CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÒN (HPLC

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FACULTAD: CIENCIAS BASICAS
PROGRAMA: MAESTRIA EN QUIMICA
DEPARTAMENTO DE: BIOLOGIA EN QUIMICA
CURSO
:
ÁREA:
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE
ALTA RESOLUCIÒN (HPLC)
CÓDIGO:
Electiva
REQUISITOS:
CRÉDITOS:
CORREQUISITO:
4
TIPO DE CURSO:
JUSTIFICACIÓN
La Cromatografía Líquida de Alta Presión(HPLC) o Resolución es una técnica
de permite separar, aislar e identificar los analitos de una mezcla de
compuestos químicos (basada en la transferencia de masa entre la fase
estacionaria y la fase móvil), por lo que es utilizada frecuentemente en
Bioquímica y Química Analítica para la separación de componentes de una
sustancia determinada, basándose en diferentes tipos de interacciones
químicas. Recientemente es una de las técnicas más utilizada en la industria
Química y de alimentos, ya que ofrece la posibilidad de identificar y cuantificar
sus componentes mediante el uso de sustancias patrón.
La cromatografía de líquidos abarca un grupo muy amplio entre los métodos
cromatográficos, puesto que el sistema ternario fase estacionaria/fase
móvil/analito ofrece muchas y muy distintas posibilidades para separar
compuestos químicos muy diferentes.
La cromatografía líquida “clásica” se lleva a cabo en una columna generalmente
de vidrio, la cual está rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en la
parte superior, se hace fluir la fase móvil a través de la columna por efecto de la
gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el
tamaño de las partículas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamaño de
los micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas presiones para lograr
que fluya la fase móvil. De esta manera, nació la técnica de cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC), que requiere de instrumental especial que
permita trabajar con las altas presiones requeridas.
La descripción de la HPLC no se puede basar solo en la instrumentación sino
que también hay que ofrecer una aproximación sistemática para lograr
separaciones adecuadas.
Este módulo busca dar a los estudiantes de la maestría en Química, las bases
teóricas de esta técnica y de igual manera capacitarlos en el manejo del
Cromatógrafo líquido, de manera que puedan aplicar estos conocimientos en el
desarrollo de su proyecto de investigación y de igual manera, durante su
desempeño como investigadores y como profesionales.
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OBJETIVO GENERAL
 Capacitar a los estudiantes de la Maestría en Química, en la técnica de la
Cromatografía Líquida de Alta Presión, de manera que hagan uso de ella
como método de separación, análisis, identificación y cuantificación de una
sustancia o un producto determinado.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Proporcionar los fundamentos de la separación por cromatografía
líquida
 Realizar una descripción de los instrumentos utilizados en la
cromatografía líquida
 Identificar las partes que componen un sistema Cromatográfico
 Diferenciar la Cromatografía líquida de la Cromatografía gaseosa
 Manejar adecuadamente el Cromatógrafo Líquido.
 Separar, identificar y cuantificar la cafeína en diferentes tipos de
bebidas comerciales.
COMPETENCIAS
 Análisis y aplicación de las técnicas cromatografías.
 Utilización de la HPLC, como herramienta para el desarrollo de una
propuesta de investigación.
Manejo del Cromatógrafo.
UNIDAD 1: Cromatografía Líquida de Alta Presión
TEMA
HORAS DE
CONTACTO
DIRECTO
HORAS DE TRABAJO
INDEPENDIENTE DEL
ESTUDIANTE
3
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 HPLC;
o
o
o
o
Instrumentación
Fase estacionaria
Fase móvil
Sistemas de detección
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UNIDAD 2: Aplicaciones de la Cromatografía Líquida
TEMA
 Aplicaciones del HPLC:
O Compuestos Químicos
O Alimentos
 Determinación de cafeína
en muestras de bebidas
comerciales- Laboratorio
HORAS DE
CONTACTO
DIRECTO
HORAS DE TRABAJO
INDEPENDIENTE DEL
ESTUDIANTE
4
12
17
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METODOLOGIA (Debe evidenciarse el empleo de nuevas tecnologías de
apoyo a la enseñanza y al aprendizaje)
 Exposiciones magistrales por el tutor del módulo
 Exposición por parte de los estudiantes
 Trabajo en el laboratorio con el Cromatógrafo.
