GOT / AST UV Cinética 340 nm 1768

GOT / AST U.V. Cinética

Código
Presentación
05861
1x 30ml
(25+5 ml)
Reactivo Liquido para la determinación enzimática/cinetica
Transaminasa Glutámico Oxaloacética (GOT) o Aspartato Amino
Transferasa en Suero o Plasma.
PROCEDIMIENTO
Llevar el reactivo y la muestra a la temperatura a que se realizará el
ensayo. Las pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos
para no contaminar el reactivo.
PRINCIPIO
La AST cataliza específicamente la transferencia de grupos amino del
ácido aspártico al cetoglutarato, con formación de glutamato y
oxalacetato.
El oxalacetato es reducido a malato por acción de la malato
deshidrogenasa (MDH), mientras que la coenzima NADH es oxidada a
NAD.
Longitud de onda:
Paso de Luz:
Temperatura:
Medición:
La reducción de la absorbancia a 340 o 365 nm, consecuente con la
oxidación de la NADH, es monitorizada fotométricamente, siendo
directamente proporcional a la actividad de la AST en la muestra.
340nm (340 – 365 nm)
1 cm
37°C
Contra agua (Disminución Absorbancia)
Pipetear en cubetas
L-Aspartato + α-cetoglutarato
+
Oxalacetato + NADH +H
AST
MDH
Oxalacetato + L-glutamato
Reactivo de Trabajo
+
L-Malato + NAD +H2O
1000 µl
Incube el reactivo de trabajo por 2 minutos a 37°C
CONTENIDOS
Muestra
BUFFER
Tampón Tris 80 mmol/L, pH 7.8
L-Aspartato 300 mmol/l
MDH ≥750 U/L
LDH ≥1125 U/L
Azida sódica 30 mmol/L
100 µl
Mezclar, esperar 1 minuto. Leer la absorbancia A1 y al mismo tiempo
activar el cronometro. Leer nuevamente la absorbancia exactamente
después de 2 minutos (A2).
Cálculos
SUSTRATO p-NPP
NADH 900 µmol/L
Alfacetoglutarato 60 mmol/L
Azida sódica 30 mmol/L.
∆ Absorbancia / minuto =
A2 - A1
2
GOT / AST (U/L) = ∆ Absorbancia / minuto x Factor
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
•
Conservado entre 2°C y 8°C y protegido de la luz, estable hasta la
fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
•
Los reactivos contienen menos del 0.1% de azida sódica. La azida
sódica puede reaccionar con tuberías de cobre y plomo formando
compuestos explosivos. Las regulaciones locales para el desecho
de compuestos peligrosos deben ser respetadas, descartar con
abundante agua.
Factor 37°C
340 nm
1768
Notas:
•
Si la absorbancia inicial A1, es igual o menor que 0.800 es un
indicativo de que la muestra tiene actividad elevada de la AST. En
este caso diluir la muestra y repetir la medición.
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS
•
Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros capaz de medir
absorbancia a 340 nm con cubeta termostatizada (25°C, 30°C o
37°C)
•
Pipetas automáticas.
•
Cronometro y/o timer.
VALORES DE REFERENCIA:
Estos valores deben ser usados únicamente de forma orientativa, se
recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia
en la población atendida.
Valores de referencia habituales a 37oC:
MUESTRAS
La muestra a utilizar debe ser suero no hemolizado o plasma recogido con
EDTA.
Hombres (U/L):
Mujeres (U/L):
14 – 50
13 – 49
La actividad enzimática en la muestra es estable por 4 días conservada
en refrigerador (2-8°C) y 14 días conservada en con gelador (-10°C).
Conversión: U.Convencionales (U/L) x 16.7 = U. SI (µkat/L)
PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO
Mezclar en la proporción de 5 (cinco) volúmenes de R1 BUFFER y 1
(un) volumen de R2 SUBSTRATO. (Ejemplo: 2.5 ml R1 Buffer con 0.5 ml
R2 Substrato).
CONTROL DE CALIDAD
Pueden ser empleados todos los sueros con valores de GOT/AST
determinados por este método. Nosotros recomendamos el uso de
nuestro suero de origen animal IHR Diagnóstica para verificar la
funcionalidad del procedimiento de medida.
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de control de
calidad interno, así como procedimientos de corrección en el caso de que
los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.
o
El reactivo de trabajo es estable 5 días entre 15-25 C y 14
días entre 2-8oC, cuando no haya contaminación química o
bacteriana.
No usar el reactivo
de trabajo cuando la
absorbancia medida contra agua destilada a 340 nm, sea
mayor que 0.800 o cuando este turbio o con señales de
contaminación
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GOT / AST U.V. Cinética

Reactivo Liquido para la determinación enzimática/cinetica
Transaminasa Glutámico Oxaloacética (GOT) o Aspartato Amino
Transferasa en Suero o Plasma.
Código
Presentación
05861
1x 30ml
(25+5 ml)
CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO
LINEARIDAD
El resultado de la medición es lineal desde 1.0 U/L hasta 500 U/L. Para
valores mayores, diluir la muestra con Solución Salina (0.85%), realizar
nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución.
EXACTITUD
En un estudio comparativo entre este método y un método similar, se
halló un coeficiente de correlación igual a 0.999 y una ecuación de
y=0.98x+1.6 (n=125, Rango 15-659 IU/L) donde el error sistemático total
fue igual a 1.6 U/L.
REPETITIVIDAD
N
10
10
MEDIA
42
408
DE
1.2
2.6
CV%
2.9
0.6
REPRODUCIBILIDAD
N
Muestra 1
10
Muestra 3
10
MEDIA
43
411
DE
1.3
4.4
CV%
3.0
1.1
Muestra 1
Muestra 3
LIMITE DE DETECCION
El limite de detección fotométrica hallado fue 1.7 U/L GOT/AST con un
∆Abs/min de 0.001
INTERFERENCIAS
Valores de bilirrubina de hasta 18 mg/dL, hemoglobina de 300 mg/dL no
producen interferencias significativas.
Pacientes con deficiencia severa de vitamina B6 puede tener una
disminución en la recuperación de GOT/AST, debido a la falta de
pyridoxal phosphate5.
Muestras fuertemente lipémicas e ictéricas se recomienda hacer una
dilución 1:2 con solución salina fisiológica para evitar el consumo
exagerado del sustrato, multiplicar el resultado final por 2.
BIBLIOGRAFIA
1. Guder WG, Narayana S, Wissar H Zawta B: Samples from the Patients to the Laboratory.
Darmstadt GIT Verlaag, 1996: 78.
2. IFCC Methods for Alanine Aminotransferase: J. Clin. Biochem. 1986; 24:481-495.
3. Inmetro-Buenas Prácticas de laboratorio clínico y lista de verificación para validación.
Qualitymark eds. Río de Janeiro. 1997.
4. Burtis CA, Ashwood ER: Textbookof Clinical Chemistry. 2a ed, Philadelphia: WB Saunders,
1986: 788-7
5. Kaplan, L.A., Pesce, A.J., Clinical Chemistry , St Louis, C.V. Mosby, P.911-912 (1989).
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