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Bioquímica Experimental
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Bioquímica Experimental
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PREFACIO
El campo de las ciencias biológicas se encuentra en continua expansión y
muestra de ello es que cada día sus investigaciones adquieren un mayor
significado e influencia en la práctica clínica en la Odontología.
Hace cien años, las moléculas se encontraban fuera del alcance de los
biólogos y existía un gran debate sobre la interpretación de la teoría atómica y
comenzaban, de igual manera, los estudios sobre la radiactividad. Sin
embargo, la biología se encontraba en movimiento. Por el año de 1858, con el
apoyo de la teoría celular se establecían los cimientos de la patología. Y en los
años siguientes se produjo toda una revolución mediante el conocimiento y
comprensión de eventos como la inflamación e inmunidad. En ese momento las
ciencias odontológicas, lideradas por Miller, que trabajaba en la puerta contigua
de Robert Koch, desarrolló las teorías sobre el origen de la caries dental
Los siguientes años se vieron marcados por el estudio y la caracterización de la
función de organelos, genes, elementos regulatorios y citocinas, receptores y
ligandos. Con lo que surgió el concepto “Biología molecular” en donde se
relacionan las leyes de la biofísica con la biología estructural y bioquímica. Su
punto máximo se alcanza con la elucidación de la estructura del ácido
desoxirribonucleico y este siglo inicia con la publicación de la secuencia de este
material genético.
Hasta el momento y con el apoyo de las técnicas bioquímicas se han
caracterizado los factores de virulencia que están involucrados, en el desarrollo
de la enfermedad periodontal, la incidencia de esta enfermedad es tan grande
que ha divido a la población en tres grupos: uno pequeño compuesto por
aproximadamente el 8% que muestra un rápido progreso de periodontitis, un
grupo grande compuesto por el 80% que muestra periodontitis moderadamente
progresiva y otro grupo pequeño que comprende el 10% que presentará solo
problemas de gingivitis. Por otra parte, las herramientas que proporciona la
técnica bioquímica, han permitido que se pueda estudiar la evolución de la
enfermedad periodontal e identificar cuales son los mecanismos que se
encienden y apagan durante su desarrollo.
Por otra parte y quizá en corto plazo las ciencias básicas sean un soporte
importante en el diagnóstico y tratamiento de las enfermedades orales, por este
motivo la facultad se ha abocado a enseñar a los jóvenes que se inician en el
ámbito de la Odontología, las metodologías más comúnmente empleadas en
un laboratorio de investigación Bioquímica a través del Manual de Prácticas de
Bioquímica.
En este libro “Bioquímica Experimental” los profesores nos hemos propuesto
facilitar el aprendizaje experimental mostrando la utilidad del método científico,
la elaboración de hipótesis y las búsquedas bibliográficas que permitan el
desarrollo de discusiones. Anexamos así mismo los pasos a seguir para el
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análisis y cálculo de los datos obtenidos en cada protocolo. Incluimos también
una sección de cuestionario que permita al usuario evaluar el conocimiento
adquirido y finalmente colocamos el material didáctico se utilizará cada uno de
los protocolos experimentales.
Gloria Gutiérrez Venegas.
Editor.
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Bioquímica Experimental
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Contenido
Capítulo 1
Protocolos de Investigación y Método Científico.
Pedro López
Antecedentes_____________________________________________
Método Científico __________________________________________
Diseños de Investigación ____________________________________
Protocolo de Investigación____________________________________
Ejemplo de Protocolo de Investigación __________________________
Bibliografía________________________________________________
Cuestionario_______________________________________________
Capítulo 2
Presentación de Equipo
Miguel Pérez Garzón
Antecedentes______________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Objetivo __________________________________________________
Características de Equipos de Medición _________________________
Pipetas __________________________________________________
Micropipetas_______________________________________________
Probeta __________________________________________________
Centrifugadora ____________________________________________
Espectroscopio ____________________________________________
Balanzas _________________________________________________
Jarras de anaerobiosis ______________________________________
Potenciómetro _____________________________________________
Normas de Seguridad _______________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Capítulo 3
Titulación Ácido – Base.
Santa Rita Arroyo Cruz
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 4
Titulación y Cromatografía de Aminoácidos.
