millipore (uk) ltd

BIOSCOT®
Anti-Fyb
Línea celular: SpA264LBg1
Código de producto: NV
IgM monoclonal humana
Reactivo para determinación de grupos sanguíneos
Para técnicas en tubo, en gel y en columna
4.
5.
IVD
DIV
6.
0123
USO PREVISTO
El Anti-Fyb BIOSCOT es un reactivo para determinación de grupos
sanguíneos consistente en IgM monoclonal humana (línea celular
SpA264LBg1) que detectará el antígeno Fyb cuando se ensaye de
acuerdo con las técnicas en tubo, en gel y en columna. El reactivo
está diseñado para ser utilizado por operarios formados en técnicas
serológicas.
INTRODUCCIÓN
Los anticuerpos anti-Fya fueron descubiertos por Cutbush et al. en
1950. Su pareja antitética Anti-Fyb fue identificada un año después por
Ikin et al. Los genes Fya y Fyb producen 3 fenotipos: Fy(a+b-),
Fy(a+b+) y Fy(a-b+). Un tercer gen Fy da lugar a un cuarto fenotipo, el
Fy(a-b-). Los anticuerpos del sistema Duffy pueden producir
reacciones transfusionales retardadas y la enfermedad hemolítica del
recién nacido.
Las frecuencias de los fenotipos Duffy varían mucho en las diferentes
poblaciones.
Frecuencia
Negro
El reactivo es solo para diagnóstico in vitro realizado por
profesionales.
El material bovino se obtiene de fuentes aprobadas por la USDA
o de fuentes para las que se dispone de información sobre los
animales de origen. Los animales donantes han sido
inspeccionados y se ha certificado que están sanos; se
considera además que tienen bajo riesgo de TSE (encefalopatía
espongiforme transmisible).
El producto debe desecharse o bien mediante inmersión durante
la noche en desinfectantes a las concentraciones apropiadas o
bien mediante tratamiento en autoclave.
CONSEJO A LOS USUARIOS
Se recomienda el análisis en paralelo de un control positivo y uno
negativo con cada lote de análisis. Los análisis deben considerarse no
válidos si los controles no muestran las reacciones esperadas.
No es necesario utilizar un control del reactivo en paralelo con todos
los análisis en los que se utiliza este reactivo. Solo se recomienda
utilizar un control para el reactivo, como el Control monoclonal
BIOSCOT (código del producto: TT), cuando se esté determinando el
grupo sanguíneo de eritrocitos procedentes de pacientes con
autoanticuerpos o anomalías proteicas conocidos. Debe analizarse en
paralelo con el reactivo.
El reactivo se ha caracterizado mediante los procedimientos
recomendados en estas instrucciones de uso; el usuario deberá
determinar si es adecuado para otras técnicas.
En caso de cambios en el rendimiento analítico del dispositivo o si el
envase está dañado, póngase en contacto con el departamento de
Aseguramiento de calidad de Millipore (UK) Ltd.
ALMACENAMIENTO
Fenotipo
Blanco
Asiático
Fy(a+b-)
17 %
9%
91 %
Fy(a+b+)
49 %
1%
9%
Fy(a-b+)
34 %
22 %
<1%
Fy(a-b-)
0%
68 %
0%
Conserve el producto abierto /no abierto a 2-8 °C hasta la fecha de
caducidad detallada en la etiqueta.
Si el producto no se conserva a la temperatura correcta, por ejemplo,
si se guarda a temperaturas más elevadas o si se somete a ciclos
repetidos de congelación y descongelación, puede perderse
rápidamente la actividad del reactivo.
PRINCIPIO DEL REACTIVO
OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS
Cuando se utiliza según la técnica recomendada, este reactivo
provocará la aglutinación (amontonamiento) de eritrocitos portadores
del antígeno específico (prueba positiva). La falta de aglutinación de
los eritrocitos demuestra la ausencia del antígeno específico (prueba
negativa). Este reactivo se ha optimizado para que pueda utilizarse
mediante la técnica recomendada sin ulterior dilución ni añadidos.
No se necesita preparación especial del paciente antes de la
obtención de la muestra. La sangre debe obtenerse mediante una
técnica de flebotomía aprobada. Las muestras pueden recogerse en
EDTA o ACD-A. La muestra debe analizarse cuanto antes después de
su recogida. Si va a retrasarse el análisis, guarde la muestra a 2-8 °C.
No deben analizarse con este reactivo las muestras que exhiban una
hemólisis macroscópica o contaminación microbiana. Si las muestras
no se conservan a la temperatura correcta, pueden producirse
resultados falsos positivos o falsos negativos.
