NTE INEN 1529-16: Control microbiológico de los

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NTE INEN 1529-16 (1996) (Spanish): Control
microbiológico de los alimentos. Shigella.
Método de detección
INSTITUTO ECUATORIANO DE NORMALIZACIÓN
Quito - Ecuador
NORMA TÉCNICA ECUATORIANA
CONTROL MICROBIOLÓGICO DE
SHIGELLA. MÉTODO DE DETECCIÓN.
Primera Edición
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First Edition
DESCRIPTORES: Alimentos, control microbiológico, Shigella.
AL 01.05-313
CDU: 614.31:579.67¨87
CIIU: 9320
ICS: 07.100.30
NTE INEN 1 529-16:96
LOS
ALIMENTOS.
CDU: 614.31:579.67¨84
ICS: 07.100.30
Norma Técnica
Ecuatoriana
Obligatoria
CIIU: 9320
AL.01.05-313
CONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS.
SHIGELLA. MÉTODO DE DETECCIÓN.
NTE INEN
1 529-16:96
1996-04
Instituto Ecuatoriano de Normalización, INEN – Casilla 17-01-3999 – Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro – Quito-Ecuador – Prohibida la reproducción
1. OBJETO
1.1 Esta norma describe un método cualitativo para la detección de Shigella en alimentos, que
contempla las fases de preenriquecimiento y enriquecimiento selectivo
2. ALCANCE
2.1 Este método solo es aplicable para detectar la presencia o ausencia de Shigella en alimentos.
3. DEFINICIONES
3.1 Shigella: Género perteneciente a la familia Enterobacteriaceae. Está integrado por
microorganismos de forma bacilar, Gram negativos, inmóviles, que fermentan la glucosa sin
producción de gas. No atacan la salicina ni el adonitol. No atacan el citrato ni producen
acetil-metil-carbinol. No producen H2S ni hidrolizan la urea; no producen fenilalanina desaminasa; no
licuan la gelatina ni descarboxilan la lisina, no fermentan la lactosa (la Shigella sonnei fermenta la
lactosa, pero lentamente).
3.2 Detección de Shigella: Es la determinación de la presencia o ausencia de los microorganismos
pertenecientes a este género por métodos adecuados.
3.3 Preenriquecimiento: Tratamiento reparador de las células lesionadas utilizando medios
mínimos sencillos exentos de agentes químicos selectivos.
3.4 Enriquecimiento selectivo: Tratamiento para estimular la multiplicación de las células bacterianas
deseadas y reducir o inhibir el crecimiento de la flora competitiva, utilizando medios con agentes
químicos selectivos.
4. FUNDAMENTO
4.1 Este método se basa en la utilización del agar XLD que contiene xilosa como agente diferenciador.
En este medio, las colonias de Shigella aparecen rojas debido a la incapacidad de la mayoría de ellas de
fermentar la xilosa. A estas colonias se las somete a pruebas bioquímicas y si presentan reacciones
características, según la tabla A.1, se las confirma serológicamente.
5. DISPOSICIONES GENERALES
5.1 Por ser las shingelas, entre las bacterias enteropatógenas, las más difíciles de aislar de los alimentos, se
debe considerar, si es necesario o no, someter a la muestra a las fases de preenriquecimiento y de
enriquecimiento selectivo.
(Continúa)
DESCRIPTORES: Alimentos, control microbiológico, Shigella.
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NTE INEN 1 529-16
1996-04
6. MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS, EQUIPO Y VIDRIERÍA
6.1 Medios de cultivo y reactivos
6.1.1 Requisitos básicos: Para que haya uniformidad en los resultados, es necesario preparar los
medios de cultivo con reactivos que sean de grado analítico, o, utilizar medios de cultivo completos,
deshidratados, que deben reconstituirse según la instrucción del fabricante.
