(Extracción de cenizas para P total)

Técnicas de Muestreo, Análisis e Interpretación de Datos
Ingeniería Ambiental
FÓSFORO TOTAL:
Reactivos:
- Ácido clorhídrico concentrado
- Ácido nítrico 2 M (en botella enrasada a 1 L, con aproximadamente 100 mL de agua destilada, poner
128 mL de HNO3 y llevar a 1 L).
Procedimiento
Sobre crisoles con cenizas de determinación de C, humedecer las cenizas con gotas de agua destilada.
Agregar 2 mL de HCl concentrado. Evaporar en plancha calefactura. Luego Calcinar durante 1 h. Sacar
de la plancha, dejar enfriar, agregar 2,5 mL de HNO3 2 M, raspar y mezclar con pipeta plástica de
transferir. Pasar a matraz de 50 ml con la misma pipeta. Con otra pipeta, agregar porciones de agua
destilada enjuagando el crisol. No perder nada del contenido del crisol. Procesar un blanco. Enrasar a 30
mL, pasar a probeta y sedimentar mínimo 12 hs. Trasferir el sobrenadante a frasquitos.
Proceder a la determinación de P
Reactivos
• Solución de NaHCO3 0,5 M.
Disolver 42 g de NaHCO3 en aprox. 800 mL de agua desionizada. Tomar el pH y ajustar a 8,4 con NaOH
o HCl, diluir luego a 1 L.
Considerar que se debe preparar reactivo suficiente para que queden alícuotas para blancos de reacción.
Preparación de la muestra: (Suspensión muestra en NaHCO3, 1:100)
En
•
•
•
•
•
•
tubo de centrífuga de 50 mL, con tapa.
Poner 0,4 g de muestra seca en el tubo.
Agregar 40 mL de solución de NaHCO3 0,5 M..
Agitar 30 minutos el tubo acostado, en sentido del eje del mismo,.
Centrifugar
Se filtra por filtro Whatman 42 o equivalente, y se recoge el filtrado en frascos de vidrio
Conservar los frascos en heladera hasta la determinación analítica. El extracto mantenido en heladera
es estable por algunos días.
Técnica:
Método del ácido ascórbico-molibdato de amonio.
Introducción:
El método se basa en la formación de complejos de fosfomolibdato (amarillo) que se reducen por
ácido ascórbico dando un compuesto de Mo de color azul. El color es estable a partir de los 20 minutos
de reacción y permanece por aproximadamente 3 horas.
Las mediciones se realizan en espectrofotómetro a longitud de onda 882 nm.
Interferencias y limitaciones de la determinación química:
La solución extractante puede almacenarse por aproximadamente 1 mes en frascos plásticos, pero se
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recomienda prepararla para cada extracción.
Otra fuente probable de variación es la temperatura de la solución extractante, el tiempo de agitación
y la posición de los tubos, por lo que todos estos factores deben estar muy bien estandarizados
La intensidad del color está limitada por la acidez del medio. Los aniones arseniatos y silicatos
pueden influenciar las condiciones de óxido reducción.
Materiales y equipos:
-Frascos de reacción: frascos de vidrio, de aprox. 50 mL. Los frascos deben estar perfectamente
limpios y deben almacenarse en lugares libres polvo.
-Espectrofotómetro: para usar a 882 nm, con cubas de 1 cm de paso óptico.
Reactivos:
Acido sulfúrico concentrado: grado analítico.
Acido sulfúrico 5 N: Bajo campana y con anteojos de seguridad poner un poco de agua destilada
(más o menos 0,5 L) en un erlenmeyer de 2 L (previamente calibrado a 1L) y agregar lentamente y
con mucho cuidado 135 mL de ácido sulfúrico concentrado. Cuando se enfría llevar a 1 L.
Reactivos de color: A y B
Reactivo A:
1-Disolver 12 g de paramolibdato de amonio (NH4)6Mo7O24.4H2O en 250 mL de agua destilada
2-Disolver 0,2908 g de tartrato de antimonio y potasio en 100 mL de agua destilada.