Este producto se suministra filtrado a 0,22 µm.
MATERIALES
El Anti-Fyb con código de producto NV contiene anticuerpos
procedentes de la línea celular SpA264LBg1. El reactivo consiste en
anticuerpos monoclonales IgM humanos en una disolución tampón.
Este reactivo contiene azida sódica al 0,1% (p/v) y material bovino.
Cada vial (2 ml) contiene material suficiente para aproximadamente
40-80 análisis.
PRECAUCIONES
1.
2.
3.
Todos los productos sanguíneos deben tratarse como
potencialmente infecciosos. El donante humano o la línea
celular utilizados para producir el reactivo Anti-Fyb se han
analizado y se ha demostrado que son negativos para el VIH
1+2, la hepatitis B y la hepatitis C. Ningún análisis conocido
puede garantizar que un producto derivado de la sangre
humana esté exento de agentes infecciosos. Debe tenerse
cuidado en el uso y la eliminación de los recipientes y su
contenido.
Este reactivo contiene azida sódica al 0,1% (p/v). La azida
sódica puede ser tóxica si se ingiere y puede reaccionar con el
plomo o el cobre de las tuberías para formar sales muy
explosivas. Al desecharla, aclárela con abundante cantidad de
agua.
El producto debe ser transparente. La turbidez puede indicar
contaminación bacteriana. Este reactivo no debe utilizarse si se
observan un precipitado, un gel de fibrina o partículas.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
Técnica en tubo:
• Tubo de ensayo
• Disolución salina isotónica
• Centrífuga (1500 rpm)
Técnica en gel Bio-Rad:
• Tarjeta ID-Card de Bio-Rad
“NaCl, ensayo enzimático y
aglutininas frías”
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS)
o Diluyente-ID-2
• Micropipetas con capacidad
de dispensación de 10, 25 y
50 μl
• Incubador a 37 °C
• Temporizador
• Centrífuga idónea para las
Tarjetas ID-Card de Bio-Rad
• Lector (opcional)
Técnica en gel de Grifols:
• Tarjeta DG Gel Neutral
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS)
o disolución DG Gel
•
•
•
•
Micropipetas con capacidad
de dispensación de 10, 25 y
50 μl
Temporizador
Centrífuga incubador a 37 °C
(idónea para las tarjetas Gel
de Grifols)
Lector (opcional)
Técnica de columna BioVue:
• Casetes Ortho BioVue®
System Neutral
• Disolución salina isotónica,
tampón fosfato salino (PBS)
o diluyente de eritrocitos
Ortho® al 0,8%
• Micropipetas con capacidad
de dispensación de 10, 40 y
50 μl
• Temporizador
• Centrífuga idónea para los
casetes Ortho BioVue
• Lector (opcional)
TÉCNICAS RECOMENDADAS
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
1.
Técnica en tubo
1.1
Preparar una suspensión al 3-5% de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica o PBS.
Añadir una gota (50 μl) de reactivo Anti-Fyb a un tubo de ensayo
adecuadamente etiquetado.
Añadir una gota (50 μl) de la suspensión de eritrocitos que van a
analizarse.
Mezclar y centrifugar a 1500 g durante 60 segundos.
Agitar suavemente el tubo para soltar los eritrocitos, y examinar
a simple vista para ver si hay aglutinación.
El reactivo NV monoclonal Anti-Fyb para determinación de grupos
sanguíneos (línea celular SpA264LBg1) se ha ensayado mediante las
técnicas en tubo y Gel Bio-Rad con muestras de donante, clínicas y
neonatales, y mediante los métodos Gel de Grifos y columna de
BioVue usando muestras de donante. La población de las muestras
representaba todos los fenotipos principales. Para cada técnica, se
muestran a continuación el número total de pruebas (n), la sensibilidad
y la especificidad.
1.2
1.3
1.4
1.5
2.
Técnica en gel Bio-Rad
2.1
Preparar una suspensión al 3-5% de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica o PBS o una
suspensión al 0,8% en Diluyente-ID-2.
Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos al 3-5% o 50 μl de la
suspensión al 0,8% al microtubo apropiado de la tarjeta ID-Card
de Bio-Rad.
Añadir 25 μl del reactivo anti-Fyb al microtubo apropiado.
Mezclar suavemente e incubar a 37 °C durante 15 minutos.
Centrifugar la tarjeta ID-Card a la velocidad y el tiempo
apropiados de acuerdo con las instrucciones del fabricante de la
tarjeta.