Gloria Gutiérrez Venegas.
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía________________________________________________
Cuestionario_______________________________________________
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Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 5
Cuantificación de Proteínas.
Gloria Gutiérrez – Venegas, Perla Kawasaki – Cárdenas.
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 6
Cinética de la amilasa salival.
Carla Portillo Garcés
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 7
Velocidad de Recambio Salival.
Perla Kawasaki Cárdenas.
Antecedentes______________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 8
Electroforesis de Proteínas.
Héctor Aguilar González y Silvia Maldonado – Frías.
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo ________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material didáctico __________________________________________
Capítulo 9
Aislamiento de ácidos nucleicos
Luz del Carmen González.
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
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Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 10
Mapas de restricción de un plásmido
Silvia Maldonado – Frías.
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo ________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 11
Unidades Formadoras de colonias de Streptoccus mutans y
Lactobacillus
Gloria Gutiérrez Venegas
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
Capítulo 12
Unidades Formadoras de colonias de Streptoccus mutans y
Lactobacillus 2da Parte.
Bioquímica para la Identificación de Lactobacilos.
Gloria Gutiérrez Venegas.
Antecedentes _____________________________________________
Protocolo _________________________________________________
Hipótesis _________________________________________________
Discusión ________________________________________________
Bibliografía _______________________________________________
Cuestionario ______________________________________________
Material Didáctico __________________________________________
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Bioquímica Experimental
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M en C Pedro López Reynoso
ANTECEDENTES
El conocimiento surge por la necesidad del hombre de comprender el mundo en que se
encuentra inmerso. El hombre aprendió de manera empírica a cultivar la tierra, a orientarse
observando las estrellas y a defenderse de sus enemigos. Basándose en sus experiencias,
utilizó el fuego; supo distinguir empíricamente los vegetales alimenticios medicinales y
venenosos. Los conocimientos se fueron reuniendo y tuvieron como base las experiencias
personales de cada individuo que formaba parte de las pequeñas comunidades humanas. A
tales conocimientos se le denomina “empíricos”. Dichos conocimientos se adquieren, en
general, en el transcurso de la vida, ya que empírico quiere decir “basada en al experiencia”.
El conocimiento científico por su parte es la posesión de explicaciones objetivas y confirmadas,
siempre verificables, de los procesos existentes en el universo. Se basa en una severa crítica
del procedimiento seguido para obtenerlo, así como de las fuentes utilizadas. Se caracteriza
por ser cierto o probable, constituido por una gran cantidad de conocimientos demostrados o
por demostrar; es metódico, sigue pasos lógicos y procedimientos técnicos en su adquisición;
es sistemático, es decir trata de conocimientos demostrables y es homogéneo, pues sus
objetos forman parte de una realidad que guarda entre sí características comunes.
INVESTIGACIÓN CIENTÍFICA
Una investigación científica empieza con un problema, el cual debe ser resoluble y enunciado
en una sola pregunta. Esta procede entonces a la formulación de una o varias hipótesis como
posibles soluciones al problema, la cual o las cuales se comprueban para determinar si son
falsas o verdaderas. Los resultados del estudio se resumen más tarde en forma de un reporte
formal, que no es más que un enunciado en forma concisa de lo que se encontró en la
investigación.
INVESTIGACIÓN BIOMÉDICA
El análisis de los problemas de salud implica la necesidad de identificar todos los factores
involucrados en ellos; para realizarlo deben incluirse todas las áreas de estudio en el ser
humano, como las socioeconómicas, culturales y psicológicas. Es por tanto prioritario dentro de
la investigación biomédica, el identificar y analizar los factores biológicos dentro del marco de
sus implicaciones sociales y psicológicas y de que manera estas condiciones determinan las
alteraciones biológicas.
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INVESTIGACIÓN CLÍNICA
Este tipo de investigación se enfoca esencialmente a contribuir al estudio y solución del
problema en los que el hombre –sano o enfermo- es el sujeto de investigación.
En el contexto en el cual dicha investigación es emprendida incluye:
-Estudios de procesos fisiológicos, bioquímicos, patológicos o de la respuesta a una
intervención específica en sujetos sanos o pacientes bajo tratamiento.