6.1.2 Composición y preparación de los medios de cultivo y reactivos. Ver NTE INEN 1529-1.
6.1.2.1 Agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD)
6.1.2.2 Agar MacConkey (MAC)
6.1.2.3 Agar desoxicolato citrato (DC) o agar SS
6.1.2.4 Agar Levine (EMB)
6.1.2.5 Agar citrato de Simmon
6.1.2.6 Agar hierro triple azúcar (TSI)
6.1.2.7 Agar soya tríptica (TSA)
6.1.2.8 Agar nutritivo
6.1.2.9 Agar nutritivo semisólido.
6.1.2.10 Caldo selenito cistina
6.1.2.11 Caldo urea (o agar)
6.1.2.12 Caldo de soya tríptica (TSB)
6.1.2.13 Caldo lisina descarboxilasa
6.1.2.14 Caldo triptona (Ljutov)
6.1.2.15 Caldo GN de enriquecimiento, según Hajna
6.1.2.16 Caldo nutritivo
6.1.2.17 Caldo base con púrpura de bromocresol
6.1.2.18 Reactivo de Kovacs
(Continua)
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6.1.2.19 Solución de hidróxido de sodio 1 N
6.1.2.20 Solución de ácido clorhídrico 1 N
6.1.2.21 Solución de fosfato tripotásico al 8% (K3PO4.7H2O)
6.1.2.22 Solución fisiológica
6.1.2.23 Colorantes para Gram
6.1.2.24 Antisueros Shigella poligrupos A, B, C, D y Alkalescens-Dispar.
6.2 Equipo y vidriería
6.2.1 Requisitos básicos: Toda la vidriería y utensilios que se utilicen en los ensayos deben ser de
material inerte y resistente a esterilizaciones repetidas, además, deben estar perfectamente limpios y
estériles.
6.2.1.1 Molino de carne para laboratorio, provisto de placas crivadas, cuyos agujeros no excedan de 4
mm de diámetro.
6.2.1.2 Licuadora de 8 000 a 45 000 rpm, con vasos de metal o vidrio de capacidad adecuada, autoclavables.
6.2.1.3 "Stomacher" para masajear las muestras
6.2.1.4 Equipo para esterilizar material, medios de cultivo y reactivos: autoclave y equipo para
esterilizar por filtración.
6.2.1.5 Estufa de secado con regulador de temperatura
6.2.1.6 Incubadora, con regulador de temperatura, para cultivos a 37°C
6.2.1.7 Microscopio
6.2.1.8 Refrigeradora
6.2.1.9 Balanza de 0,1 g de sensibilidad
6.2.1.10 Mechero Bunsen
6.2.1.11 Gradillas o tuberas
6.2.1.12 A sas y agujas para cultivos
6.2.1.13 Materiales varios: cucharas, cuchillos, pinzas, tenedores, espátulas, tijeras, saca-bocados,
etc.
(Continua)
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6.2.1.14 Tubos de ensayo de 150 mm x 20 mm; 160 mm x 16 mm; 120 mm x 12 mm, 100 mm x
12 mm.
6.2.1.15 Probetas graduadas
3
6.2.1.16 Pipetas bacteriológicas de punta ancha graduadas en 1/10 de cm .
6.2.1.17 Placas Petri de vidrio de 100 mm x 15mm
6.2.1.18 Erlenmeyer
6.2.1.19 Frascos para muestreo con tapas de rosca, autoclavables
6.2.1.20 Pipetas Pasteur
7. PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS
7.1 La unidad analítica debe provenir de una unidad de muestra de por lo menos 100 g, según la NTE INEN 15292 y debe ser preparada según la referida norma.
7.2 Las unidades de muestras perecederas que llegan al laboratorio deben mantenerse en
refrigeración (0 a 5°C), por no más de 24 h. En gen eral, las muestras deben ser mantenidas en las
condiciones adecuadas al producto hasta el momento del ensayo.
8. PROCEDIMIENTO
8.1 Las muestras que han sufrido tratamientos de conservación y que las células de Shigella están
debilitadas, someterlas a preenriquecimiento procediendo a partir de 8.4.1
8.2 Las muestras que no han sufrido tratamientos de conservación y que contienen pequeño número
de células no debilitadas de Shigella, someterlas a enriquecimiento selectivo procediendo a partir de
8.5.1
8.3 En muestras que no han sufrido tratamientos físicos o químicos de conservación y que contienen
un número apreciable de células no debilitadas de Shigella, proceder a partir de 8.6.1 sin someterlas a
preenriquecimiento ni a enriquecimiento selectivo.
