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MANUAL DE USO
Ensayo rápido para la detección cualitativa del antígeno de superficie de
Hepatitis B (HBsAg) en suero o plasma.
Solamente.para uso profesional de diagnóstico in vitro
9. RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
1. USO PREVISTO
La prueba rápida en casete HBVTOP®, es un inmunoanálisis cromatográfico
rápido para la detección cualitativa del antígeno de superficie de Hepatitis B en
suero o plasma.
2. SUMARIO
La hepatitis viral es una enfermedad sistémica que afecta principalmente al
hígado. La mayoría de los casos de hepatitis viral aguda, están causados por el
virus de la Hepatitis A, el virus de la hepatitis B (HBV) y el virus de la Hepatitis
C. El antígeno complejo encontrado en la superficie del VHB se llama HBsAg.
Denominaciones anteriores incluyen el Antígeno Australia o Antígeno Au. La
presencia de HBsAg en suero o plasma es indicativa de una infección de
Hepatitis B activa, ya sea aguda o crónica. En una típica infección de Hepatitis
B, el HBsAg se detectará entre 2 y 4 semanas antes de que el nivel de ALT se
vuelva anormal y entre 3 y 5 semanas antes de la aparición de síntomas o
ictericia.
La prueba rápida en casete HBVTOP® es un ensayo para detectar
cualitativamente la presencia de HBsAg en muestras de suero o plasma. La
prueba utiliza una combinación de anticuerpos monoclonales y policlonales para
detectar selectivamente niveles elevados de HBsAg en suero o plasma.
● La prueba rápida en casete HBVTOP® se puede realizar con suero o
plasma.
● Separar el suero o plasma de la sangre lo antes posible para evitar
hemólisis. Utilizar sólo muestras claras no hemolizadas.
● La prueba se debe realizar inmediatamente después de la recogida. No
dejar las muestras a temperatura ambiente durante períodos prolongados.
Las muestras de suero y plasma se pueden almacenar entre 2 y 8°C hasta 3
días. Para almacenamientos prolongados, las muestras se deben mantener
por debajo de -20°C.
● Levar las muestras a temperatura ambiente antes de la prueba. Las
muestras congeladas se deben descongelar completamente y mezclar bien
antes de la prueba. Las muestras no se deben congelar repetidamente.
● Si las muestras se van a enviar, deben embalarse en cumplimiento con las
normativas locales que se aplican al transporte de agentes etiológicos.
10. PROCEDIMIENTO
1.
2.
3. PRINCIPIO DE LA PRUEBA
La prueba rápida en casete HBVTOP® es un inmunoensayo sándwich
cualitativo, en fase sólida de doble locus, para la detección de HBsAg en suero
o plasma. La membrana se encuentra tapizada con anticuerpos anti-HBsAg en
la zona de la Línea de Test del casete. Durante la prueba, la muestra de suero o
plasma reacciona con las partículas recubiertas con anticuerpos anti-HBsAg. La
mezcla migra a lo largo de la membrana cromatográficamente por acción capilar
para reaccionar con los anticuerpos anti-HBsAg fijados en la membrana y
generar una línea de color. La presencia de esta línea coloreada en la región de
prueba indica un resultado positivo, mientras que su ausencia indica un
resultado negativo. Como control de procedimiento, siempre deberá aparecer
una línea coloreada en la región de la Línea de Control, indicando que se ha
agregado el volumen apropiado de la muestra y que se ha producido la
migración en la membrana.
3.
Retirar el dispositivo de test de la bolsita de aluminio sellada y
utilizarlo lo antes posible. Se obtendrán mejores resultados si el
ensayo se realiza inmediatamente después de abrir la bolsa de
aluminio.
Para muestras de suero o Plasma: Sostener el gotero en posición
vertical y transferir 3 gotas de suero o plasma
(aproximadamente 120 µL) al pocillo de muestra del dispositivo de
ensayo e iniciar el temporizador. Ver la ilustración inferior.
Esperar a que aparezca la línea coloreada. El resultado se debe
leer en 15~30 minutos. No interpretar resultados después de 30
minutos.
3 gotas de
suero/plasma
4. REACTIVOS
El dispositivo de prueba contiene partículas con anti-HBsAg y anti-HBsAg fijado
en la membrana.
5. MATERIALES SUMINISTRADOS
● Dispositivos de ensayo
● Goteros
● Manual de uso
11. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
POSITIVO:
6. MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS
● Contenedores de recogida de muestra
● Centrífuga
● Cronómetro
7. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Almacenar los envases a temperatura ambiente o refrigerados entre 2 y 30° C.
Los dispositivos son estables hasta la fecha de caducidad impresa en la bolsa
sellada. Los casetes deben permanecer en la bolsa sellada hasta su uso. NO
CONGELAR. No usar después de la fecha de caducidad.
NEGATIVO:
Aparece una línea coloreada en la Zona
Control (C). No aparece ninguna línea
coloreada aparente en la Zona Test (T).
8. PRECAUCIONES
Por favor, leer toda la información de este folleto antes de realizar el
ensayo.
● Solamente para uso profesional de diagnóstico in vitro. No utilizar después de
la fecha de caducidad.
● La prueba debe permanecer en la bolsa sellada hasta su uso.
● Todas las muestras se deben considerar potencialmente peligrosas y
manejarse igualmente como agente infeccioso.
● Los casetes usados, se deben desechar según la normativa local.
* Aparecen dos líneas de color diferentes.
Debe aparecer una línea coloreada en la Zona
Control (C) y otra línea coloreada en la Zona
Test (T).
* Nota: La intensidad del color en la zona de la
línea Test (T) variará dependiendo de la
concentración de HBsAg presente en la
muestra. Por lo tanto, cualquier tono de color
en la zona Test (T) se debe considerar
positivo.