-Estudios prospectivos controlados de medidas diagnósticas, profilácticas o terapéuticas en
grupos de pacientes con el fin de demostrar una respuesta contra una variación biológica
individual.
INVESTIGACIÓN SOCIOMÉDICA
La investigación socio-médica es una actividad creativa y sistemática encaminada a
incrementar el acervo de conocimientos científicos y técnicos que contribuyen al estudio y
solución de problemas colectivos de salud; sean estos referentes al fomento y conservación de
la salud colectiva, a la prevención y la rehabilitación.
En la investigación socio-médica se incluyen estudios con enfoque colectivo sobre la nutrición,
inmunidad, resistencia, susceptibilidad y herencia; estudios sobre fenómenos de estructura y
dinámica demográfica y ecológica como condicionantes de la salud poblacional; estudios
acerca de agentes patógenos, biológicos, fisicoquímicos y psico-sociales que afectan a las
colectividades.
EL MÉTODO CIENTÍFICO
El método científico es todo un procedimiento formado por una secuencia lógica de actividades
que procura descubrir las características de los fenómenos, las relaciones internas entre sus
elementos y sus conexiones con otros fenómenos, mediante el raciocinio y la comprobación a
través de la demostración y la verificación.
El método científico parte de conocimientos previos para llevar conocimientos nuevos.
Si los conocimientos se refieren a entes abstractos, ideales, que solo existen en la mente
humana y se representan por signos, ejemplo los números y símbolos, estos conocimientos
son objetos de las ciencias formales, como la lógica y la matemática.
Si los conocimientos se refieren a sucesos, procesos y objetos que existen fuera de la mente
humana, serán objeto de las ciencias fácticas como por ejemplo la biología y la física.
Lógica
Formal
Matemática
Ciencia
Factural
Natural
Cultural
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Física, Química,
Biología y
Psicología
individual
Psicología social,
Sociología,
Economía y C.
Política
1. Clasificación de la ciencia según Mario Bunge (Tomado del libro “Naturaleza de
Conocimiento Científico”).
Existen diferencias entre diversos autores en referencia a los pasos o fases del método
científico, pero la mayoría coinciden en los siguientes pasos:
1.- Identificación del problema
Una investigación se lleva acabo porque hay algo que no se conoce. Este problema debe ser
planteado sin ambigüedad, en forma concisa y sucinta, de preferencia en una sola oración
interrogativa, que pueda ser contestada afirmativa o negativamente. Si la pregunta no puede
contestarse así, podríamos saber si la investigación debería llevarse acabo o no.
2.- Estudio de antecedentes
A fin de planear una investigación sobre la base de que el problema que nos disponemos
abordar no ha sido ya resuelto, es necesario revisar hasta la bibliografía más reciente.
De esta forma sabremos que efectivamente vamos a generar un conocimiento nuevo, y que no
se trata de una duda individual, sino de un eslabón ausenten la cadena de la ciencia.
3.- Formulación de hipótesis
El origen de la palabra es griego y significa poner abajo, someter, es decir, aceptar
provisionalmente una afirmación acerca de algún hecho o relación funcional.
4.- Verificación de la hipótesis
a) Observación. La persona que investiga guiándose de manera inicial, por la observación
“pasiva” de un fenómeno, debe realizar posteriormente diversas observaciones
“activas” con el fin de obtener los primeros datos que sustenten su reflexión y lleguen a
determinar las causas que influyen en su desarrollo. Estas observaciones pueden
hacerse mediante los órganos de los sentidos, pero a veces e necesario recurrir a
ciertos instrumentos, tales como microscopio, lupa, estetoscopio, etc., que permitan
apreciar mejor el fenómeno en estudio. Para que una observación sea válida debe
reunir tres condiciones fundamentales: ser completa, exacta, metódica.
b) Experimentación. Experimentar se define como un proceso en que el investigador trata
de mantener constantes todos los factores involucrados en el determinismo de un
fenómeno y observa los efectos producidos por la variación de alguno de los factores
participantes.
5.- Aceptación o rechazo de hipótesis.
De acuerdo con los resultados de la experimentación o la observación, la hipótesis es aceptada
o rechazada.
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6.-Nueva información.
