METABOLISMO FOSFOCALCICO. Laboratorio - IDIM
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IDIM Métodos de diagnóstico. Colección, preservación y análisis de sangre y orina en la evaluación del metabolismo mineral, enfermedades óseas y nefrolitiasis. Ensayos de vitamina D. ERICH FRADINGER Maestría 2013 1 SANGRE ORINA Calcio Calcio iónico Magnesio Fósforo PTHI 25 Vit D 1,25 D Calcio Fósforo Magnesio Sodio Marcadores F y R Marcadores R Urico Citrato Oxálico Cistina LITIASIS 2 ORINA 24 HS Calcio H+ Fósforo Magnesio H+ Sodio Urico Citrato H+ Oxálico H+ Cistina Marcadores R Clearence Reabs tub fosforo ORINA 2 HS relación ca/cr Reabs tubular fosforo Clearence creat Marcadores R 2ª orina espontanea Relación ca/cr Marcadores R 3 IDIM Cl creat 24 hs: cr orina x diu24 x 100 c suero x 1440 Reabs tub PO4: 100 - fosf orina x crea suero x 100 fosf suero x crea orina Cl creat 2 hs: cr orina x diu2 x 100 cr suero x 120 Cl corregido: cl creat x 1.73 sup corp 4 IDIM 1) Medición de calcio total e iónico. 2) Suero o plasma con heparina. Nunca EDTA, citrato, oxalato. 5 IDIM Calcio iónico: 1) Factores que afecten el pH de la muestra (contacto con el aire). Al aumentar protones (dism pH) disminuye el calcio unido a albumina y aumenta el iónico. 2) Anticoagulante inadecuado 3) Anticoagulante en exceso (dilución de la muestra) 6 CALCIO IDIM Efecto de albumina sobre calcio total: Calcio correg : calcio total + 0.8 ( 4 – alb) 7 Buena concordancia, pero VI… ademas de 2 mediciones: ca y alb8 IDIM FOSFORO Y MAGNESIO: 1) Suero 2) Evitar hemólisis PTH Y MARCADORES: 1) FREEZER 2) Evitar hemolisis 9 MARCADORES. EN AYUNAS Y ALA MAÑANA IDIM TODO EL METAB FOSFOCALCICO EN AYUNAS! 10 Dosaje de 25D •Estado Nutricional •1,25 DI HIDROXI Vit D IDIM NO !!!!!! ETAPA PREANALITICA Clinical Chemistry 2005:51 ESTABILIDAD DE 25 D ** DEQAS: SIN CAMBIOS GUARDANDO 2 SEMANAS A 30 º C ETAPA ANALITICA DEQAS 2000 12 16 24 (ng/ml) 27 DEQAS 2004 -2SD -1SD 11 16 ALTM (ng/ml) +1SD +2SD 23 27 DEQAS 2011 -2SD -1SD 11 16 ALTM (ng/ml) +1SD +2SD 23 27 Binkley et al, JCEM 2004:89 (7) Problemas • • • • Método Especificidad Sensibilidad Estandarización: necesidad de un st. Internacional y un metodo de referencia • Experiencia propia con el ensayo Métodos para 25(OH)D • DIRECTOS : Competición proteica sin cromatografía (in-house ó comercial) • Chapuy MC, Dawson Hughes B, Heaney RP, Rosen C, Holick MF, etc!!!! Métodos para 25(OH)D • Competición proteica con cromatografía (baja presión) • HPLC, GC-MS • RIA • ELISA • AUTOMATICOS Método automatico JCEM, 2005:90 (6) Media = 30.4 ng ; 25% = 22 ng 75% = 37 ng Método automatico JCEM, 2005:90 (6) JCEM 2005: 90 (11) autor ref. publicado ng/ml método Chapuy NEJM 1992 42 DIRECTO D.Hughes NEJM 1989 38 DIRECTO D.Hughes NEJM 1997 44 DIRECTO Holick AJM 2002 35 DIRECTO Vieth R JCEM 2003 24 RIA autor ref. publicado “corregido” ng/ml ng/ml método Chapuy NEJM 1992 42 29 DIRECTO D.Hughes NEJM 1989 38 26 DIRECTO D.Hughes NEJM 1997 44 31 DIRECTO Holick AJM 2002 35 25 DIRECTO Vieth R JCEM 2003 24 24 RIA Según Lips, et al. Ost Int 1999 ESPECIFICIDAD 25(OH) D3/ 25(OH)D2 COLECALIFEROL • Vit.D3 25(OH)D3 1,25D3 ERGOCALCIFEROL • Vit.D2 25(OH)D2 1,25D2 Sin medicación Con D2 Hollis B. Clin Chem 2000:46 Steroid Biochem 2007 INFORMAR VALORES DE 25D2? ESPECIFICIDAD 24,25(OH)2D “ Are assays that miss target values by 200-500% meaningful? GUESSING, would be more accurate and additionally could provide cheaper and faster test results for females-without even having to draw the patient’s blood”. Clinical Chemistry, 2003:49:8:1250-1 40 Métodos para 25(OH)D • AUTOMATICOS • • • • ROCHE SIEMENS ABBOTT LIAISON