NTE INEN 0759: Carne y productos cárnicos

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m.
NTE INEN 0759 (1985) (Spanish): Carne y
productos cárnicos. Determinación del zinc
1. OBJETO
1.1 Esta norma establece el método para determinar el contenido de zinc en carne y productos cárnicos.
2. TERMINOLOGIA
2.1 Contenido de zinc. Es la cantidad de zinc existente en la muestra, determinada bajo las condiciones
descritas en la presente norma.
3. FUNDAMENTO
3.1 La muestra es sometida a oxidación húmeda, eliminación del plomo, cobre, cadmio, bismuto, antimonio,
estaño, mercurio y plata, como sulfuros; usando cobre como agente de arrastre o secuestrarte; eliminación
simultánea del cobalto y níquel por extracción con cloroformo, como complejos metálicos de nitroso-B
naftol y dimetilglioxina, respectivamente; extracción de ditizonato de zinc con tetracloruro de carbono,
transferencia deI zinc a ácido clorhídrico diluido y extracción final de ditizonato de zinc para medición del
color.
4. INSTRUMENTAL
4.1 Picadora mecánica de carne (molino). Tipo de laboratorio, provisto de una placa cribada, con orificios
de diámetro no mayor a 4 mm, u otro equivalente que produzca una masa homogénica.
4.2 Balanza analítica, sensible al 0,1 mg.
4.3 Matraz Erlenmeyer, de 250 cm 3
4.4 Vasos de precipitación, de 250 cm 3
4.5 Ampolla de decantación, de 125 cm
3
4.6 Aparato generador, de H2S
4.7 Pontenciómetro
4.8 Pipetas volumétricas, de 0,1 cm3, 0,5 cm3, 1 cm3, 2 cm 3, 3 cm3, 4 cm3, 5 cm3, 10 cm 3, 20 cm3 y 25 cm3.
(Continúa)
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4.9 Embudo de vidrio Pyrex
4.10 Tubos de ensayo, de aproximadamente 20 mm de diámetro por 150 mm de longitud.
4.11 Dispositivo de succión
4.12 Espectrofotómetro, con Una longitud de onda de 540 mm, aproximadamente.
4.13 Instrumental de laboratorio. El material de vidrio que se utilice debe ser de uso exclusivo,
limpiado cuidadosamente con ácido nítrico caliente.
5. REACTIVOS
5.1 Solución de sulfato de cobre. Disolver 8 g de sulfato de cobre pentahidratado (Cu SO 4. 5 H2O),
3
en agua, y diluir a 1 000 cm . Esta solución contiene 2 mg de cobre por centímetro cúbico.
5.2 Solución de citrato de amonio. Disolver 225 g de citrato de amonio (NH 4)2 HC6 H5O 7), en
agua; alcalinizar a rojo fenol con hidróxido de amonió (pH 7,4 primer cambio definido de color),
agregar 75 cm 3 en exceso y diluir a 2 000 cm 3. Purificar esta solución inmediatamente antes de usarla:
añadiendo un pequeño exceso de ditizona, y extrayendo con tetracloruro de carbono hasta que la capa de
solvente sea de color verde claro brillante. Remover el exceso de ditizona por extracción repetida con
cloroformo y, finalmente, una vez, con tetracloruro de carbono.
5.2.1 Es necesario que el exceso de ditizona sea completamente removido, de otra manera, el zinc se perderá durante la eliminación de cobalto y níquel.
5.3 Solución dimetil glioxima. Disolver 2 g de dimetilglioxima (C4 H8 N2O 2) en 10 cm 3 de hidróxido
3
3
de amonio y entre 200 a 300 cm de agua, filtrar y diluir a 1 000 cm .
5.4 Solución de α nitroso-B naftol. Disolver 0,25g de α nitroso-B naftol (C10H 7 NO 2) en cloroformo y
diluir a 500 cm 3.
5.5 Cloroformo, redestilado (CH CI 3).
5.6 Solución de difenil tiocarbazone. (ditizona). Disolver 0,05 de dithizona (C13 H12 N4S) en 2 cm3 de
3
hidróxido de amonio y 100 cm de agua; extraer repetidamente con tetracloruro de carbono hasta que
la capa de solvente sea de color verde claro brillante. Descartar la capa de solvente y filtrar la capa acuosa
a través de papel, calidad analítica y lavar. (Debido a la baja estabilidad, esta solución, aun cuando se
guarde en frasco oscuro y bajo refrigeración, debe ser preparada sólo cuando se vaya a usar).
