bilirrubinas totales

BILIRRUBINAS TOTALES
PRESENTACIÓN
NÚMERO/PRUEBAS
VOLUMEN/PRUEBA
REACTIVO 1/BILIRRUBINA TOTAL
REACTIVO 2/NITRITO DE SODIO
CALIBRADOR DE B. TOTAL
MUESTRA
1 x 100 mL
100
1.0 mL
2 x50 mL
1X10mL
5 mg/dl
Suero
USO Y CARACTERISTICAS
El Kit de diagnóstico BILIRRUBINAS TOTALES XERION, es un sistema
para la determinación cuantitativa de la Bilirrubina total en suero, con
reacción de punto final.
Esta técnica es fácilmente aplicable a analizadores automáticos.
Solamente para uso diagnóstico IN VITRO.
RESUMEN DEL METODO
La bilirrubina es un metabolito de la porción hemo de las proteínas
hemo, principalmente hemoglobina. La bilirrubina se excreta en la bilis
y el intestino desde el hígado. El sitio del catabolismo de la
hemoglobina es la sistema retículo endotelial (RES). La bilirrubina se
libera en el torrente sanguíneo donde se une fuertemente a la
albúmina y se transporta al hígado. Tras la absorción por el hígado, la
bilirrubina se conjuga con ácido glucurónico, para formar la bilirrubina
mono y diglucurónido, que están metabolitos solubles en agua. Los
1
metabolitos se excretan en la bilis. La elevación de la bilirrubina sérica
total puede ocurrir debido a (1) excesivo hemólisis o destrucción de
las células rojas de la sangre (por ejemplo, enfermedad hemolítica del
recién nacido), (2) las enfermedades del hígado (por ejemplo,
hepatitis y cirrosis), (3) obstrucción de las vías biliares (por ejemplo,
1
cálculos biliares). La mayoría de los métodos químicos para la
determinación de bilirrubina total se basa en la reacción entre el ácido
sulfanílico diazotado y bilirrubina para producir azobilirrubina, que
absorbe al máximo a 560nm. Tales pruebas a menudo se llevan a cabo
en presencia o ausencia de un disolvente orgánico por ejemplo,
metanol, para distinguir la bilirrubina libre de bilirrubina conjugada en
2
una base de solubilidad diferencial.
PRINCIPIO
El acido sulfanilico reacciona con el nitrito de sodio para producir ácido
sulfanilico diazotizado (Diazo). La bilirrubina directa e indirecta se acopla
con el Diazo para producir azobilirrubina en presencia de DMSO. La
intensidad del color producido es directamente proporcional a la
cantidad de la concentración de bilirrubina total presente en la muestra.
HCL
Ácido Sulfanílico +NaNO2
ácido Sulfanilico Diasotizado
HCL
Bilirrubina + ácido Sulfanilico Diasotizado
azobilirrubina
MATERIALES REQUERIDOS
Nombre
R1/Bilirrubina
total
R2/Nitrito-de
Sodio
CALIBRADORDE
BILIRRUBINA
Contenido (concentración)
Ácido Sulfanílico 32 mM y HCl 165mM
Dimetilsulfonico 7M Surfactactante.
Nitrito de sodio 60 mM
Sal N- 1 – Naftiletilendiamina diclorhidrato
(5mg/dl).


Espectrofotómetro 560 nm (540-560 nm)
Sueros control con valores conocidos de Bilirrubina Total
normal y patológica.
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Bilirrubina Total: Añadir 0.05 ml (50μl) de nitrito de sodio por 1.0 ml
de reactivo de bilirrubina total y mezclar.
Ejemplo: 0.5ml de nitrito de sodio/ l0ml de bilirrubina total, 1ml de
nitrito de sodio/20ml de reactivo de bilirrubina total, etc.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Los reactivos del kit de diagnostico BILIRRUBINA TOTAL XERION
deben ser almacenados de 2 a 8°C en sus respectivos recipientes bien
cerrados y alejados de la luz solar directa
Los reactivos de trabajo combinado pueden ser almacenados en una
botella ámbar por 8 horas como máximo a temperatura ambiente.
No congele los reactivos
Evite la exposición directa con la luz solar.
OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
Toda muestra biológica debe ser manipulada con la suficiente
precaución como si fuera potencialmente infecciosa y recolectarse de
acuerdo a las normas de bioseguridad.