SISTEMA DE EVALUACION
 Participación en el seminario
 Exposición de una publicación Científica en donde se ha utilizado la
técnica de HPLC
 Desarrollo del laboratorio
 Informe del laboratorio presentado por cada uno de los grupos de
estudiantes.
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BIBLIOGRAFIA BASICA
o Bidlingmeyer, Brian A. Practical HPLC Methodology and Applications.
Wiley-Interscience. U.S.A. 1992.
o Braithwaite y F.J. Smith, Chromatographic Methods, Blackie
Academic & Professional, 5a Ed., Glasgow, 1996
o Gismera García, María Jesús y Quintana Mani, Mª Carmen (2009).
Introducción a la Cromatografía Liquida de Alta Resolución. 1ª
Edición. Plaza edición: MADRID. ISBN: 9788483441459.
o Harold Mcnair, Benjamìn Esquivel (1973). Cromatografía Líquida de
Alta Presión. 1ª Ediciòn. Editorial: OEA.
Harris Daniel (2007). Análisis Químico Cuantitativo. 3ª Edición. Editorial
Revertè
o High Performace Liquid Chromatography, Analytical Chemistry by
Open Learning, John Wiley & Sons, Chichester, 1998
o Issa Katime, Oscar Katime y Daniel Katime (1998). Cromatografía
líquida: teoría y aplicaciones. Editorial: Universidad de Guadalajara.
ISBN 968–895-824-7.
o
Koog Douglas A, Holler F. James , Crouch Stanley R. (2008).
Principios de Análisis Instrumental. Cengage Learning Editores
o Ll. R. Snyder, J.J. Kirkland y J.L. Glajch, Practical HPLC Method
Development, John Wiley & Sons., New York, 1997
o Meyer, Veronika. Practical High-Performance Liquid Chromatography.
2nd Edition. John Wiley & Sons. USA.1994
o Parriott, Donald. A Practical Guide to HPLC Detection. Academic
Press. USA.1993.
o Patonay, Gabor. HPLC Detection: Newer Methods. VCH.
Germany.1992.
o Rubinson, K. A. Y Rubinson, J. F. (2001). Análisis Instrumental.
Pearson Education, S.A., Madrid. ISBN: 84-205-2988-5.
o Scott, Raymond P.W. Techniques and Practice of Chromatography.
Vol. 70. Chromatographic Science Series. Marcel Dekker. USA. 1995
o Scott, Raymond P.W. Liquid Chromatography for the Analyst. Vol. 67.
Chromatographic Series. Marcel Dekker. USA. 1994.
o Scott, Raymond P.W. Liquid Chromatography Colum Theory.
Separation Science Series. John Wiley & Sons. U.S.A. 1992.
o Skoog, D.A. y col. (2001). Principios de Análisis Instrumental. Quinta
Edición. Mac Graw Hill/Interamericana de España, S.A.U. ISBN: 003-002078-6
o Skoog, Douglas y LEARY, James. Análisis Instrumental. 4ª Edición.
McGraw-Hill. España.1994.