La información generada de los resultados obtenidos para la aceptación o rechazo de la
hipótesis, es incorporada al almacenaje del conocimiento acerca del tema.
7.-Planteamiento de nuevos problemas.
En el transcurso en el que una hipótesis propuesta generada de algún problema en particular,
pueden surgir más preguntas que pueden resolverse dentro de una misma línea de
investigación.
DISEÑOS DE INVESTIGACIÓN
Se entiende por diseño la estructura y estrategia de una investigación, cuyo objetivo es dar
respuesta a ciertas preguntas. La estructura es el bosquejo, el esquema o modelo de operación
de las variables. La estrategia comprende la elección de los métodos con los cuales se reúnen
y analizan los datos.
El diseño nos dice que tipos de observaciones hemos de efectuar; sugiere la modalidad de
análisis estadístico que podría realizarse y por ultimo los posibles resultados.
Existen diversos criterios para clasificar un diseño de investigación, estos criterios pueden
agruparse de acuerdo a cuatro características fundamentales:
Por la actitud del investigador observacional y experimental
La investigación observacional se limita describir lo observado sin que exista la necesidad de
establecer una asociación o contraste entre las variables en el estudio. Este tipo de diseño se
estudia los eventos o fenómenos que habitualmente ocurren en la naturaleza sin que el
investigador manipule alguna variable.
El diseño experimental tiene como propósito básico mostrar las diferencias entre dos o más
situaciones a las que son sometidos varios elementos y su influencia en las características de
dichos elementos. El investigador puede someter, según su voluntad, a un mismo grupo de
sujetos a varias situaciones diferentes o someter a diferentes grupos a una sola situación
constante. Este tipo de diseño emplea, frecuentemente, animales de experimentación o
condiciones artificiales susceptibles de manejar a voluntad. En este diseño el investigador
maneja la variable independiente.
Por el momento de colección de los datos: retrospectivo y prospectivo
En los ensayos retrospectivos la investigación es ex posfacto, es decir, el evento o fenómeno a
estudiar ya ocurrió y la relación causa efecto ya está registrada después de haberse
presentado. El ejemplo más ilustrativo en este sentido es la observación de N.M Gregg en
1941, en la que dio a conocer que las madres de niños con catarata congénita presentaron el
antecedente de haber sufrido rubéola durante el primer trimestre de embarazo. La observación
fue valiosa porque sirvió para demostrar una base patogénica, es decir, que la rubéola durante
el periodo embrionario tiene efectos teratógenos.
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Los ensayos prospectivos, también denominados en perspectiva o proelectivos, se caracterizan
en que el evento o fenómeno por estudiar no ha ocurrido y se inicia con el presunto factor
causal y se adelanta en el tiempo hasta el efecto supuesto. Para seguir con el ejemplo anterior
se eligen mujeres embarazadas que padecen rubéola en diferentes etapas de la gestación y se
registra al termino del embarazo la incidencia de malformaciones congénitas en los recién
nacidos. En contraste con los ensayos retrospectivos, que parte del efecto para conocer la
causa, en los estudios prospectivos se escoge al agente etiológico y se observa el tiempo
necesario para registrar la ocurrencia o ausencia del efecto causado.
Por la cinética del estudio: transversales y longitudinales
Los diseños observacionales y experimentales de acuerdo a la cinética del estudio pueden ser
transversales o longitudinales. Los primeros son estudios que tratan de obtener mediciones u
observaciones del evento o fenómeno en un momento de su evolución. La muestra poblacional
en este tipo de estudios se denomina corte.
Los diseños longitudinales son los estudios planeados para recopilar datos en diversos
momentos del curso o evolución del evento o fenómeno en un mismo grupo de población a lo
cual se le denomina cohorte.
Por la proyección de la investigación: descriptivo y comparativo
Una vez concretado el plan de investigación clínica, los criterios en función de la proyección de
los resultados pueden dividirse en dos clases: descriptivo y comparativo. La investigación
observacional generalmente es descriptiva y la experimental siempre es comparativa y
analítica.
