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INTERACCIÓN DEL TRANSPORTADOR DE GLUTAMATO/ASPARTATO (GLAST)
CON LA PROTEINA ACIDICA FIBRILAR DE GLIA (GFAP)
Magdiel Sosa López, Escuela de Biología, Universidad Autónoma de Sinaloa,
[email protected]. Asesor Dr. Arturo Ortega Soto, Centro de Investigación y de
Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional. [email protected].
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El glutamato (Glu) es el principal neurotransmisor excitador de los vertebrados. El Glu se
une a receptores que de acuerdo a los mecanismos de transducción de señales se
dividen en dos tipos: receptores ionotrópicos (iGluR): (NMDA, AMPA, KA) y los receptores
metabotrópicos (mGluR): (Grupo I, Grupo II y Grupo II). Los iGluR son canales abiertos
por un ligando. En nuestro trabajo evaluaremos la interacción de iGluR sensible a NMDA.
Los transportadores de Glu utilizan el gradiente electroquímico para poder introducir
este aminoácido al interior celular, a la fecha se han clonado 5 subtipos (EAAT1-EAAT5),
el subtipo EAAT-1 (transportador de aminoácidos excitadores Glutamato/Aspartato o
GLAST) se expresa en abundancia en cerebelo y en células de Müller de retina y el
subtipo EAAT-5 es exclusivo de células de Müller de retina. Las células de Müller son un
buen modelo de estudio, su función es de soporte, sintetizan glucógeno y aportan lactato
a otras células nerviosas. GFAP (proteína acida glial fibrilar) es un miembro de la familia
de filamentos intermedios, forman una red que proporciona soporte a las células. Se sabe
que la modulación de Ezrina se debe a GFAP y la interacción de ambas proteínas
conlleva la regulación de GLAST. Por eso es de interés estudiar la interacción de
GLAST/GFAP, que regula al transportador.
METODOLOGÍA
Se trabajó con células de Müller a partir de una línea celular MI0-M1. Dichas células se
suprimieron con solución amortiguadora por 1 h, posteriormente se adiciona el estímulo
de NMDA + Gly a distintos tiempos (0, 5, 15, 30, 60 y 120 min), y se cosecharon las
células con la solución PBS con inhibidores de proteasas más PMSF. Las células se
centrifugaron, quedándonos con la pastilla y se procedió a la lisis celular, se realizó otra
centrifugación, recuperando el sobrenadante y se cuantificaron las proteínas por el
método de Bradford. Se realizó la técnica de co-inmunopreciptación, que consiste en
evaluar la interacción de las proteínas, en nuestro trabajo se co-inmunoprecipitó con el
anticuerpo anti-GLAST y se reveló por el método inmunodeteccion de fase sólida con el
anticuerpoanti-GFAP. Como resultado se observó que existe interacción de GLAST/GFAP
mediada por NMDA.
CONCLUSIONES.
1. El estímulo con NMDA favorece la interacción de GLAST con GFAP.
2. La interacción se observa a los 5 y 15 min, y se perdió interacción después de 1 hora
de estimulación.