Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. Facultad De Ciencias Químicas. Departamento De Farmacia.

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla.
Facultad De Ciencias Químicas.
Departamento De Farmacia.
Instituto De Fisiología
Laboratorio De Neuropsiquiatría
Expresión Del Transportador De Glutamato Glast En Anoxia Al Nacimiento.
Para obtener el grado de:
Lic. En Químico Farmacobiólogo.
Presenta:
Polanco Robles Kesia, .
Asesor:
Gamboa Esteves, Citlalli; Flores Álvarez, Gonzalo.
Puebla Pué. Enero 2011.
ÍNDICE
ABREVIATURAS 4
INTRODUCCIÓN 5
ANTECEDENTES 7
Transmisión Glutamatérgica 7
Concentraciones de glutamato en el sistema nervioso central 8
Transportadores de Glutamato 8
Corteza cerebelar 8
JUSTIFICACIÓN 13
HIPÓTESIS 13
OBJETIVOS 14
Objetivo General 14
Objetivo Específico 14
DIAGRAMA DE TRABAJO 15
MATERIAL Y MÉTODOS 16
Sujetos de Experimentación 16
Extracción de cerebelo y Obtención de Proteínas 16
Inmunodetección en fase solida (Western blot) 17
Extracción de ARN a partir de TRIZOL 18
Transcripción Inversa 20
Reacción de la Polimerasa en cadena (PCR) 20
RESULTADOS 22
Inmunodetección en fase solida de la proteína de GLAST 22
Autorradiografía 23
Análisis densitométrico de Proteína GLAST 23
RT- PCR del ARNm de GLAST 27
Análisis de ARNm de GLAST 28
DISCUSIÓN 33
CONCLUSIÓN 35
PERSPECTIVAS 36
BIBLIOGRAFÍA 37
ABREVIATURAS
ADN Ácido Desoxirribonucleico
AMPA Ácido-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazol propiónico
ARNm Acido Ribonucleico mensajero
C Control
Ces Cesárea
CesA Cesárea más Anoxia
DEPC Dietil pirocarbonato
dNTPs Desoxirinucleótidos trifosfato
dp Días Posnatales
DTT Ditiotreitol
EAAT Aminoácido Transportador Excitador
GADPH Gliceraldehído- 3- fosfato deshidrogenasa
GLAST Transportador de Glutamato/ Aspartato
GLT-1 Transportador de Glutamato
Glu Glutamato
HCl Ácido clorhídrico
MgCl2 Cloruro de Magnesio
MoMVL Virus de leucemia murina Moloney
NMDA Acido N-metil-D-aspártico
PAGE Electroforesis en gel de poliacrilamida
PBS Tampón Fosfato Salino
PCR Reacción en cadena de la polimerasa
RNAsas Ribonucleasas
RNA sin Inhibidor de Ribonucleasas
RT-PCR Retrotranscripción seguida de reacción en cadena de la polimerasa
SDS Dodecilsulfato sodico
SLCL1 Familia de transportadores de solutos
TEMED Tetrametil-etilendiamina
TRIS Hidroximetil amino metano
NOTA: Algunas abreviaciones por sus siglas en inglés
INTRODUCCIÓN
El transportador de glutamato/aspartato GLAST (glutamate/aspartate transporter) es una
proteína transmembranal que se expresa principalmente en las células glías radiales de
Bergmann de la corteza del cerebelo. La actividad principal de este y otros
transportadores es remover el exceso del neurotransmisor glutamato (Glu) durante la
sinapsis, manteniendo de esta manera las concentraciones de este aminoácido por
debajo de niveles neurotóxicos. Las investigaciones más recientes sobre la transmisión
glutamatérgica sugieren que la disfunción de los transportadores está implicada en el
desarrollo de algunos padecimientos del sistema nerviosos, tales como: esquizofrenia,
ataxia cerebelosa, esclerosis lateral amiotrófica, isquemia cerebral, enfermedad de
Alzheimer, Parkinson, Corea de Huntigton, entre otras.
Con respecto a la esquizofrenia, se sabe que la falta de oxígeno (anoxia) durante las
etapas perinatales puede considerarse como un factor de riesgo para desarrollar este
padecimiento en edad posterior. Aunque la información hasta el momento es limitada, los
estudios más recientes sugieren que GLAST probablemente está implicado en la
etiopatología de la enfermedad, por ejemplo, se han reportado mutaciones en el gen que
codifica para este transportador en pacientes con esquizofrenia; en estudios con ratones
transgénicos que carecen del transportador se han observado conductas que pueden
asociarse a la esquizofrenia; se han encontrado deficiencias en la actividad del
transportador en el hipocampo y tálamo en modelos animales con lesión en las áreas
mencionadas y que están implicados en el padecimiento. Hasta el momento no existen
estudios que revelen lo que pasa con el transportador debido a la anoxia al nacimiento;
sin embargo, tomando en cuenta estos antecedentes, es probable que la función del
transportador GLAST se encuentre alterada debido a defectos a nivel de la expresión de
la proteína, a nivel de codificación de la misma, a nivel de traslocación hacia la
membrana, o bien a nivel transcripcional.