clasificación, micromanipulación y congelado de embriones

CLASIFICACIÓN, MICROMANIPULACIÓN Y CONGELADO DE
EMBRIONES BOVINOS
Fecha: 29/09/2012
Nombre y Apellido: Germán Daniel Romero
Objetivo:
1. Transferir lo estudiado a lo largo del curso en la resolución de las actividades
presentadas.
Criterios de evaluación:
1. Manejo conceptual, nivel de profundización y capacidad para establecer
relaciones.
2. Capacidad crítica y posibilidad de realizar análisis personales.
3. Integración y transferencia de lo estudiado a situaciones concretas.
1. Observe las fotografías de embriones y en base al Sistema de Evaluación de
embriones de la Sociedad Internacional de Embriones (IETS) haga una
clasificación de los embriones según:
a. el estadio de desarrollo
b. la Calidad (grado 1,2,3,4).
c. Explique para cada fotografía la/s característica/s que tuvo en cuenta para
calificar los embrión.
1
2
3
4
5
6
7
8
Imágenes:
1- Estado de desarrollo: 4
Calidad: 1
Característica para la clasificación: masa celular compacta y de buen color
ocupa más del 60 % del espacio perivitelino.
2- Estado de desarrollo: 4
Calidad: 3
Característica para la clasificación: masa celular compacta y con muchas
blastómeras sueltas, células degeneradas y muchas vesículas.
3- Estado de desarrollo: 6
Calidad: 1
Característica para la clasificación: hay diferencia entre el trofoblasto
externo y el macizo celular interno, se nota el blastocele
4- Estado de desarrollo: 7
Calidad: 1
Característica para la clasificación: hay diferencia entre el trofoblasto
externo y el macizo celular interno, se nota el blastocele, hay un aumento
del diámetro total el embrión comprime la zona pelucida
5- Estado de desarrollo:4
Calidad: 4
Característica para la clasificación: se nota menos de un 50 % de la masa
celular intacta el resto hay blastómeras sueltas, células de diferente tamaño
y degeneradas con vesículas.
6- Estado de desarrollo: 4-5
Calidad: 4
Característica para la clasificación: se nota menos de un 50 % de la masa
celular intacta el resto hay blastómeras sueltas, células de diferente tamaño
y degeneradas con vesículas.
7- Estado de desarrollo:4
Calidad: 4
Característica para la clasificación: blastómeras desordenadas y sueltas
células de apariencia granular o de crecimiento retardado.
8- Estado de desarrollo:1
Calidad: 4
Característica para la clasificación: Apariencia granular (puntillado) rodeado
por una membrana vitelina lisa
2. Realice una comparación entre el método de congelado de embriones con
etilenglicol y la vitrificación teniendo en cuenta: medios de congelado, toxicidad,
curva de congelado, método de descongelado y practicidad (costos,
entrenamiento, etc.).
Medios de congelación: 1- Etilenglicol: Remplaza osmóticamente el agua intracelular en
las células del embrión antes de la congelación. Este método usa Tasas lentas de
congelamiento reduce los cambios de volumen celular y minimizan la formación de
cristales de hielo dentro de las células.
2- Vitrificación: Se usan altas concentraciones de crioprotectores
y el embrión en una solución crioprotectora se coloca directamente en nitrógeno líquido.
Debido a las altas concentraciones del crioprotector no se forman critales de hielo y la
solución forma un vidrio ( las concentraciones de los crioprotectores son de 6M).
Toxicidad: 1- Etilenglicol: a razón de 1.5 M no hay problemas de toxicidad.
2- Vitrificación: La altas concentraciones de los crioprotectores suelen ser
tóxicos para el embrión, químicamente y osmóticamente pero son necesarias para vitrificar,
para minimizar este riesgo se colocan los crioprotectores en dos pasos: el primero en
concentraciones similares a los usados para el etilenglicol y el segundo paso ya las
soluciones van a concentraciones de 6-7 M.
Curva de Congelado: 1- Etilenglicol: inducción a los cristales de hielo a -5y -7°C
(Seeding) luego descenso lento y prolongado de la temperatura (0,3 ó 1,0°C/min) hasta los
-30 ó -35°C; posteriormente colocación en nitrógeno a -196°C.
2- Vitrificación: las curvas de congelamiento son muy rápidas
debido a la concentración de los crioprotectores
Método de descongelado: 1- Etilenglicol: tasa de descongelación relativamente rápida,
(aproximadamente a 250°C/min) para evitar la recristalización. Se colocan los embriones
en agua a entre 30- 35°C por 15 a 30 segundos.
2- Vitrificación: El calentamiento debe ser rápido
generalmente a 37°C en baño María durante 20 segundos
Practicidad: 1- Etilenglicol: no es necesario extraer el crioprotector después de la
descongelación. Una vez en el útero el crioprotector sale del embrión y este se hidrata con
los fluidos del útero.
2- Vitrificación: Su principal ventaja es la sencillez de la técnica a sido muy
usada experimentalmente y su uso comercial es solo una cuestión de tiempo. Lo único que
se necesitan más pasos para extraer el crioprotector.
Costo y Entrenamiento: 1- Etilenglicol: es una técnica no costosa y con poco
entrenamiento se puede realizar fácilmente. Podríamos decir que es de uso cotidiano a nivel
campo. Lo que si se necesita es algo de equipamiento como microscopio congeladora y
descogeladora.
2- Vitrificación: La técnica es más costosa que la anterior y
ocupa más crioprotectores y se necesita más entrenamiento.