UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA
Nombre:
Carla Aulestia
Reconstitución de las cepas de referencia
Las Cepas de referencia adquiridas por el laboratorio de microbiología son registradas
en planilla como marca el procedimiento.
Las Cepas de referencia son almacenadas entre 0-5 º C hasta su uso.
En la reconstitución y siembra de la Cepas de referencia, se utiliza el medio de cultivo,
las condiciones de incubación y el procedimiento indicado en las disposiciones para
cada tipo de microorganismo del organismo proveedor de las cepas.
Las Cepas de referencia serán sometidas a un control de calidad de pureza y viabilidad,
así se le dará registro.
Control de calidad de pureza y viabilidad:
Este control se realiza a diferentes niveles del proceso; asimismo, se desempeña cada
vez que se realiza un replique. El objetivo de dicho control es el de asegurarse que las
cepas conservan su viabilidad y sus caracteres bioquímicos.
1. PUREZA
 Se reactiva la cepa del congelador en un medio de baja selectividad, se incuba a
37ºC durante 24 horas.
 Se realiza siembras por técnica de vertido con diferentes diluciones en medios
de baja selectividad (TSA, PCA) y AS.
 Se elige aquellos grados de dilución con los cuales sea posible aislar colonias
independientes.
 La toma y siembra de la colonia aislada desde la placa original se lleva a cabo
con ayuda de un asa.
 Se utiliza la técnica de estriado en medios no selectivos (agar nutritivo, TSA,
PCA).
 Con colonias bien aisladas se realiza una tinción gram para comprobar su
purificación.
2. VIABILIDAD
 Cuando esta la cepa pura se procede a congelar en crioviales, previo a esto se
cuantifica los microorganismos.
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Se realiza un inóculo de la cepa en BHI durante 24 horas, se siembra por vertido
con diferentes diluciones (10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6), se incuba las cajas
24 horas a 37ºC.
Se realiza un contaje de las cajas que tengan colonias en un rango de 30 – 300,
y se multiplica por el factor de dilución, este es el valor de referencia.
Realizar el mismo procedimiento de las cepas cada mes para comprobar la
viabilidad.
Viabilidad =
número de colonias al tiempo de muestreo
x 100
Número de colonias al inicio de la conservación
Frecuencia de realización de este control:
Es el laboratorio el que establece en cada caso la frecuencia de realización del control
de calidad de pureza y viabilidad para las cepas de reserva almacenadas.
En caso de no ostentar las características establecidas se ejecuta la "acciones
correctivas" que se establecen en el procedimiento.
Registro de Control de calidad de pureza y viabilidad de las cepas:
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Fecha del control.
Identificación de la cepa. Género y especie del microorganismo. TIPO y Nº de
colección.
Tipo de cepa (Cepa de referencia, reserva o trabajo).
Pruebas a realizar (depende del microorganismo):
1. Coloración de Gram
2. Características de las colonias en medios selectivos
3. Pruebas bioquímicas y serológicas.
IDENTIFICACION
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Obtener un cultivo puro
Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración Gram.
Se determina así la forma y el Gram del microorganismo en estudio. También
es importante determinar la agrupación y la presencia de esporas y otras
características morfológicas de interés.
Determinar las características nutricionales (en general se desprenden de los
métodos empleados en el aislamiento y cultivo anteriores); fotoautótrofos,
fotoheterótrofos, quimioautótrofos, quimioheterótrofos.
Realización de pruebas primarias que son:

 Tinción Gram,
 morfología,
 catalasa, oxidasa,
 OF,
 fermentación de glucosa,
 esporas,
 crecimiento en aerobiosis anaerobiosis
 movilidad.
Realización de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie.
Estas dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de
pigmentos, producción de indol a partir de triptofano, producción de
coagulasa, de fenilalanina deaminasa, etc.)
PRUEBAS:
Entre las principales pruebas bioquímicas que se aconseja realizar están: catalasa,
oxidasa, indol, tinción Gram, etc.
Para la caracterización existen varios métodos entre ellos la biotipificación, que
consiste en la determinación de las actividades metabólicas o bioquímicas de los
microorganismos frente a una variedad de sustratos, fermentación de azúcares,
producción de enzimas, carácter homo o heterofermentativo.
El estudio de las características fisiológicas, crecimiento a diferentes temperaturas,
pHs, concentraciones a diferentes compuestos, etc. La serotipificación estudia las
propiedades antígenas de las cepas, siendo otro método eficaz para la caracterización
de cepas.
También existe la determinación de género y especie, métodos fisicoquímicos que
tienen como objetivo el estudio de determinados componentes químico celulares,
como los lípidos, azúcares o proteínas.
Entre los métodos moleculares tenemos el análisis de la secuencia de bases de los
ácidos nucleicos, es un marcador genético que puede ser utilizado como diferenciador
de especies y cepas, así como organizaciones que brindan cepas certificadas y
estándares para su control.
BIBLIOGRAFIA:
www.mailxmail.com/.../cepas-coleccion-referencia
ruidera.uclm.es. CARACTERIZACIÓN TECNOLOGÍA DE CEPAS; 7: Controles de Cepas
www.mailxmail.com/cepas-colección-referencia; Cepas de colección de referencia