3-Preparar 1 L de ácido sulfúrico aproximadamente 5 N, (ver punto anterior) en erlenmeyer de 3 L,
con enrase en 1 y 2 L
4- Agregar al litro de ácido sulfúrico 5 N (3) las soluciones (1) y (2). Llevara a 2 L. Esta es la
solución A.
Reactivo B: se prepara al momento de usar, sólo es estable por 24 hs en heladera (en freezer
puede durar algunas semanas). Disolver 1.056 g de ácido ascórbico en 200 mL de Reactivo A.
Estándares:
-Estandar primario: Solución Madre de Fósforo, de 400 mg P/L : disolver 1,7575 g de fosfato
diácido de potasio anhidro (KH2PO4) en agua destilada y diluir a 1.000 mL. Conservar en la oscuridad
con el agregado de 2 gotas de cloroformo para evitar crecimiento de hongos. También se puede comprar
una solución comercial de patrón de fosfato.
- Solución patrón de trabajo: Solución Patrón de trabajo de Fósforo de 2 µg P/mL diluir 5,00 mL
de la solución Madre de 400 mg P/L a 1000 mL.
-Curva de calibración: Se trabaja con diferentes diluciones del estandar para conseguir
concentraciones entre 0 y 10 ug P/tubo. Procesar como en "Técnica Analítica". Según nuestra
experiencia la técnica es lineal hasta absorbancia aproximada de 0,5
-Estandar de trabajo: verificada la linealidad de la curva en el rango dado, se puede trabajar
rutinariamente con un sólo estándar, por ejemplo 4-5 ug P/tubo utilizando 2,5 mL de la solución patrón
de trabajo
Muestra:
Extracto en bicarbonato del compost, directo o diluido, de acuerdo a la concentración de P extraible.
Técnica:
Se procesan Blanco de reacción y Estandar por triplicado (para poder eliminar un dato si es necesario).
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En recipientes rotulados: B (blanco de reacción), St (estándar) y E (extracto, con su Nº ) poner:
Solución de Bic. 0,5 N (mL)
Estándar 2 ug P/mL (mL)
Extracto ó dilución (mL)
Sulfúrico 5N
Agua (mL)
B
2,5
**
10
St
2,5
2,5
**
7,5
E
2,5
**
10
Pasos detallados:
1. Si la alícuota de extracto de 2,5 mL es demasiado concentrada compensar a 2,5 mL con solución
de Bicarbonato 0,5 N
2. Acidificar con Sulfúrico 5N gota a gota (controlar pH con cinta en los dos primeros frascos). Una
vez determinado el volumen agregar a todos los frascos el mismo. CUIDADO!!, la reacción hace
mucha espuma por liberación de carbónico
3. Llevar todos los frascos a Volumen de aproximadamente 12,5 mL.
- Agregar a todos los recipientes 2 mL de reactivo B. Mezclar suavemente por rotación luego de cada
agregado.
- Incubar 20 minutos (puede ser en baño de agua aproximadamente a 30ºC).
-Leer en espectrofotómetro a 882 nm, contra blanco de agua.
-Cálculos.
Si se trabajó con un sólo estándar:
Abs E. - Abs B
40 mL
P (ug/g ) = P (mg/kg ) ------------------------- x cc.St (ug P/tubo) x ----------------- x
Abs St.- Abs B
2,5 mL (alic.)
1g
------0,4 g
Donde:
Abs E = absorbancia del extracto.
Abs B = absorbancia del blanco de reactivos.
Abs St = absorbancia del estándar.
cc. St = concentración del estándar.
Si se trabajo con distinto volumen de alícuota reemplazar en la fórmula 2,5mL por el volumen
correspondiente
Si se trabajó con 2,5 mL de extracto diluido, multiplicar el resultado por el factor de dilución
correspondiente.