Leer a simple vista o con un lector. El uso de un lector debe ser
validado por el usuario.
2.2
2.3
2.4
2.5
2.6
3
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
Técnica en gel de Grifols
Preparar una suspensión al 3-5% de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica o PBS o una
suspensión al 1% en disolución DG Gel.
Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos al 3-5% o 50 μl de la
suspensión al 1% al microtubo apropiado de la tarjeta DG Gel
Neutral de Grifols.
Añadir 25 μl del reactivo anti-Fyb al microtubo apropiado.
Mezclar suavemente e incubar a 37 °C durante 15 minutos.
Centrifugar la tarjeta Gel a la velocidad y el tiempo apropiados
de acuerdo con las instrucciones del fabricante de la tarjeta.
Leer a simple vista o con un lector. El uso de un lector debe ser
validado por el usuario.
4
Técnica de columna BioVue
4.1
Preparar una suspensión al 3-5% de los eritrocitos que van a
analizarse en disolución salina isotónica o PBS o una
suspensión al 0,8% en diluyente de eritrocitos Ortho al 0,8%.
Añadir 10 μl de la suspensión de eritrocitos al 3-5% o 50 μl de la
suspensión al 0,8% a la cámara de reacción del casete Ortho
BioVue apropiado.
Añadir 40 μl del reactivo anti-Fyb al microtubo apropiado.
Mezclar suavemente e incubar a 37 °C durante 15 minutos.
Centrifugar el casete a la velocidad y el tiempo apropiados de
acuerdo con las instrucciones del fabricante del casete.
Leer a simple vista o con un lector. El uso de un lector debe ser
validado por el usuario.
4.2
4.3
4.4
4.5
4.6
Anti-Fyb Código de producto NV
TÉCNICA
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
n
%
n
%
Tubo
964
99,9
207
100
Gel Bio-Rad
964
98,3
207
100
Gel Grifols
96
100
54
100
Columna
BioVue
96
100
54
100
Definiciones procedentes de las especificaciones técnicas
comunes (CTS):
Sensibilidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé un
resultado positivo en presencia del marcador objetivo.
Especificidad diagnóstica: La probabilidad de que el dispositivo dé
un resultado negativo en ausencia del marcador objetivo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Race, R.R. and Sanger, R. Blood Groups in Man, 6th ed. Oxford:
Blackwell Scientific Publications, 1975.
Daniels, G. Human Blood Groups, Oxford: Blackwell Science Ltd.;
1995.
Issitt, P.D. and Anstee, D.J. Applied Group Serology 4th ed, Miami
(FL): Montgomery Scientific Publications, 1998.
Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United
Kingdom, 5th Edition. The Stationary Office, 2001.
Beattie, K.M. (1988) Blood Group Systems: Duffy, Kidd and
Lutheran Pierce S.R. and Macpherson C.R. eds.: p1-25
Chown B., Lewis M. and Kaita H. (1965): the Duffy blood system
in Caucasians: evidence of new allele. Am. J. Hum. Genet. 17 :
384-389
Meny GM (2010), The Duffy blood group system: a review,
Immunohematology 26(2): 51-56.
Tournamille C., Le Van Kim C., Gane P., Le Pennec P.Y.,
Roubinet F., Babinet J., Cartron J.P., Colin Y. (1998), Arg89Cys
Substitution Results in Very Low Membrane Expression of the
Duffy Antigen/Receptor for Chemokines in Fyx Individuals,
Blood 92: 2147-2156
LIMITACIONES
Es posible que no se detecten las células que muestran una expresión
reducida del antígeno Fyb, como las de personas con el gen Fyx, en
especial cuando se utilizan las técnicas en gel y en columna.
Los eritrocitos que sean positivos en la prueba de antiglobulina
directa (DAT) pueden producir resultados falsos positivos. Se
recomienda utilizar el reactivo Control monoclonal BIOSCOT (código
de producto: TT) para detectar estos posibles resultados falsos
positivos.
No utilizar con eritrocitos tratados enzimáticamente ya que los
antígenos del sistema Duffy pueden destruirse al quedar expuestos a
enzimas proteolíticas.
Pueden producirse resultados falsos positivos o falsos negativos si
hay contaminación de los materiales de análisis o alguna modificación
de las técnicas recomendadas.
Millipore (UK) Ltd
Fleming Road
Kirkton Campus
Livingston, EH54 7BN
Reino Unido
Tfno:
Fax:
+44 1506 404000
+44 1506 404001
PI222
2013-03