Caracterización de extractos fluidos de Lippia turbinata Griseb.

Resumen: E-052
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006
Caracterización de extractos fluidos
de Lippia turbinata Griseb.
Nuñez, María B. - Sosa, Analía del C. - Aguado, María I. - Raisman, Jorge S.
Facultad de Agroindustrias, UNNE.
Cdte. Fernández 755 – C.P. 3700 - Sáenz Peña, Chaco – Argentina
Teléfono: 03732-420137 Int.106 (fax), e-mail: [email protected]
Antecedentes
Lippia turbinata Griseb. pertenece a la familia Verbenaceae, y se la conoce popularmente como poleo, té del país o té
criollo. Es una especie autóctona de nuestro país y su hábitat abarca Salta, Tucumán, San Juan, San Luis, Mendoza,
Chaco, Córdoba, Catamarca y La Rioja.
Se emplean las hojas y tallitos tiernos en forma de infusión; es muy indicado para trastornos digestivos y enfermedades
del sistema nervioso. Además, es un buen tónico (Ratera y Ratera, 1980). La parte aérea se emplea en Argentina como
digestivo, diurético y emenagogo. (Gupta, 1995).
Las soluciones extractivas presentan algunas ventajas: condiciones de conservación, facilidad de empleo, posibilidad de
estandarización, aumento de biodisponibilidad, etc., y algunos inconvenientes: peligro de dilución de principios activos,
interacción con el disolvente, imposibilidad de extraer todos los componentes, etc. Los principios activos fácilmente
solubles se extraen con graduaciones alcohólicas cercanas a los 50º. Graduaciones inferiores a los 30º pueden extraer
los principios activos pero no los conservan lo suficiente. Las drogas muy activas pueden requerir concentraciones
cercanas a los 90º, y aquellos vegetales muy ricos en aceites esenciales volátiles y resinas requieren en general
concentraciones de 80º. El alcohol utilizado es el etílico (Alonso, 1998).
El objetivo del proyecto de investigación madre es la estandarización de la droga cruda y de la elaboración de
soluciones alcohólicas a partir de plantas medicinales regionales. Como parte del mismo, en esta oportunidad se
reportan los resultados de la eficiencia extractiva de distintas soluciones hidroalcóholicas y la caracterización
fisicoquímica de los extractos fluidos obtenidos.
Actualmente se está evaluando la estabilidad de los extractos en distintos medios, a la luz y a distintas temperaturas. En
etapas posteriores se prevé la identificación de los principales principios activos del extracto mediante cromatografía en
placa y su cuantificación.
Materiales y Métodos
Material vegetal
El material vegetal empleado fue obtenido de plantas silvestres de un campo ubicado a 10 km al NE de la ciudad de
Presidencia Roque Sáenz Peña. Las partes utilizadas fueron las hojas y tallos tiernos; éstos se colectaron de forma
manual, se lavaron, desinfectaron con hipoclorito de sodio al 1% y se secaron a la sombra con corriente de aire natural,
extendidos en bandejas, removiendo el material periódicamente y durante cuatro días. El material secado fue molido de
forma mecánica en molino de cuchillas Dalvo y tamizado por tamiz estandarizado Nº 20. El polvo así obtenido fue
conservado en frascos color caramelo de cierre hermético.
Poder extractivo de mezclas hidroalcohólicas
Se utilizó el método cuantitativo recomendado en Farmacopea Argentina 7º Edición (FA 7, 2003), método extractivo
alcohólico por extracción en frío (Método II). Para ello, en cada caso se pesaron 4 g del material en polvo y en
erlenmeyer de 250 ml se adicionaron 100 ml de alcohol etílico de 70º, 75º, 80º, 85º y 90º. Se maceró durante 24 horas
en el erlenmeyer tapado, agitando frecuentemente durante las primeras 8 horas y luego se dejó reposar. Se filtró a
presión reducida y se colocaron 25 ml de cada filtrado en sendos cristalizadores, procediendo a evaporar en estufa
convencional a 105º C hasta peso constante. El resultado se expresó en miligramos de materia extraíble en alcohol por
gramo de la muestra empleada. El ensayo se efectuó por triplicado.