8.4 Preenriquecimiento
8.4.1 Muestras con tratamiento de conservación. En un frasco de boca ancha con tapa de
rosca, asépticamente, pesar en pequeños pedazos 25 ± 0,1 g de muestra, obtenidos de las distintas zonas de
3
3
la unidad de muestra y añadir 225 cm de caldo TSB. Si la muestra es líquida, transferir 25 cm .
8.4.2 En una licuadora, homogeneizar entre 15 000 y 20 000 rpm por no más de 2 minutos, comenzar
con pocas revoluciones. Omitir la trituración si la muestra es líquida, pulverulenta, molida o triturada,
éstas deben ser agitadas para suspender la muestra. Si la muestra es menor de 25 g, hacer
proporcionalmente la dilución y tener en cuenta en el resultado.
(Continua)
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8.4.3 Ajustar el pH del homogeneizado a 6,8 ± 0,2 con una solución estéril de hidróxido de sodio 1 N ó de ácido
clorhídrico 1 N o de fosfato tripotásico al 8% (K3PO4. 7H2O).
8.4.4 Tapar el frasco, agitando de vez en cuando, dejar a temperatura ambiente durante 2 h.
8.4.5 Continuar con el numeral 8.5.4.
8.5 Enriquecimiento selectivo
8.5.1 Muestras sin tratamiento de conservación que contienen pequeño número de células no
debilitadas. En cada uno de dos frascos, de boca ancha y con tapa de rosca, de las distintas zonas de la
unidad de muestra, pesar asépticamente 25 ± 0,1 g, en pequeños pedazos.
3
3
8.5.2 Añadir 225 cm de caldo GN a uno de los frascos, y 225 cm de caldo selenito cistina al otro.
Homogeneizar según lo indicado en 8.4.2
8.5.3 Ajustar el pH a 6,8 ± 0,2 procediendo según 8.4.3, tapar los frascos y continuar con el numeral
8.5.5.
8.5.4 Muestras provenientes del cultivo de preenriquecimiento. Al término de las 2 h de incubación
3
3
(8.4.4), transferir 10 cm a un matraz que contenga 100 cm de caldo GN, y otros 10 a otro con 100
3
cm de caldo selenito-cistina. Tapar los frascos y mezclar delicadamente.
8.5.5 Aflojar las tapas 1/4 de vuelta e incubarlos entre 35 y 37°C, por 16 ± 2 horas y continuar con el
numeral 8.6.2
8.6 Siembra en placas de agares selectivos-diferenciales
8.6.1 Muestras sin tratamiento de conservación que contienen considerable número de células no
debilitadas. Tratar a estas muestras según lo indicado en 8.4.1 a 8.4.3, y de esta solución, pipetear 0,5
3
cm en la superficie seca de cada una de dos placas individuales de los agares XLD, MAC y SS. Con
una varilla en L, diseminar uniformemente el inóculo sobre la superficie del agar hasta que sea absorbido
por el medio.
8.6.2 Muestras provenientes del cultivo de enriquecimiento selectivo. De cada uno de los cultivos de
enriquecimiento selectivo (8.5.5), con un asa, sembrar en estría en la superficie seca de placas de agar
XLD, MAC y SS, de modo que se obtengan colonias bien aisladas (primer subcultivo).
8.6.3 Invertir las placas e incubar entre 35 y 37°C dura nte 24 h, y a los frascos de los cultivos en GN y
selenito-cistina incubados otras 24 horas.
8.6.4 Examinar las placas de acuerdo a 8.6.6. Si el crecimiento es pobre y no aparecen colonias
sospechosas de Shigella, incubar otras 24 h y luego examinarlas.
8.6.5 Concluidas las 24 h adicionales de incubación de los cultivos de enriquecimiento selectivo (8.6.3),
realizar un segundo subcultivo según 8.6.2 a 8.6.3.