Las muestras deben ser analizadas antes de 2 horas, si no se
pueden procesar en este tiempo, deben ser almacenadas de 28°C en un lugar protegido de la luz directa. Utilice muestras sin
anticoagulante, centrifugar y separar inmediatamente el plasma
o suero de las células.
Cuando la muestra es protegida de la luz el analito es estable
o
o
por 7 días entre 4°C a 8 C, por 3 meses a -20 C.
La muestra de suero obtenida debe ser protegida de la luz
natural o artificial hasta el momento de su procesamiento.
La luz solar directa puede causar disminución de la bilirrubina
hasta del 50 % en 1 hora
La hemólisis interfiere con la prueba. No usar sueros lipémicos
PROCEDIMIENTO
1. Tome tubos de ensayo márquelos y proceda como se expone a
continuación:
Blanco de
muestra
----------
Standar
Muestra
REACTIVO DE
1ml
1ml
TRABAJO
REACTIVO 1
1ml
----------MUESTRA
100µl
100µl
100µl
2. Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos
3. Leer la absorbancia de la muestra y del blanco de muestra a 560
nm.
4. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados
proporcionalmente, sin perjuicio para el desempeño de la
prueba, manteniéndose los cálculos inalterados y verificando el
volumen mínimo necesario para la lectura.
El color final es estable por 60 minutos.
CALCULOS
Abs desconocida - Abs desc del blanco
B Total= ----------------------------------------------------------------- x Conc. calibrador
Abs del Calibrador - Abs del blanco Calibrador
CALIBRACION
Use un estándar apropiado o suero calibrador.
MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS


CONTROL INTERNO DE CALIDAD EN EL LABORATORIO
Reloj o cronometro
Elementos para obtención, almacenamiento y procesamiento
de las muestras. Pipetas automáticas.
El laboratorio debe mantener un programa de calidad interno que
establezca claramente los objetivos, procedimientos, normativas,
criterios para límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de
actividades. Por lo cual, el uso de sueros control para evaluar la
imprecisión e inexactitud de las determinaciones debe ser una
práctica rutinaria de laboratorio clínico.
Se sugiere utilizar los sueros control XERITROL 1 Y XERITROL 2 para el
control interno en los ensayos de química clínica. Se recomienda
calibración de dos puntos después del cambio de lote del reactivo y
cuando sea requerido de acuerdo a los procedimientos de control de
calidad del laboratorio.
VOLUMEN PEDIATRICO
Para muestras pediátricas con Bilirrubina arriba de 3.0 mg. diluya 1:1
con solución salina y multiplique el resultado por 2.
LIMITACIONES
Sueros con valores sobre 20 mg/dl deben de ser diluidos 1:1 con
solución salina isotónica, procese de nuevo y el resultado final
multiplíquelo por 2.
PRECAUCIONES





Este reactivo es para diagnóstico "In Vitro" solamente.
Evite ingestión.
Evite contacto.
El reactivo es una solución ácida. Lave con agua.
El reactivo contiene Azida de Sodio como preservativo, éste
puede reaccionar con cobre o plomo de tubería y formar
compuestos explosivos.
INTERFERENCIAS
Recuperación dentro del +10% del valor inicial; valores elevados de
triglicéridos y hemoglobina pueden interferir.
Existe poca correlación entre turbidez y la concentración de los
triglicéridos.
VALORES DE REFERENCIA
Total Adultos o infantes después de un mes de 0.2 mg/dl – 1.0 mg/dl.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos
normales.
RECOMENDACIONES GENERALES






Se debe leer y seguir cuidadosamente las instrucciones del
procedimiento de ensayo con el objeto de realizarlo en forma
correcta.
Todos los materiales usados durante el ensayo deben
considerarse como potencialmente infecciosos, manipúlelos y
deséchelos de acuerdo con las normas de Bioseguridad vigentes
y normas de protección ambiental.
El kit de diagnóstico BILIRRUBINA TOTAL XERION es para uso
diagnóstico IN VITRO y debe ser empleado por profesionales.
La limpieza y el secado adecuado del material usado son
factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y
obtención de resultados correctos.
Durante la manipulación los reactivos están sujetos a
contaminación química y bacteriana que pueden reducir la
estabilidad. Evite la evaporación manteniéndolos recipientes de
los reactivos debidamente tapados.
Los reactivos son tóxicos y corrosivos evitar la ingestión y
contacto con la piel. En caso de contacto con los ojos o piel lavar
con abundante agua y pedir ayuda médica
BIBLIOGRAFIA
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DESEMPEÑO
Linealidad
Especificidad
Sensibilidad
Metodológica
20 mg/dl
La implementación entre este método y otro
similar arrojó un coeficiente de correlación de 0.99
con una ecuación de regresión de y=1.13x - 0.09
El límite inferior de detección fotométrica hallado
fue de 0.01 mg/dl
REF.: Kit X 100 mL
LOTE: N06C071S1
VENCE: 11/2014
REVISIÓN: 10/2013
PRECISIÓN
Corrida a Corrida
MEDIA
DE
CV
mg/dl
mg/dl
%
Control 1
0.67
0.02
2.9
Control 2
6.28
0.15
2.3
MEDIA
DE
CV
mg/dl
mg/dl
%
Control 1
0.68
0.05
7.3
Control 2
6.41
0.63
9.7
Diferentes Días
REF.:
LOTE:
VENCE:
REVISIÓN: