 de Junio, PAR-2 expression in UV-induced Nombre del Congreso 97th Annual Meeting of American Association for Cancer Research (AACR), Lugar y Fecha País: EEUU Autor(es) Spencer ML, IG Rojas, U Brethauer, 3 Borlando, A Martínez Título de la Ponencia Mdm-2 and p21 Expression in Actinic Cheilitis Ciudad: Washington DC Fecha: 31 Marzo a 5 Abril 2006 Nombre del Congreso United States and Canadian Academy of Pathology Lugar y Fecha País: EEUU Ciudad: Atlanta, GA 18 Fecha: Feb 11-17, 2006 Autor(es) IG Rojas, A Martínez, U Brethauer, F Marchesani, P Grez, MI Rudolph. Título de la Ponencia Caracterización de la expresión epitelial de COX-2 y PAR-2 en queilitis actínica. Nombre del Congreso XVIII Reunión anual de la IADR sección Chile Fecha: 2-3 de Diciembre, 2005. Ciudad: Santiago Lugar y Fecha País: Chile Autor(es) A Martínez, U Brethauer, M Spencer, 3 Borlando, F Marchesani, IG Rojas. Título de la Ponencia Expresión de p53, p21 y mdrn-2 en queilitis actínica. Nombre del Congreso XVIII Reunión anual de la IADR sección Chile. Fecha: 2-3 de Diciembre, 2005. Ciudad: Santiago Lugar y Fecha País: Chile Autor(es) RA Edwards, IN Retamal, 3D Ortega, M Spencer, A Martínez, IG Rojas Título de la Ponencia Aumento de la angiogénesis y de mastocitos triptasa -positivos en cáncer de labio Nombre del Congreso XVIII Reunión anual de la IADR sección Chile Fecha: 2-3 de Diciembre, 2005. Ciudad: Santiago Lugar y Fecha País: Chile Autor(es) IN Retamal, 3D Ortega, RA Edwards, M Spencer, A Martínez, IG Rojas Cuantificación de densidad microvascular y triptasa en queilitis actínica y labio normal Nombre del Congreso XVIII Reunión anual de la IADR sección Chile Título de la Ponencia Fecha: 2-3 Dic, 2005. Ciudad: Santiago Lugar y Fecha País: Chile Autor(es) A Martínez, U Brethauer, M Spencer, P Grez, F Marchesani, AM Vergara, IG Rojas. Título de la Ponencia Expresión de Sindecán-1 en queilitis actínica por inmunohistoquímica. Nombre del Congreso XVIII Reunión anual de la IADR sección Chile Lugar y Fecha País: Chile Ciudad: Santiago 19 - Fecha: 2-3 Dic, 2005. Autor(es) U Brethauer, A Martínez, MI Rudolph, F Marchesani, IG Rojas. Caracterización de subpoblaciones de mastocitos en liquen plano oral reticular y atrófico/erosivo Nombre del Congreso VI Reunión de la Academia Iberoamericana de Patología y Medicina Bucal, Título de la Ponencia Ciudad: Guadalajara Fecha:26-28 Sept 2005 Lugar y Fecha País: México Autor(es) A Martínez, U Brethauer, F Marchesani, ML Spencer, J Borlando, IG Rojas Título de la Ponencia Expresión de p53, p21 y mdm-2 en queilitis actínica Nombre del Congreso VI Reunión de la Academia Iberoamericana de Patología y Medicina Bucal. Ciudad: Guadalajara Lugar y Fecha País: México Autor(es) Davis P, Escobar X, Vergara AM, Rojas IG Fecha: Sept 26-28, 2005 Caracterización de la Expresión de Triptasa, COX-2 y PAR-2 en Inflamación Periodontal Nombre del Congreso Primer curso de Metodología de Investigación en Periodoncia Título de la Ponencia Ciudad: Santiago Fecha: Nov. 10-11, 2005 Lugar y Fecha País: Chile Autor(es) A Martínez, U Brethauer, ML Spencer, J Borlando, IG Rojas Título de la Ponencia Expresión de p53, p21 y mdm-2 en queilitis actínica Nombre del Congreso XIV Congreso Chileno de Anatomía Patológica Lugar y Fecha País: Chile Ciudad: Concepción miel Fecha: Nov. 10-12, 2005 4. Tesis y /0 Memorias en ejecución y /0 terminadas en el marco del proyecto. Adjunte copia del resumen no informado anteriormente y certificación de aprobación, si corresponde. Título de la