Cuadro 1. Criterios para clasificar las investigaciones
Observacional
Por la actitud del investigador
Terapéutico
Experimental
No terapéutico
Retrospectiva
Por el momento de la colección de datos
Prospectiva
Transversal
Por la cinética del estudio
Longitudinal
Descriptiva
Por el tipo de proyección de una investigación
Comparativa
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PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN
El protocolo de investigación es el documento mediante el cual el investigador específica lo que
se propone estudiar. Su propósito es comunicar de manera eficaz y organizada el problema por
estudiar, su importancia, justificación, la definición clara de los objetivos, el planteamiento de
hipótesis y, finalmente, el material clínico y la metodología, junto con las referencias utilizadas
para establecer el marco teórico.
Existen diversas razones para escribir un protocolo de investigación:
A) Todas las instituciones de enseñanza e investigación solicitan una propuesta formal del
estudio a fin de evaluarla tanto desde el punto de vista de la metodología científica,
como de la ética de investigación en humanos. (Tratado de Helsinki)
B) El protocolo de investigación permite establecer una correlación con respecto las
expectativas temporales en que se desarrolla la investigación, es decir, permite al
investigador tener un control del avance de su proyecto.
C) El protocolo permite establecer una correlación con respecto a las expectativas
temporales en que se desarrolla la investigación; es decir, permite al investigador tener
un control del avance de su proyecto.
D) Existen organismos que financian las investigaciones y solicitan que en el protocolo de
investigación esté contemplado de la manera más aproximada posible al costo real del
estudio.
Existen pequeñas variaciones en los puntos que debe llevar un protocolo de investigación de
acuerdo con diversos autores, pero la mayoría coinciden en los diversos puntos y orden:
TÍTULO
El título es la designación o nombre que recibe el protocolo. La redacción del título de un
protocolo de investigación debe reunir varias cualidades:
Describir directamente el objetivo del estudio, evitar términos confusos y abreviaturas, ser
breve conciso y preciso no mayor a 20 palabras; además de incluir las palabras clave que
permitan su ubicación y localización en los sistemas de informática.
AUTORES RESPONSABLES
Los nombres de los autores de la investigación se consignan en orden, de acuerdo con el
grado de responsabilidad y las tareas específicas realizadas, y el nivel técnico y administrativo
correspondiente.
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RESUMEN
Esta parte del texto constituye el primer contacto entre el investigador y el lector del protocolo
de investigación; en este se debe encontrar una versión muy breve del contenido del protocolo.
MARCO TEÓRICO
Esta parte del protocolo se dedica a exponer en forma clara, objetiva y ordenada el proposito
de la investigación planeada en comparación con otros estudios realizados en el mismo
terreno.
La revisión de las publicaciones relacionadas con el problema objeto del estudio tiene varias
finalidades:
a) Es indispensable enterarse de la información existente para auxiliar al investigador a enfocar
la atención en un problema en particular y responder a las preguntas que se ha planteado.
b) En muchas ocasiones la revisión de la literatura permite delinear el problema por el
investigador.
c) Para que la investigación sea útil, debe existir un conocimiento extenso. La investigación no
se construye en el vacío. Debe existir una base sólida de conocimiento.
d) Conocer lo que ya se sabe acerca de un problema brinda la oportunidad de formular una
buena justificación sobre la necesidad de investigar en un campo en particular.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La investigación se lleva acabo porque hay algo que no se conoce. Este problema debe ser
planteado sin ambigüedad, en forma concisa y sucinta, de preferencia en una sola oración
interrogativa, que pueda ser contestada afirmativa o negativamente.
JUSTIFICACIÓN
Justificar la realización de un proyecto de investigación significa que el estudio es congruente
entre la necesidad de realizarlo, el costo que representa y el beneficio que pueda esperarse al
terminar la investigación.
HIPÓTESIS
La formulación de la hipótesis es esencial en la elaboración del protocolo de investigación
científica que se llevará a efecto. La hipótesis debe ser redactada bajo términos precisos y
dando una explicación lógica y razonada acerca de cómo los factores o variables participan en
el fenómeno por estudiar. Dentro del protocolo debe incluir la hipótesis alterna la cual redacta
el investigador y tiene como finalidad definir la posible respuesta a un problema y que será
13
sometida a investigación. Así también la hipótesis nula establece simplemente la ausencia de
diferencia en la investigación con respecto a la idea transmitida por la hipótesis alterna.