8.6.6 Aspecto de las colonias de Shigella en los medios de agar selectivos
(Continua)
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8.6.6.1 Agar XLD. Las colonias típicas de Shigella son del mismo color que el medio de cultivo,
transparentes, generalmente de 1 mm de diámetro. Las colonias con centro negro no son del género
Shigella y pueden pertenecer a los géneros Proteus, Salmonella o Citrobacter.
8.6.6.2 Agar SS, agar MAC. Las colonias típicas de Shigella son incoloras y transparentes.
8.7 Selección y purificación de colonias
8.7.1 De cada una de las placas positivas, identificadas según 8.6.6, seleccionar cinco colonias típicas
y/o sospechosas, bien aisladas y confirmarlas por separado, según el numeral 8.8. Si hay menos de
cinco, confirmar todas.
8.7.2 Si en alguna placa no hay colonias bien aisladas, con un asa de cultivo, sin rozar en el agar,
tocar solo el centro de la colonia seleccionada y después de inoculada e incubada en caldo TSB (35°C d e 6 a
12 h) sembrar en estría la superficie seca de placas individuales de agar EMB o agar MAC, de modo
que se obtengan colonias bien aisladas.
°
8.7.3 Invertir las placas e incubadas durante 20 a 24 h entre 35 y 37 C.
8.7.4 Elegir las colonias incoloras (lactosa negativas), sembrar en tubos de agar nutritivo inclinado
e incubarlas entre 35 y 37°C durante 20 a 24 h.
8.7.5 Hacer extensiones a partir de los cultivos en agar nutritivo inclinado, teñirlos por el método de
Gram y verificar la presencia de solo bacilos Gram negativos, no capsulados ni esporulados. Si se
comprueba la pureza de los cultivos, utilizarlos para la confirmación bioquímica.
8.8 Confirmación bioquímica. Los ensayos confirmatorios (ver tabla A.1) deben realizarse a partir de
colonias previamente seleccionadas y purificadas y deben preceder a las pruebas serológicas.
8.8.1 Prueba exploratoria en agar TSI. A cada una de las colonias seleccionadas en 8.7.1 ó a cada
uno de los cultivos obtenidos en 8.7.5, con una aguja inoculados en tubos individuales de agar TSI,
sembrando por picadura en la columna del agar y el sesgo mediante estría. Para tomar las colonias
de las placas tener el cuidado indicado en el numeral 8.7.2.
8.8.1.1 Incubar los tubos entre 35 y 37°C por 24 2 horas.
8.8.1.2 Retener los cultivos en agar TSI que presenten las siguientes reacciones típicas del género
Shigella: superficie inclinada roja (reacción alcalina), columna amarilla (reacción ácida), sin
ennegrecimiento (sin producción de H2S), sin burbujas o grietas en el agar (sin producción de gas,
excepto ciertos biotipos de Shigella flexneri 6).
8.8.1.3 Si en algún tubo de agar TSI el cultivo es mixto, purificado siguiendo lo indicado en el numeral
8.7.2 a 8.7.5.
8.8.2 Pruebas complementarias. Con cada uno de los cultivos puros en agar TSI que presentan
reacciones típicas de Shigella, realizar las siguientes pruebas:
(Continua)
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8.8.2.1 Prueba de la ureasa: Sembrar en caldo urea, o en estría en agar urea, inclinado. Incubar 24 ±
2 h entre 35 y 37°C. Descartar los cultivos en los que el color del medio ha cambiado a rosa más intenso o cereza
intenso (reacción positiva). Las shigelas dan una reacción negativa (color inalterado).
8.8.2.2 Prueba de movilidad: Inocular por picadura tubos de agar nutritivo semisólido hasta una
profundidad de aproximadamente 5 mm. Incubar entre 35 y 37°C por 24 a 48 h. Si el crecimiento es
solo a lo largo de la picadura sin extenderse fuera de ella, la movilidad es negativa. Las shigelas son
inmóviles.