5.7 Tetracloruro de carbono, redestilado. (C Cl 4).
(Continúa)
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5.8 Solución 0, 04 N de ácido clorhídrico. Se prepara diluyente con agua la cantidad requerida de HCI.
(Se puede usar ácido clorhídrico redestilado, aunque generalmente es innecesario).
5.9 Acido nítrico concentrado, (d = 1,40)
5.10 Acido sulfúrico concentrado, (d = 1,84)
5.11 Acido perclórico concentrado, (d = 1,5 a 1,6)
5.12 Acido clorhídrico concentrado, (d = 1,19)
5.13 Solución (1 + 6) de ácido clorhídrico.
5.14 Solución (1 + 1) de ácido clorhídrico.
5.15 Hidróxido de amonio
3
5.16 Indicador rojo de metilo. Disolver 0,25 g de rojo de metilo (C15 H15 O 2 N3) en 100 cm de alcohol
de 95% v/v.
5.17 Indicador rojo de fenol. En un mortero ágata triturar 0,1 g de rojo fenol (C19 H14 O 5) con 15 cm 3 de
solución 0,02 N de Na OH hasta que se disuelva, luego diluir esta solución a 200 cm 3 con agua
destilada recientemente hervida.
5.18 Solución de agua de Bromo, saturada
5.19 Solución patrón de zinc. Disolver 0,500 g de zinc puro granulado con leve exceso de solución 0,04
3
3
N de ácido clorhídrico y diluir a 1 000 cm . Esta solución contiene 500 µg de zinc por cm .
5.19.1 Solución de trabajo. Con pipeta tomar 10 cm 3 de la solución 5.19 y diluir a 1 000 cm3, con solu3
ción 0,04 N de ácido clorhídrico. Esta solución contiene 5 µg de zinc por cm .
5.20 Si se observa una contaminación apreciable deI ácido nítrico y deI hidróxido de amonio, se deberá purificarlos por destilación aparato de vidrio pyrex. Si se sospecha que existe contaminación deI ácido sulfúrico con zinc, deberá realizarse el análisis correspondiente.
5.21 Papel filtro de poro fino calidad analítica
(Continúa)
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6. PREPARACION DE LA MUESTRA
6.1 La preparación de la muestra se realizará de acuerdo al Anexo A, de la Norma INEN 776.
7. PROCEDIMIENTO
7.1 La determinación debe efectuarse por duplicado sobre la misma muestra preparada.
7.1.1 Pesar 25 g de muestra preparada, con aproximación al 0,1 mg en un Erlenmeyer, estimando que
contenga entre 25 y 100 µg de zinc. (Si la muestra es líquida, se deberá evaporar de manera de obtener en
volumen pequeño).
7.1.2 Agregar ácido nítrico y calentar cuidadosamente hasta que se presente la primera reacción vigorosa;
3
cuando se haya aquietado, adicionar 2 a 5 cm de ácido sulfúrico y continuar el calentamiento, adicionar
pequeñas porciones de ácido nítrico en cantidad necesaria, para prevenir la carbonización de la
muestra, hasta que se liberen gases de anhídrido sulfúrico y la solución permanezca clara y casi incolora.
3
7.1.3 Agregar 0,5 cm de ácido perclórico y continuar calentando hasta que éste sea removido completamente. Enfriar la solución y diluir con agua a un volumen aproximado de 40 cm 3. (La digestión
húmeda y la subsecuente separación de sulfuro (ver 7.2) puede realizarse en forma ventajosa en un
matraz kjeldahl pequeño).
7.2 Separación deI grupo de los sulfuros
7.2.1 A la solución sulfúrica, resultante de la digestión, agregar 2 gotas de rojo de metilo y 1 cm 3 de la
solución de sulfato de cobre; neutralizar con hidróxido de sodio, luego agregar ácido clorhídrico en
cantidad suficiente para dejar la solución aproximadamente 0,15 N respecto a este ácido, lo cual se logra
satisfactoriamente agregando en exceso más o menos 0,5 cm3 de HCI concentrado, por cada 50 cm 3 de la
solución; el pH de la solución, al medirlo con electrodo de vidrio, debe ser 1.9 a 2.1.
7.2.2 Pasar una corriente de ácido sulfhídrico por la solución hasta que la precipitación sea completa. Filtrar a través de un papel fino (previamente ajustado a un embudo y lavarlo con solución (1 + 6) de ácido
clorhídrico, y luego con agua redestilada); se recibe el filtrado en un vaso de precipitados de 250 cm 3 y
lavar el Erlenmeyer y el filtro con 3 ó 4 porciones de agua.