Tesis "Caracterización de la elastosis y su asociación con la interacción mastocitofibroblasto en quellitis actínica". (anexo 4.1) Nombre y Apellidos del(de la)/de los(las) Alumno(a)(os/as) y Tutor(a) Título! Grado Alumna: Yadira Boza Oreamuno Tutor: Isolde Gina Rojas Rudolph Institución, Facultad, Departamento Universidad de Chile, Facultad de Odontología, Departamento de Patología y Universidad de Concepción. Tesis desarrollada en la Facultad de Odontología, Depto. Estomatología Quirúrgica Lugar País: Chile Estado de Tesis En Ejecución: Magíster en Ciencias Odontológicas mención Patología y Medicina Oral Ciudad: Concepción Terminada: 2 de Agosto de 2007 Fecha de Término: Agosto 2007 Fecha de Inicio: Marzo 2006 Título de la Tesis "Estudio del efecto de la luz UV sobre la interacción Mastocito-Fibroblasto a través de la vía Triptasa/PAR-2/COX-2" (anexo 4.2) Nombre y Apellidos del(de la)/de los(las) Alu mno(a )(os/as) y Tutor(a) Título! Grado Alumno: Roger Yefi Tutor: Isolde Gina Rojas Rudolph Institución, Facultad, Departamento Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción Tesis para _obtener _el_título _profesional _de_Bioquímico Tesis desarrollada en Facultad de Odontología, Universidad de Concepción Lugar País: Chile Estado de Tesis En Ejecución: Ciudad: Concepción Terminada: X Fecha de Inicio: Marzo 2007 21 Fecha de Término: Título de la Tesis de final (Trabajo especialización) Nombre y Apellidos M /de los Alumno(s) Y Tutor ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DE COX-2 Y PAR-2 INFLAMACION GINGIVAL Y PERIODONTAL (anexo 4.3) EN TEJIDOS Alumnas: Pamela Davis y Ximena Escobar Tutor: Dra. Isolde Gina Rojas Rudolph Título! Grado alcanzado Institución, Facultad, Departamento Especialista en Periodoncia e Implantología Lu gar y Fecha País: Chile Estado de Tesis En Ejecución: Facultad de Odontología, Universidad de Concepción Ciudad: Concepción Terminada: x Fecha de Inicio: 15 Marzo 2007 22 Fecha de Término: Diciembre 2007 CON IV. DESTAQUE OTROS LOGROS DEL PROYECTO TALES COMO: • Estadías de investigación. • Formación de recursos humanos exceptuando tesistas ya informados. • Actividades de difusión y/o extensión en la temática del proyecto. • Cualquier otro logro no contemplado en los ítem anteriores y que Ud. quiera destacar. Estadías y visitas de Investigación: • Visita del alumno Mariano Vera, del Programa de Doctorado en Biología Celular, Universidad de Cuyo, Mendoza (Febrero 2008) • Estadía de Investigación de la alumna de la Carrera de Ciencias Biomédicas de la Facultad de Medicina de la Universidad Estatal de Ohio, a concretarse en Julio de 2008 • Estadía del Alumno de 6to año de Medicina de la Universidad Austral de Chile Christian Siegel (duración de 1 mes) • Estadía de Investigación de la Dra. Sandra Luza (Bioquímico, PhD) en el laboratorio de Biología y Patología Oral (duración 1 año). • Visita de la Dra. Iris Espinoza (Departamento de Patología, Universidad de Chile) al Laboratorio de Biología y Patología Oral (duración de 2 días). Formación de recursos humanos: Dirección de alumnos ayudantes de pregrado: • Dirección de 3 alumnos ayudantes de la Carrera de Odontología por año de proyecto (total 9), los cuales presentaron resúmenes en la Reunión anual de la internacional Association for Dental Research (IADR), Chile (ver anexo 3). Uno de ellos, Rodrigo Edwards, obtuvo mención honrosa por la presentación en modalidad oral del trabajo "Caracterización de angiogénesis y su asociación con mastocitos triptasa -positivos