Obtención de extractos fluidos
El extracto fluido se preparó a partir del material vegetal en polvo por el procedimiento de lixiviación hidroalcohólica
simple tipo A, según Farmacopea Nacional Argentina VI Edición (FNA VI Edición, 1978). El menstruo utilizado fue
alcohol etílico de 70º. En la obtención se utilizaron columnas extractivas de vidrio color oscuro, de forma cónica
terminada en su base menor en un casquete infundibuliforme corto y una manguera de derrame con pinza de Mohr. El
material vegetal se colocó en la columna extractiva y se lo dejó en humectación 1 hora, se lixiviaron los primeros 5 ml y
se recuperaron en la columna. Se adicionó menstruo suficiente para humectar el vegetal y se dejó en maceración una
hora adicional. Se lixivió lentamente y se obtuvieron cuatro muestras de extracto fluido de Lippia turbinata para la
realización de los análisis correspondientes.
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Propiedades fisicoquímicas estudiadas
Se procedió al estudio de las siguientes propiedades:
- Características organolépticas: observando transparencia, color, olor y sabor.
- Determinación de pH: se utilizó pHmetro Altronix® TPA III de resolución 0,01. El procedimiento de trabajo siguió las
indicaciones de FA 7 (2003).
- Determinación de índice de refracción: se utilizó refractómetro digital PR 100 Atago (0 a 32 % Brix). Las lecturas en
grados Brix se convirtieron a índice de refracción por tablas.
- Determinación de la densidad relativa: se utilizó picnómetro seco siguiendo la técnica descripta en FA 7.
- Determinación de la viscosidad: se utilizó el viscosímetro Saybolt Jonomex® AVS 88. Se determinó la viscosidad
cinemática según FNA VI Edición.
- Determinación de pérdida por secado: según el método establecido en FA 7, se colocó en sendos cristalizadores 2 g
de líquido de cada una de las 4 muestras y se llevó a estufa convencional a temperatura de 105ºC hasta peso constante.
- Determinación de la conductividad eléctrica: se utilizó el conductivímetro Cole Parmer 1481-61, de resolución 0,1 y
constante de celda de 10+/-0,04. Se procedió según método FA 7.
Análisis estadístico
Los ensayos de poder extractivo de las soluciones hidroalcohólicas y de caracterización de los extractos fueron
realizados por triplicado para cada muestra. Para determinar la existencia de diferencias significativas entre los valores
obtenidos se realizó el análisis de varianza (ANOVA) y tests como el de rango múltiple, con un nivel de confianza del
95%. Para el tratamiento estadístico se usó el programa Statgraphics Plus versión 4.0.
Discusión de Resultados
Poder extractivo de mezclas hidroalcohólicas
Tabla 1: Eficiencia extractiva de las distintas soluciones hidroalcohólicas
Graduación Alcohólica
Mg materia extraíble/g de materia prima
70º
150,6 ± 4,5
75º
134,4 ± 0,7
80º
120,8 ± 1
85º
108,1 ± 2,1
90º
91,1 ± 0,3
Los valores que reflejan el poder extractivo de las soluciones hidroalcohólicas presentan diferencia significativa entre
las distintas graduaciones alcohólicas. Puede esperarse un mejor proceso extractivo utilizando una solución
hidroalcohólica de 70º, ya que es la que mayor residuo permite obtener en el ensayo. Las comprobaciones estadísticas
entre las distintas graduaciones presentaron valores de p menores a 0,003.
Características organolépticas de los extractos fluidos
Cada una de las cuatro muestras de soluciones extractivas presentaron un color verde oscuro, aspecto opaco, olor propio
de la especie y sabor sui generis, con un fuerte dejo alcohólico, manteniendo estas características con el tiempo.
Propiedades fisicoquímicas de los extractos fluidos
Tabla 2: Valores promedio de pH, conductividad y pérdida por secado.