7.2.3 Hervir el filtrado el tiempo suficiente para que el ácido sulfhídrico no pueda ser detectado por su
olor, luego se agregan 5 cm 3 de solución de agua de bromo saturada y se continua la ebullición hasta que
se libere todo el Bromo.
7.2.4 Dejar enfriar la muestra, neutralizar al rojo de fenol con hidróxido de amonio y llevar a un medio
3
ligeramente ácido con ácido clorhídrico, lo cual se logra agregando un exceso de 0,2 cm de solución (1 +
1) de ácido clorhídrico.
(Continúa)
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7.2.5 Diluir la solución resultante a un volumen definido. (Para obtener una condición óptima al leer las
3
muestras, la solución deberá contener 0,2 a 1,0 µg de zinc por cm ).
7.3 Eliminación de níquel y cobalto
7.3.1 Transferir 20 cm 3 de la solución preparada en 7.2.5 a una ampolla de decantación de 125 cm 3, agregar 5 cm3 de la solución de citrato de amonio, 2 cm 3 de la solución de dimetilglioxima y 10 cm 3 d e la
solución α- nitroso-B naftol, y agitar durante 2 min.
7.3.2 Descartar la capa de solvente y extraer el remanente acuoso con 10 cm 3 de cloroformo para
remover el á nitroso-B naftol residual. Descartar también esta otra capa de solvente.
7.4 Aislamiento y determinación deI zinc
7.4.1 A la fase acuosa que queda después de remover el níquel y cobalto, la que en esta fase tiene pH de
3
3
8,0 a 8,2, agregar 2 cm de la solución de ditizona, 10 cm de tetracloruro de carbono y agitar durante
2 minutos. Dejar en reposo hasta la separación de las dos fases.
7.4.2 Remover completamente la capa acuosa, como sea posible, usando una pipeta conectada a una tube3
ría de vacío, lavar las paredes de la ampolla, escurriendo aproximadamente 25 cm de agua y, sin volver a
agitar, retirar nuevamente la capa acuosa.
7.4.3 Agregar a la ampolla de decantación 25 cm 3 de solución 0,04 N de ácido clorhídrico y agitar
durante un minuto para transferir el zinc a la capa acuosa ácida. Drenar con mucho cuidado la capa inferior de
solvente y remover también con cuidado las gotas de solvente que usualmente flotan sobre la superficie;
descartar el solvente.
7.4.4 Agregar a la solución ácida 5 cm 3 de solución de cítrato de amonio y 10 cm 3 de tetracloruro de
carbono (la solución en esta fase tiene pH 8,8 a 9,0).
7.4.5 Determinar el volumen de solución de ditizona que se debe agregar, de la siguiente manera:
7.4.5.1 A una ampolla de decantación, transferir cuatro cm 3 de la solución de trabajo (ver 5.1.9.1), en el
3
cual va 20 µg de zinc; diluir a volumen total de 25 cm con solución 0,04 N de ácido clorhídrico y
agregar 5 cm3 de citrato de amonio y 10 cm 3 de tetracloruro de carbono.
7.4.5.2 Agregar, en forma creciente, volúmenes de 0,1 cm 3 desolación de ditizona, agitando brevemente
después de cada adición, hasta obtener un color amarilla débil en la fase oscura, lo que indica un exceso de
reactivo. Luego, se multiplica por 1,5 el volumen total de solución de ditizona empleada, para encontrar
el volumen de este reactivo que debe adicionarse a la muestra.
7.4.6 A todas las muestras, agregar el volumen calculado de solución de ditizona, con una
aproximación de 0,05 cm 3, y agitar durante 2 minutos.
(Continúa)
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7.4.7 Con pipeta, transferir exactamente 5 cm de la capa de solvente hacia un tubo de ensayo limpio y
seco, diluir con 10 cm 3 de tetracloruro de carbono, mezclar y determinar, en la solución resultante, la
transmitancia (o absorbancia) a una longitud de onda de 540 nm.
7.5 Preparación de la curva patrón
7.5.1 Preparar una serie de ampollas de decantación, conteniendo 0,5,10, 15 y 20 µg de zinc, tomando 0,1,
2, 3, y 4 cm 3 de la solución patrón de trabajo, respectivamente; agregar solución 0,04 N de ácido clorhídrico
3
hasta completar un volumen total de 25 cm en cada una.
7.5.2 Agregar 5 cm3 de solución de citrato de amonio y 10 cm 3 de tetracloruro de carbono, dándonos una
solución con pH entre 8,1 y 9,1 y continuar como se anota en 7.4.6 y 7.4.7.