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BIBLIOGRAFIA COMPLEMENTARIA
http://algunoslibros.blogspot.com/2006/09/instrumental.html
http://algunoslibros.blogspot.com/2006/09/bioestadistica.html
DIRECCIONES ELECTRONICAS DE APOYO AL CURSO
o
http://www.sct.ub.es/serveis/01030400/ufun_000.htm
o
http://www.bioq.unizar.es/FMBvirtual/PurProt/croma.htm
o
http://www2.uah.es/biomodel-misc/anim/cromat/crom-afinidad_txt.htm
o
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/itp.htm
o
http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/biologia//tecnicasdebiologia.htm
o
http://wwwbioq.unizar.es/FMBvirtual/PurProt/croma.htm
o
http://relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/itp.htm
o
http://www.ecogen.com/agarosa.htm
http://www.solutions.iq.unesp.br seleccionar HPLC
ACS Agricultural & Food Chemistry Division
ACS Division of Fuel Chemistry
AgDB: Agriculture-Related Information Systems, Databases & Datasets
Agricultural & Food Chemistry, Chemical Institute of Canada, Hamilton Section
Agricultural & Food Chemistry, Chemical Institute of Canada, Hamilton Section
Agricultural & Food Sciences Scholarly Societies, Waterloo U
Agriculture & Agri-Food Canada
Agriculture & Agri-Food, Canada
Agriculture & Food Business Directory & Resources
Alta Vista Food Science Directory
AltaVista Food Science Directory
American Association of Cereal Chemists (AACC)
American Association of Cereal Chemists (AACC) Divisions
American Association of Cereal Chemists Publications
American Crop Protection Association (ACPA, US)
American Society for Nutritional Sciences
American Society of Brewing Chemist (ASBC)
American Society of Brewing Chemist (ASBC)
Australian Society of Cosmetic Chemists
Beer & Brewing WWW Virtual Library
Bread Chemistry
Center for Food Safety & Applied Nutrition (CFSAN), Food & Drug Administration
Center (FDA, US) Resources Page
 EN
Cereal
Foods
World
NOTA:
CADA
UNA
DE LAS UNIDADES EL DOCENTE DEBERA PROPONER
MÍNIMO
UNA LECTURA
 Chemical
Senses EN LENGUA INGLESA Y SU MECANISMO DE CONTROL
 Chemicals in Food, Center for Food Safety & Applied Nutrition, Food & Drug
Administration (FDA, US)
 ChemIndustry.com Flavors, Fragrances & Aroma Chemicals
 ChemIndustry.com Food Ingredients & Additives
 Chemistry & Industry
Comments on Agricultural & Food Chemistry, Gordon & Breach
o

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UNIDAD Nº: 1
NOMBRE DE LA UNIDAD: CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA PRESIÓN
COMPETENCIAS A DESARROLLAR: Analizar el uso del HPLC, como herramienta para el desarrollo de una investigación.
CONTENIDOS
 HPLC;
o Instrumentac
ión
o Fase
estacionaria
o Fase móvil
o Sistemas de
detección:
 VisibleUltravioleta
ACTIVIDADES A DESARROLLAR
POR EL PROFESOR
HORAS
CONTACTO
DIRECTO
Exposiciones magistrales
Conversatorios
ACTIVIDADES A DESARROLLAR
POR EL ESTUDIANTE
HORAS
TRABAJO
INDEPEND
IENTE
HORAS
ACOMPAÑAMIEN
TO AL TRABAJO
9
2
INDEPENDIENTE
Lecturas y análisis
3
Exposición
ESTRATEGIAS DE EVALUACIÓN
QUE INCLUYA LA EVALUACIÓN
DEL TRABAJO INDEPENDIENTE
Exposición de un artículo
científico
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UNIDAD Nº: 2
NOMBRE DE LA UNIDAD: APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
 COMPETENCIAS A DESARROLLAR: Manejo del Cromatógrafo
CONTENIDOS
ACTIVIDADES A DESARROLLAR
POR EL PROFESOR
HORAS
CONTACTO
DIRECTO
ACTIVIDADES A DESARROLLAR
POR EL ESTUDIANTE
HORAS
TRABAJO
INDEPEND
IENTE
HORAS
ACOMPAÑAMIEN
TO AL TRABAJO
12
2
51
8
INDEPENDIENTE
ESTRATEGIAS DE EVALUACIÓN
QUE INCLUYA LA EVALUACIÓN
DEL TRABAJO INDEPENDIENTE
 Aplicaciones
del HPLC:
Exposiciones magistrales
o Compuestos Conversatorios
químicos
Capacitación en el manejo
O Análisis de del HPLC
Alimentos
 Determinació
n de cafeína Orientación de la práctica.
en muestras
de bebidas
comercialesLaboratorio
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Determinación de Cafeína por
HPLC
Desarrollo de la práctica.
Presentación del informe de la
práctica.