Pérdida por
pH
Conductividad (µMho)
Extracto
secado (%)
Muestra Nº
−
−
−
X ±SD
X ±SD
X ±SD
1
2
3
4
(cv)
6,82 ± 0,005
( 0,069)
6,9 ± 0,005
(0,068)
6,82 ± 0,009
(0,138)
6,9 ± 0,000
( 0,000)
(cv)
4,5 ± 0,06
(1,273)
4,6 ± 0,10
(2,174)
4,4 ± 0,06
(1,302)
5,2 ± 0,10
(1,923)
(cv)
94,89 ± 0,120
(0,126)
95,66 ± 0,015
(0,016)
93,86 ± 0,046
(0,049)
95,33 ± 0,026
(0,027)
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Los extractos hidroalcohólicos de Lippia turbinata Griseb. obtenidos con mezcla hidroalcohólica de 70 º presentaron un
pH cercano a la neutralidad, una conductividad baja y una pérdida por secado que revela bajos valores de residuo no
volátil. Dichos valores de pH y conductividad permitirán observar la influencia de la variación del medio (ácido o
básico), del calor y de la luz a través del tiempo.
Se registró un bajo rango de variación entre los valores de cada propiedad entre las cuatro muestras, lo que sugiere una
aceptable reproducibilidad.
Tabla 3: Valores promedios de viscosidad, índice de refracción y densidad relativa.
Viscosidad
Indice de
Densidad Relativa a
20ºC (g/ml)
(cstoke)
refracción (nD20)
Extracto
−
−
−
Muestra Nº
±SD
±SD
±SD
X
1
2
3
4
(cv)
-5
7,40x10 ± 0,04x10-5
(0,66)
7,52x10-5 ± 0,007x10-5
(0,09)
7,52x10-5 ± 0,007x10-5
(0,10)
7,51x10-5 ± 0,004x10-5
(0,06)
X
(cv)
1,36836 ± 2,08x10-5
(0,001)
1,36752 ± 2x10-5
(0,001)
1,36836 ± 1,53 x10-5
(0,001)
1,36786 ± 2,64 x10-5
(0,002)
X
(cv)
0,908 ± 0,0001
(0,017)
0,906 ± 0,0002
(0,028)
0,911 ± 0,002
(0,208)
0,906 ± 0,0002
(0,023)
Las soluciones hidroalcohólicas obtenidas tienen características propias de un líquido, con viscosidad, índice de
refracción y densidad relativa similares a las del agua, lo cual permitiría su presentación y dispensación en una forma
farmacéutica líquida. Para las propiedades presentadas en la tabla precedente surgieron valores pequeños de coeficiente
de variación.
Conclusiones
Los ensayos practicados permitieron definir que la graduación alcohólica de 70° es más apropiada como menstruo para
obtener una solución hidroalcohólica que contenga la mayor parte de los principios activos de Lippia turbinata Griseb.
Las muestras de extractos de Lippia turbinata Griseb. presentaron características organolépticas similares entre sí y
semejantes a las cualidades de la hierba. En cuanto a sus propiedades fisicoquímicas las muestras presentaron un pH
cercano a la neutralidad, conductividad baja y con características de un líquido de alta fluidez, lo que facilitaría su
dispensación en forma de gotas medicamentosas.
Las propiedades analizadas presentan una mínima variabilidad entre las cuatro muestras, lo cual, con el material vegetal
empleado como materia prima y en nuestras condiciones de trabajo, representan una aceptable reproducibilidad en la
obtención de extractos fluidos.
Bibliografía
− Alonso, Jorge R., 1998. Tratado de Fitomedicina. Isis Ediciones. P.864-868. Argentina.
− Farmacopea Nacional Argentina. 6ª Edición, 1978. Comisión Permanente de Farmacopea Argentina. Ministerio de
Salud. ANMAT. INAME.
− Farmacopea Nacional Argentina. 7ª Edición, 2003. Comisión Permanente de Farmacopea Argentina. Ministerio de
Salud. ANMAT. INAME.
− Gupta Mahabir P., 1995. 270 Plantas Medicinales Iberoamericanas. Programa Iberoamericano de Ciencia y
Tecnología para el desarrollo. Subprograma de Química Fina Farmacéutica.
− Ratera, E. L. y Ratera, M. O., 1980. Plantas de la flora argentina empleadas en medicina popular. Editorial
Hemisferio Sur S.A. Buenos Aires.