7.5.3 Sobre un papel gráfico corriente construir la curva patrón de absorbancia contra microgramos de zinc Si
las lecturas obtenidas corresponden a porcentajes de transmitancia, se usa papel semilogarítmico
empleando la escala logarítmica para la transmitancia.
7.5.3.1 El trazo de la curva debe hacerse muy cuidadosamente, ya que algunos puntos sufren una mayor o
menor desviación.
7.5.3.2 La intersección de la curva con la coordenada vertical puede variar ligeramente de un día a otro, dependiendo de la concentración actual de la solución de ditizona usada en la extracción final, pero la
pendiente deberá ser esencialmente la misma.
8 . CALCULO S
8.1 El contenido de zinc en carne y productos cárnicos se expresa en miligramos de zinc por kilogramo de
muestra y se calcula de la manera siguiente:
8.1.1 Con la absorbancia leída para la muestra (ver 7.4.7), y la curva patrón, se encuentra el contenido de
zinc, en µg de Zn, y luego se aplica la ecuación siguiente:
(Continúa)
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9. ERRORES DE METODO
9.1 La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas por duplicado no debe ser mayor
0
deI 10 /o deI valor medio; en caso contrario, debe repetirse la determinación.
10. INFORME DE RESULTADOS
10.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmética de las dos determinaciones, siempre que los
requisitos de repetibilidad se hayan cumplido.
10.2 En el informe de resultados, debe indicarse el método usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse,
además, cualquier condición no especificada en esta norma, o considerada como opcional, así como cualquier
circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado.
10.3 Debe incluirse todos los detalles para la completa identificación de la muestra.
(Continúa)
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APENDICE Z
Z.1 NORMAS A CONSULTAR
INEN 776. Carne y productos cárnicos. Muestreo.
Z.2 BASES DE ESTUDIO
Norma Centroamericana. ICAITI 34 125 h 18. Carne y productos cárnicos. Determinación del contenido
de zinc. Instituto Centroamericano de Investigación y Tecnología Industrial. Guatemala, 1979.
AOAC. Official methods of analysis of the Association of Official Analytical chemist. Metals and other
elements as residues in foods. Zinc official first action calorimetric method. 25.136. AOAC. Washington,
DC 20044, 1975.
Norma Sanitaria de Alimentos. OFSANPAN-IALUTZ. A015. Norma Técnica de métodos físicos y químicos
para determinación de metales. Zinc. OPS/OMS. Oficina Sanitaria Panamericana Washington, 1968.
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INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA
Documento:
NTE INEN 759
TITULO: CARNE Y PRODUCTOS CARNICOS.
DETERMINACION DEL ZINC
ORIGINAL:
Fecha de iniciación del estudio:
Código:
A L 0302-329
REVISIÓN:
Fecha de aprobación anterior por Consejo Directivo
Oficialización con el Carácter de
por Acuerdo No.
de
publicado en el Registro Oficial No.
de
Fecha de iniciación del estudio:
Fechas de consulta pública: de
a
La Dirección General, atendiendo a la necesidad de contar con normas que regulen la calidad de la carne y
productos cárnicos dispuso la elaboración de esta norma.
Por tratarse de la homologación de una norma internacional de métodos de ensayo, el proyecto no fue sometido a
consulta pública ni discutido por el Subcomité Técnico.
Subcomité Técnico:
Fecha de iniciación:
Integrantes del Subcomité Técnico:
NOMBRES:
Fecha de aprobación:
INSTITUCIÓN REPRESENTADA:
Otros trámites:
El Consejo Directivo del INEN aprobó este proyecto de norma en sesión de 1985-04-19
Oficializada como: OPCIONAL
Registro Oficial No. 267 de 1985-09-09
Por Acuerdo Ministerial No. 576 de 1985-07-31
Instituto E cuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre
C asilla 17-01-3999 - Telfs: (593 2)2 501885 al 2 501891 - Fax: (593 2) 2 567815
Dirección G eneral: E-Mail:furresta @ inen.gov.ec
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Área Técnica de Verificación: E-Mail:verificacion@ inen.gov.ec
Área Técnica de Servicios Tecnológicos: E-Mail:inencati @ inen.gov.ec
Regional Guayas: E-Mail:inenguayas @ inen.gov.ec
Regional Azuay: E-Mail:inencuenca @ inen.gov.ec
Regional Chimborazo: E-Mail:inenriobamba @ inen.gov.ec
URL:www.inen.gov.ec