NO VÁLIDO:
La línea Control no aparece. Las razones más
probables de fallo en la línea control, son un
volumen de muestra insuficiente o técnicas
procesales incorrectas. Se debe revisar el
procedimiento y repetir la prueba con un
nuevo casete de ensayo. Si el problema
persiste, deje de utilizar el kit de inmediato y
póngase en contacto con su distribuidor local.
MANUAL DE USO
12. CONTROL DE CALIDAD
● El test incluye un control del procedimiento. Una línea de color que aparece
en la Zona Control (C) es el control interno del procedimiento. Se confirman el
volumen de muestra suficiente y técnica procesal correcta.
● Con el kit no se suministran sueros de control; Sin embargo, se recomienda
el uso de un control positivo (de 10ng/ml de HBsAg) y de un control negativo (de
0 ng/ml de HBsAg) como una buena práctica de laboratorio para confirmar el
procedimiento del ensayo y verificar el rendimiento adecuado de la prueba.
13. LIMITACIONES DEL ENSAYO
1
2
3
4
La prueba rápida en casete HBVTOP® es solamente para uso
profesional de diagnóstico in vitro. El ensayo se debe utilizar para la
detección de HBsAg en las muestras de suero o plasma. A través de
esta prueba cualitativa, no se pueden determinar valores cuantitativos
ni concentraciones de HBsAg
La prueba rápida en casete HBVTOP® solamente indica la presencia
de HBsAg en la muestra y no se debe utilizar como criterio único para
el diagnóstico de la infección viral de Hepatitis B.
Como con cualquier prueba diagnóstica, se deben evaluar todos los
resultados junto con otras evidencias clínicás disponibles para el
médico.
La prueba rápida en casete HBVTOP® no puede detectar menos de 1
PEI ng/ml de HBsAg en las muestras. Si el test es negativo y
persisten los síntomas clínicos, se sugiere realizar pruebas de
seguimiento adicionales usando otros métodos clínicos. Un resultado
negativo en cualquier momento no excluye la posibilidad de infección
de Hepatitis B.
► Reactividad cruzada
La prueba rápida en casete HBVTOP® (suero/plasma) se ha ensayado con
muestras positivas para HAMA, factor reumatoide (RF), HAV, sífilis, VIH,
Helicobacter pylori, Mononucleosis infecciosa, CMV, rubéola, HCV, HEV y
toxoplasmosis. Los resultados no mostraron ninguna reactividad cruzada.
► Substancias interferentes
La prueba rápida en casete HBVTOP® (suero/plasma) se ha probado para
evaluar la posible interferencia de muestras visiblemente hemolizadas y
lipémicas. No se observó ninguna interferencia.
Además, no se observó ninguna interferencia en muestras conteniendo hasta
2.000 mg/dL de hemoglobina, 1.000 mg/dL de bilirrubina y 2.000 mg/dL de
albúmina sérica humana.
16. BIBLIOGRAFÍA
1. Blumberg, B.S. The Discovery of Australian Antigen and its relation to viral
hepatitis. Vitro. 1971; 7: 223
SÍMBOLOS
Pictogramas
Significado
Atención, ver
instrucciones de uso
14. VALORES ESPERADOS
Solo para
diagnóstico in vitro
La prueba rápida en casete HBVTOP® (suero/plasma) se ha comparado con
uno de los principales ensayos comercial HBsAg EIA. La correlación entre estos
dos sistemas es del 98%.
30° C
15. PRESTACIONES DEL ENSAYO
2° C
Conservar
entre 2 y 30 °C
► Sensibilidad
La prueba rápida en casete HBVTOP® (suero/plasma) se ha probado con un
panel de sensibilidad que va desde 0 hasta 300 ng/ml. Los 10 subtipos de
HBsAg ofrecieron resultados positivos con el Kit. La prueba puede detectar 1PEI
ng/ml de HBsAg en suero o plasma.
Pruebas por kit
► Especificidad
Los anticuerpos utilizados para la prueba rápida en casete HBVTOP®
(suero/plasma) se desarrollaron contra la totalidad del antígeno aislado del
virus de la Hepatitis B. También se probó la especificidad de la prueba rápida en
casete HBVTOP® (suero/plasma) con cepas de laboratorio de Hepatitis A y
Hepatitis C. Todos ellos dieron resultados negativos.
Número de lote
METODO
Resultados
HBVTOP®
Positivo
Negativo
Resultados Totales
INMUNOENZIMÁTICO
Positivo
Negativo
413
7
2
1.593
415
1.600
Caducidad
Fabricante
No reutilizable
Resultados
Totales
420
1.595
2.015
Código
Sensibilidad relativa: 99.5% (95%IC*: 98.3%-100%)
Especificidad relativa: 99.6% (95%IC*: 99.1%-99.8%)
Precisión: 99.6% (95%IC*: 99.2%-99.8%)
*Intervalos de Confianza
► Precisión
Intra-ensayo: La precisión intraensayo se determinó mediante el uso de 15
repeticiones de tres muestras que contienen 0 ng/ml, 1 ng/ml y 5 ng/ml de
HBsAg. Los valores negativos y positivos fueron correctamente identificado el
98% de las veces.
Inter-ensayo: La precisión interensayo se determinó mediante el uso de las
mismas tres muestras de 0 ng/ml, 1 ng/ml y 5 ng/ml de HBsAg en 15 ensayos
independientes. Se evaluaron tres lotes diferentes de HBVTOP® durante un
período de 3 meses usando muestras negativas, positivas bajas y positivas
altas. Las muestras se identificaron correctamente el 98% de las veces.
Directiva 98/79/CE
Versión 2 –22/10/2013
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