Guía Nº 6: Diseño de oligos a partir de secuencias nucleotídicas.
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Guía Nº6 Ingeniería Genética Guía Nº 6: Diseño de oligos a partir de secuencias nucleotídicas. Usted cuenta con la secuencia del gen p10 de AcMNPV (Fig.1) y debe: 1) Diseñar un par de primers que le permita amplificar el ORF del gen p10 de AcMNPV. Plantee como haría la reacción de PCR (reactivos y ciclado). 2) Diseñar un par de primers que le permita amplificar la región promotora del gen p10, para realizar posteriores estudios sobre su actividad, mediante su clonado en el plásmido pDsRed. Plantee como haría la reacción de PCR (reactivos y ciclado). 3) Diseñar el total de primers necesarios para mutagenizar el ORF, cambiando el aminoácido histidina por una glutamina. Plantee como haría las reacciones de PCR (reactivos y ciclado). 4) Diseñar un par de primers que le permitan realizar una PCR invertida para conocer regiones upstream y downstream a la secuencia de la figura 1. 5) En todos los casos anteriores mencionar esquemáticamente como haría el clonado de los productos de amplificación en el vector pZErO y en el pDsRed para el caso 2). Nota: Para todos los oligos introduzca sitios de restricción que faciliten el posterior clonado. . Fig 1: Secuencia del gen p10 de AcMNPV tcacttacaacaagggggactatgaaattatgcatttgaggatgccgggacctttaattcaacccaacac aatatattatagttaaataagaattattatcaaatcatttgtatattaattaaaatactatactgtaaat tacattttatttacaatcatgtcaaagcctaacgttttgacgcaaattttagacgccgttacggaaacta acacaaaggttgacagtgttcaaactcagttaaacgggctggaagaatcattccagcttttggacggttt gcccgctcaattgaccgatcttaacactaagatctcagaaattcaatccatattgaccggcgacattgtt ccggatcttccagactcactaaagcctaagctgaaaacccaagcttttgaactcgattcagacgctcgtc gtggtaaacgcagttccaagtaaatgaatcgtttttaaaataacaaatcaattgttttataatattcgta cgattctttgattatgtaat Tabla 1 : Tabla de codones. Ilustra los 64 tripletes posibles. 2ª base U C A G UUU Fenilal. UCU Serina UAU Tirosina UGU Cisteína UUC Fenilal. UCC Serina UAC Tirosina UGC Cisteína U UUA Leucina UCA Serina UAA Stop UGA Stop UUG Leucina UCG Serina UAG Stop UGGTriptofan. CUU Leucina CCU Prolina CAU Histidina CGU Arginina CUC Leucina CCC Prolina CAC Histidina CGC Arginina C CUA Leucina CCA Prolina CAA Glutamin CGA Arginina CUG Leucina CCG Prolina CAG Glutamin CGG Arginina 1ª base AUU Isoleuc. ACU Treon. AAU Asparra. AGU Serina AUC Isoleuc. ACC Treon AAC Asparra. AGC Serina A AUA Isoleuc. ACA Treon AAA Lisina AGA Arginina AUG Metion. ACG Treon AAG Lisina AGG Arginina GUU Valina GCU Alanina GAU Aspartato GGU Glicina GUC Valina GCC Alanina GAC Aspartato GGC Glicina G GUA Valina GCA Alanina GAA Glutamat GGA Glicina GUG Valina GCG Alanina GAG Glutamat GGG Glicina 1