en el cáncer de labio" en el Congreso de Odontología de la Universidad de la Frontera (Junio 2006) Unidades de Investigación: Preg ra do • Dirección de cinco alumnos de la Carrera de Tecnología Médica, Universidad de Concepción (Marzo 2007-presente). • Dirección de dos alumnos de la Carrera de Biología, Universidad de Concepción (Dic. 2007-pte.) Post-grado • Dirección de la alumna del programa de Magíster en Ciencias Odontológicas de la Universidad de Chile, Dra. Yadira Boza (Dic. 2005-Feb. 2006) • Dirección de dos alumnas del programa de Especialización en Periodoncia e Implantología de la Facultad de Odontología de la Universidad de Concepción (2005). Por su trabajo obtuvieron el premio de laboratorios DENTAID a los mejores trabajos de investigación presentados en el "Primer Curso de Metodología de la Investigación en Periodoncia". Actividades de Difusión a la comunidad Publicaciones en diarios y revistas de circulación regional y nacional: • Revista I+D (Universidad de Concepción): Proyecto Fondecyt "Rol del Mastocito en la patogénesis de la quellitis actínica". N°17, Julio 2007. • Diario El Sur de Concepción (Portada y pág. 7, Cuerpo 1): Entrevistada para el Artículo "Efectos del Sol causan estragos en los labios". Viernes 3 Marzo, 2006. • Revista NOS, entrevistada para el artículo "Investigación Avanzada en la Facultad de Odontología de la Universidad de Concepción", página 31. Octubre 2005. • Revista Panorama (Universidad de Concepción) Artículo "Especialistas insisten en prevención frente a rayos ultravioleta del sol", Concepción, 16 Marzo 2006. Programas de difusión en radio y televisión • TVU (Canal de Televisión de la Universidad de Concepción), Programa Conversando la odontología, capítulo "Estudio multidisciplinario de la quellitis actínica en la Facultad de Odontología de la Universidad de Concepción", junio 2005. • Invitada al programa "por tu Salud" de la Radio Universidad de Concepción para hablar de la queilitis actínica y el cáncer de labio (enero 2007) • Página Web de CONICYT Sección Noticias: "Efectos del sol causan estragos en los labios" publicado marzo 2006-pte. 23 V. RESUMEN Describa en forma precisa y breve el tópico general del proyecto, sus metas y objetivos y los resultados alcanzados. Utilice un lenguaje apropiado para la comprensión del público no especialista en el tema. Esta información podrá ser difundida. (No debe exceder este espacio en fuente Verdana 9) La queilitis actínica (QA) es una lesión premaligna del bermellón del labio que afecta a Introducción: personas sobreexpuestas a la radiación ultravioleta (UV) solar, la cual puede progresar a un cáncer de labio. En las últimas décadas, en Chile ha aumentado la incidencia de cáncer de piel y labios debido al debilitamiento de la capa de Ozono a nivel Antártico. La QA puede presentarse clínicamente como resecamiento, ulceración, induración y/o pérdida del límite piel-bermellón. Histológicamente la QA se caracteriza por cambios epiteliales y de tejido conectivo similares a lesiones actínicas de piel. Los cambios del conectivo incluyen presencia de elastosis solar y de un infiltrado inflamatorio. Este infiltrado se caracteriza por la presencia de MCs, que son células del sistema inmune residentes en piel y mucosas. En piel se ha demostrado que los mastocitoS (MC5) son importantes efectores del daño actínico. En el labio se ha encontrado un aumento progresivo de la densidad de MCs durante el proceso de carcinogéneSiS. Estos MCs son ricos en una proteasa denominada