8.8.2.3 Prueba de la lisina-descarboxilasa: Inocular en el fondo de la superficie líquida del caldo lisinadescarboxilasa, cubrir con una capa de vaselina líquida estéril de aproximadamente 1 cm de altura.
Incubar entre 35 y 37°C y examinar diariamente dura nte 4 días. Las shigelas no descarboxilan la lisina y
el color del medio permanece amarillo.
8.8.2.4 Prueba de la utilización del citrato: Sembrar en estría en la superficie inclinada de agar citrato de
Simmon. Incubar 4 días entre 35 y 37°C. La reacción es positiva cuando el color verde del medio
cambia a azul. Las shigelas dan reacción negativa.
8.8.2.5 Prueba del indol: Sembrar el cultivo en análisis en un tubo con agua triptona. Incubar 48 h
3
entre 35 y 37°C. Adicionar al tubo de 0,2 a 0,3 cm del reactivo de Kovacs. La formación de un color
púrpura en la capa del reactivo indica una reacción positiva. Amarillo, una reacción negativa. Las
shigelas pueden dar una reacción positiva o negativa.
8.8.2.6 Prueba del malonato: En un tubo con caldo malonato inocular el cultivo en análisis. Incubar 48
± 2h entre 35 y 37°C. El cambio del color verde del medio a azul oscuro indica una reacción positiva.
Las shigelas dan reacción negativa.
8.8.2.7 Prueba de la salicina: Inocular el cultivo en análisis en caldo púrpura de bromocresol con
salicina. Incubar de 4 a 5 días entre 35 y 37°C, ex aminar diariamente la producción de ácido (color
amarillo) y la producción de gas (en el tubo Durhan invertido colocado en el tubo). Las shigelas
no producen ácido ni gas, permaneciendo inalterado el color del medio.
8.8.2.8 Prueba de la fenilalanina desaminasa: Sembrar en estría en la superficie inclinada de agar
fenilalanina. Incubar 24 horas a 37°C. Después de e ste período añadir unas gotas de solución de
cloruro férrico 0,5 M. La reacción es positiva cuando aparece un color verde azulado oscuro. Las
shigelas dan una reacción negativa.
8.8.2.9 Si es necesario, se puede realizar otras pruebas bioquímicas adicionales, tales como: la
descarboxilación de la arginina y ornitina; fermentación del inositol, adonitol, maltosa, arabinosa,
manitol; etc.
8.9 Confirmación serológica (Aglutinación en porta-objetos)
8.9.1 Debe realizarse después de las pruebas bioquímicas utilizando cultivos de 18 a 24 h en agar
nutritivo inclinado, que sean puros y no autoaglutinables, procedentes del crecimiento en TSI.
8.9.1.1 Comprobarla eficacia de los antisueros, ensayándolos con cultivos testigos conocidos.
(Continua)
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8.9.1.2 Preparar una suspensión densa del microorganismo en análisis, suspendiendo el crecimiento en el
3
agar inclinado de 18 a 24 h (8.7.1) en aproximadamente 1 cm de solución fisiológica; tener cuidado
para asegurar una suspensión uniforme.
8.9.1.3 Con un lápiz graso, marcar secciones de alrededor 2,5 cm de lado, en una lámina de vidrio ó
en la cara interna de una placa Petri de vidrio.
3
8.9.1.4 Poner una gota (0,05 cm ) de la suspensión bacteriana (8.7.1.2) en cada una de las
secciones marcadas, adyacentes.
8.9.1.5 Colocar una gota de solución salina sobre una de las gotas de la suspensión bacteriana y con
un asa estéril, mezclar bien. Es el control negativo de la suspensión bacteriana y no debe
autoaglutinarse. Ver el numeral 8.9.3.2
8.9.1.6 Colocar una gota del antisuero Shigella poligrupo D sobre la otra gota de la suspensión
bacteriana y mezclar bien.
8.9.1.7 Balancear el porta o la placa Petri por 1 a 2 minutos para conseguir que los microorganismos
se aproximen unos a otros. Evitar una evaporación excesiva.