Electroquimioluminiscencia Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia 5 20 ESPECIFICIDAD C3 EPI 25D JCEM 2006 CONCLUSIONES • Necesidad de un St. de Referencia Internacional. • Necesidad de definir un Método de Referencia. • Control del método con CCI y CCE IDIM IDIM METODOS 1,25D • Ria (cromatografia) • Sin Standard Internacional de Referencia. • Sin Método de Referencia. Métodos para 25(OH)D • • • • • • • • • RIA HPLC ELISA LC-MS del NIST y Univ de GHENT: METODO DE REFERENCIA! AUTOMATICOS DIASORIN Quimioluminiscencia (2004) SIEMENS Quimioluminiscencia ABBOTT Quimioluminiscencia ROCHE Electroquimioluminiscencia Listado de trabajos con los nuevos ensayos 2012 • • • • • • • • • • Heijboer et al. Clin Chem 58:3 Ong et al Clin Chim Acta 413 Barake et al, JCEM 97(3). Tahsin et al, Clin Nutr Won Moon et al Clinical Biochem 45. Farrell et al Clin Chem 58:3 Van den Ouweland JM et al, J Chrom 878 Chen Y et al, Clin Biochem Emmen JM et al, Clin Chem Lab Med Jenssen M et al, Steroids • 1) Gran variabilidad entre ensayos • 2) Gran variabilidad con respecto a LC/MS • 3) Gran variabilidad en respuesta a standard internacional SRM 972 (1): en general, bias positivo para Roche y bias negativo para Centauro, Architect Liaison. • 4) Linealidad. • El corte debería ser ensayo-especifico. • Seguimiento en el mismo laboratorio • Urgencia en la estandarización. Janssen M, et al, Steroids 2012 25 OH VITAMIN D TESTING BY THREE METHODS: DO THEY IDENTIFY THE SAME LEVEL OF DEFICIENCY? Sequera Ana M, Ruibal GR, Núñez Chavarría E, Farelo H, Odriozola A, Fossati P, Pelletier D, Esteban P, Corti S, Aguet M, Aguirre M, Aseguinolaza M, Benítez G, Coniglio S, Fradinger E, Fiorenzano R, Fontanazza A, González ME, Gutiérrez N, Justo C, Lescurat M, Miro M, Montero S, Molinas H, Paredes C, Pittau A, Reverendo A, Tarifa C, Barcudi S, Canteli A, Calderón C, Di Pietro G, Galassi A, García V, Gimenez J, Guerrero L, Kogovsek N, Muñoz M, Niro M, Ramos G, Rocca M, Rossi N, Fenili C, Gurfinkiel M, Kozak A. II Course of Specialization in Endocrine Biochemistry, Argentine Society for Endocrinology and Metabolism, Buenos Aires, Argentina. RIA ADVIA ROCHE NORTE 20.9% 45.5% 16.7% CENTRO 35.2% 33.3% 37.9% SUR 51.4% 67% 42.2% < 20 ng/ml Distribución de pacientes con 25D menor a 10 ng/ml 30 25 % 20 15 10 5 0 % ADVIA 26 MODULAR 11 LIAISON 14 RIA 12 Lab. Medicina, Lab. Stamboulian, IDIM. Calilab 2012 Problemas • Molécula extremadamente hidrofóbica. • Unión muy importante a DBP • Dos moléculas en circulación (en tto con D2) • Dudas con la disociación de la 25D de su proteína ligadora para ser ensayada • Dependencia entre-ensayo de la cc de DBP del paciente. Problemas • Especificidad: • 24,25 (OH)2: 25D < 60 ng/ml: 3.5 ng/ml • 25D > 60 ng/ml: 12 ng/ml • C3- epi 25D (los IE no los reconocen, salvo Roche) • Isobaros como el 7 α C4 (¿?) ENSAYO EMPRESA % 25D3 %25D2 %24,25 % C3-EPI RIA DIASORIN 100 100 100 LIAISON DIASORIN 100 100 - CENTAURO SIEMENS 97.4 106 - 1.0 COBAS/ MODULAR ROCHE 98 81 121 93 ARCHITECT ABBOTT 105 82 112 2.7 RIA ct DIASOURCE 100 100 95 - ELISA DIASOURCE 100 83 100 0.2 ELISA INMUNODI AGNOSTIK 100 23.4 - - 1.3 CONTROL EXTERNO DEQAS 2012 n -2SD -1SD ALTM +1SD +2SD 23 13 (ng/ml) 1000 Las buenas noticias • Procesos de mejora contínua Re-standarización de curvas Las muestras del DEQAS van a estar medidas por el metodo de referencia del NIST!! IDIM SRM 972a IDIM Reparten 50 sueros con valores certificados por método de referencia (calibrado con SRM 2972 y validado con SRM 972) Trazar el método a LC/MS y a SRM IDIM CONCLUSIONES • Necesidad de un St. de Referencia Internacional. • Necesidad de definir un Método de Referencia. • Control del método con CCI y CCE