triptasa, y se ubican principalmente alrededor de las zonas de elastosis solar y en el área subepitelial. También es característico de las lesiones actínicas el aumento de la expresión de la forma inducible de la enzima que cataliza la conversión de ácido araquidónicO en prostaglandinaS (PGs), ciclooxigeflaSa-2 (COX-2). Esto lleva a un aumento de la producción de PGs y de inflamación, resultando en daño genómico a nivel epitelial y alteraciones a nivel del estroma que rodea a las lesiones premalignas y malignas. Recientemente se ha demostrado que triptasa estimula un aumento de la expresión de COX-2 a través de la activación del receptor activado por proteasas PAR-2. Este mecanismo tendría un rol preponderante en carcinogéflesis gastrointestinal y pulmonar, así como en la patogénesis de lesiones f9bro pro¡ iferatiVas, sin embargo, su contribución a la carcinogénesis inducida por luz UV es desconocida. Hipótesis, objetivos y métodos: hipótesis de que los MCs tienen un rol fundamental en la Este proyecto se concentró en probar la patogénesis de la QA, a través de la liberación de triptasa que activaría al receptor PAR-2 en queratinocitos y fibroblastoS del labio, resultando en un aumento de la expresión de COX-2. Se analizaron biopsias de labio normal (n=24) y QA (n=45) por métodos inmunohistoqUímiCOs, histoquímicoS y de RT-PCR, para determinar cambios en la expresión de COX-2, PAR-2, colágeno, elastina y proteínas reguladoras del ciclo celular. También se determinó la densidad de fibroblastos y mastocitoS triptasa-positivOs, así como la densidad de fibras colágenas y elásticas. Además se realizaron utilizando cultivos primarios de fibroblastos de mucosa oral y la línea celular de MCs estudios in vitro LAD2, para estudiar el efecto de la luz UVB y de mediadores del MC sobre proliferación y expresión A nivel epitelial, los resultados mostraron que en QA había gériica por fibroblastos orales. Resultados: un aumento de la expresión de p53, mdm-2, PAR-2 y COX-2, así como de la densidad de MCs triptasapositivos subepitelialeS en relación al labio normal, encontrándose una asociación positiva entre la expresión de COX-2 y PAR-2, y entre la expresión de COX-2 y la densidad de MCs. Análisis de regresión logística mostraron que COX-2 es un marcador predictor de QA. A nivel conectivo se encontró un aumento de la densidad de fibras elásticas en QA, así como un aumento de la densidad de fibroblastos, ambos, la densidad de fibras elásticas y de fibroblastos estaban asociadas positivamente al aumento de mostraron que si bien la radiación UVB disminuye la proliferación de los MCs. Los estudios in vitro fibroblaStos, la presencia de medio condicionado de MCs o triptasa revertían este efecto aumentando su proliferación. A nivel de expresión génica la irradiación UVB de fibroblastos resultó en un aumento de la COX-2, PAR-2 y elastina, y el medio condicionado de mastocitos resultó en un aumento aún expresión de Los resultados sugieren que mayor de la expresión de elastina en fibroblastoS irradiados. Conclusiones; los MCs estarían contribuyendo al aumento de la expresión de COX-2 en el epitelio, y al aumento de la proliferación de fibroblastos y formación de elastosis en el conectivo de las lesiones de QA a través de la liberación de triptasa. Futuros estudios se concentrarán en seguir caracterizando la participación de la vía triptasa/PAR-2/COX2 en la carcinogénesiS de labio, y su posible intervención terapéutica para prevenir la malignización de las lesiones de QA. 24