8.9.1.8 Observar la reacción contra un fondo negro, de preferencia, con ayuda de una lupa.
8.9.1.9 La aglutinación positiva será rápida y completa. Una reacción positiva presenta los grumos
suspendidos en una fase líquida totalmente clara.
8.9.1.10 Si no hay aglutinación con el antisuero Shigella poligrupo D, ensayar con los poligrupos A,
A1, B, C, C1, C2 y poliantisuero Alkalescens-Dispar.
8.9.1.11 La aglutinación con alguno de los poliantisueros es una evidencia presuntiva de la presencia de
Shigella, sin embargo, las pruebas serológicas no pueden usarse solas, sino que deben ser
precedidas por las bioquímicas.
8.9.1.12 Los cultivos que después de las pruebas bioquímicas parecen ser Shigella, pero que no se
aglutinan o se aglutinan lentamente, deben ser tratados térmicamente, calentando la suspensión en
un baño de agua hirviente, durante 15 a 60 minutos. Enfriar la suspensión, ensayarla nuevamente con los
antisueros y ver si se aglutina.
8.9.1.13 Para identificar el tipo específico, realizar las pruebas bioquímicas y serológicas de tipos
específicos dentro del grupo.
8.9.2 Clasificación de la reacción
8.9.2.1 Autoaglutinable. Cuando los microorganismos se aglutinan espontáneamente en ausencia del
antisuero. La mezcla suspensión bacteriana - solución fisiológica debe permanecer inalterada, pues,
es el control negativo de la suspensión bacteriana.
8.9.2.2 Positiva. Cuando los microorganismos en presencia de un antisuero se aglutinan rápida y
completamente, entonces, se forman grumos en la mezcla suspensión bacteriana - antisuero. Una
(Continua)
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reacción positiva con un antisuero Shigella poligrupo identifica el microorganismo como miembro del
poligrupo.
8.9.2.3 Negativa. Cuando en presencia de un antisuero los microorganismos no se aglutinan,
permaneciendo inalterada la mezcla suspensión bacteriana - antisuero. Una reacción parcial o
retardada debe ser considerada como negativa.
8.9.3 Interpretación de los resultados
8.9.3.1 Son consideradas Shigella aquellas cepas que presentan reacciones bioquímicas típicas (tabla A.1)
y dan reacciones serológicas positivas.
8.9.3.2 Pueden ser Shigella aquellas cepas que presentan reacciones bioquímicas típicas según la
tabla A.1, pero que no dan reacciones serológicas positivas (8.9.1.12); cepas que no presentan
reacciones bioquímicas típicas según la tabla A.1, pero dan reacciones serológicas positivas y las
cepas autoaglutinables que dan reacciones bioquímicas típicas. La identificación final de
estas cepas se realiza en centros especializados.
8.9.3.3 No son consideradas como Shigella las cepas que no presentan reacciones bioquímicas
típicas y reacciones serológicas positivas.
9. EXPRESIÓN E INFORME DE RESULTADOS
9.1 Si de los medios de enriquecimiento selectivo, no se desarrolla colonia alguna de Shigella en las
placas de los medios sólidos selectivos secundarios, reportar: "no se aisló Shigella en 25 g (u otra
cantidad) de producto examinado; el medio sólido selectivo secundario fue agar XLD, MAC, SS".
9.2 Si de uno o de los dos medios líquidos selectivos, hubo desarrollo de Shiguella en las placas de
los medios sólidos selectivos secundarios, reportar: "se aisló Shigella en 25 g (u otra cantidad) de
producto examinado; el medio líquido selectivo fue (caldo GN y/o caldo selenito cistina), el medio
sólido selectivo secundario fue (agar XLD, SS, MAC); las pruebas bioquímicas realizadas fueron...; los
antisueros con que aglutina y la marca fueron..."
9.3 Indicar la norma de referencia.
9.4 Si en la identificación final intervino algún centro especializado, indicar el nombre exacto del centro.
9.5 Indicar cualquier condición no especificada en esta norma o considerada como opcional. El informe
debe incluir todos los detalles necesarios para la completa identificación de la muestra.
(Continua)
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ANEXO A
TABLA A.1. Reacciones bioquímicas y serológicas de los miembros del género Shigella
Prueba o
substracto
Reacción
medio de
serotipos que
tienen esta
reacción
100
97,9
Lactosa-ácido
Sacarosa-ácido
H2S
Columna amarilla
Sin burbujas ni
a
grietab
s
Sesgo rojo
Sesgo rojo
Sin ennegrecimiento
-
Ureasa
color inalterado
100
-
Descarboxilación
de la L-lisina
color amarillo
100
-
Utilización de
Citrato
sin crecimiento y
color inalterado
100
-
Indol
anillo púrpura/
c
anillo amarillo
-
FenilalaninaDesaminasa
color inalterado
100
-
Movilidad
crecimiento a lo
largo de la picadura
100
-
Salicina
color inalterado
100
-
Malonato
color inalterado
100
-
Suero polivalente
aglutina
100
a:
b:
c:
Dos biotipos de S.flexnery 6 pueden producir una pequeña cantidad de gas.
La S.sonnei y algunas cepas fermentan la lactosa lentamente (11,4% en 3 días o más).
Las cepas pertenecientes al grupo D son siempre negativas, pero las de los grupos A, B y C pueden ser
positivas.
-
TSI:
Glucosa-ácido
Glucosa-gas
99,7
99,1
100
37,8/
62,2
(Continua)
-10-
1995-067
NTE INEN 1 529-16
1996-04
APÉNDICE Z
Z.1 DOCUMENTOS NORMATIVOS A CONSULTAR
Norma Técnica Ecuatoriana INEN 1529-1
Control microbiológico de los alimentos. Preparación de
medios de cultivo.
Norma Técnica Ecuatoriana INEN 1529-2
Control microbiológico de los alimentos. Toma y preparación de muestras.
Z.2 BASES DE ESTUDIO
International standard ISO 6579:1993 "Microbiology General guidance on methods for the detection of
SALMONELLA". Third edition. International Organization for Standardization. Geneva, 1993.
Food and Drug Administration Bureau of Food Division of Microbiology. "Bacteriological Analytical
Manual" 5th. Ed. Association of Official Analytical Chemists, Washington, DC 20044, 1978.
ICMSF "Microorganismos de los Alimentos 1- Técnicas del Análisis Microbiológico". Zaragoza España: Acriba.
Mossel D.A.A., Moreno García, B. "Microbiología de los Alimentos". 1 a. edición española. Zaragoza España: Acriba. 1982.


-11-
1995-067

INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA
Documento:
TITULO: CONTROL MICROBIOLOGICO DE LOS
Código:
ALIMENTOS. SHIGELLA. METODO DE DETECCION.
AL 01.05-313
ORIGINAL:
REVISIÓN:
Fecha de iniciación del estudio: 1993-02-15
Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo
Oficialización con el Carácter de
por Acuerdo No.
de
publicado en el Registro Oficial No.
de
NTE INEN 1529-16
Fecha de iniciación del estudio:
Fechas de consulta pública: de
a
Subcomité Técnico: Control microbiologico de los alimentos
Fecha de iniciación: 1995-04-27
Integrantes del Subcomité Técnico:
Fecha de aprobación: 1995-06-20
NOMBRES:
INSTITUCIÓN REPRESENTADA:
Dr. Ramiro Gallegos (Presidente)
Bioq. Elena Larrea
Bioq. Miriam Romo
SUBDIRECTOR TECNICO
DIRECCION DE VERIFICACION ANALITICA
DIRECCION DE CONTROL Y CERTIFICACION
DE CALIDAD
DIRECCION DE PROTECCION AL
CONSUMIDOR
DIRECCION DE ASEGURAMIENTO
METROLOGICO
Ing. Bolívar Cano
Sr. Patricio Mena
Otros trámites: Remplaza a NTE INE 764
El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de 1996-02-27
Oficializada como: OBLIGATORIA
Registro Oficial No. 928 de 1996-04-18
Por Acuerdo Ministerial No. 0106 de 1996-04-09
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