MATERIAL Y MÉTODO
En esta parte del protocolo se menciona el diseño de la investigación, la población u objetivo a
participar, el tamaño de la muestra, las variables a estudiar redactadas de forma operacional y
así como el análisis estadístico a utilizar.
CRONOGRAMA
Debe considerarse el tiempo como el más valioso de los elementos que deben ser tomados en
cuenta en la planeación de cualquier investigación, toda vez que es indispensable en la
estimación de costos, pero más importante que este aspecto es que es perecedero e
irrecuperables.
Por lo cual es necesario hacer estimaciones objetivas del tiempo que tardara en realizarse las
actividades necesarias para culminar la investigación. Una manera de simplificar dichas
estimaciones consiste en dividir todo el proceso en etapas, tales como recolección de
antecedentes, formulación de hipótesis, recolección de información, estudio y análisis de la
información, elaboración del reporte.
REFERENCIAS Y OBRAS DE CONSULTA
Cada revista en la que se publican comunicados científicos tiene para la presentación de las
citas bibliográficas, por lo que conviene que los autores antes de elaborar el informe científico
se informen de los requisitos que deben satisfacer. Sin embargo, para fines prácticos se
presentan las referencias bibliográficas.
Referencia de una revista científica
Ejemplo:
Castilla-Serna L, Perez Ortiz B, Cravioto J. Pattern of muscle and fat mass repair during
recovery from advanced infantile protein-energy malnutrition. Eur J Clin Nutr1996; 50:392-397.
Referencia de un libro científico con autores por capitulo
Ejemplo:
Frenk S, Protein-energy malnutrition. Pediatric Nutrition. London: Butterworth; 1985:153.
14
EJEMPLO DE PROTOCOLO DE INVESTIGACIÓN
La búsqueda de información del tema a desarrollar en la práctica será basada en libros
científicos y en revistas científicas registradas en el banco de datos de la National Library of
Medicine encontrada en la pagina de Internet www.pubmed.com. La gran mayoría de las
revistas pueden ser descargadas en computadoras con RED UNAM, en su defecto pueden ser
localizadas en el acervo de revistas en la biblioteca de POSGRADO EN ODONTOLOGIA de la
UNAM.
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Entrez
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búsqueda de algún tema se puede
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hacer manera especifica ya sea por
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Aparición del nombre de la revista con el año mes,
volumen de y pagina donde se localiza el articulo.
Así como los autores y un resumen o abstract del
contenido del artículo.
1: Acta Odontol Scand. 2000 Aug;58(4):171-6.
Related Articles,
Links
Type X collagen in human enamel development: a possible role in mineralization.
Felszeghy S, Hollo K, Modis L, Lammi MJ.
Department of Anatomy, Histology and Embryology, University of Debrecen Medical and Health
Science Center, Hungary. [email protected]
Although type X collagen is one of the key molecules in endochondral ossification, no data are
available on whether it is present in dental structures when mineralization is proceeding. We
therefore monitored the appearance of type X collagen in tooth germs of human samples ranging
in gestational age from 17-week-old fetuses to 9-week-old newborn. Using
immunohistochemistry, ELISA techniques, and Western blotting, we show that type X collagen is
present in human tooth germ during enamel maturation. Intense immunohistochemical staining
for collagen type X was observed in the enamel and in the apical parts of secretory ameloblast at
the bell stage when the dentine and enamel matrix were already under formation. The
odontoblasts, the dentine, and the pulp were not stained. In the early (9-week) postnatal stage, the
staining for collagen type X in the enamel matrix was diminished, and only a very weak signal
could be detected in the secretory ameloblasts. A positive reaction for collagen type X was also
observed in ELISA assay of extracts obtained from human embryonic enamel and hypertrophic
cartilage samples. The Western blot analysis of the enamel demonstrated that size of the molecule
detected by MoAb X53 is characteristic of the type X collagen. This correlates well with our
immunohistochemical findings. Based on these data, we propose that type X collagen is one of
the candidate molecules present in the enamel matrix that might be involved in mineralization of
the enamel.
PMID: 11045371 [PubMed - indexed for MEDLINE]
15
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Collagen Type X and enamel
Preview/Index
OMIM
secundarias
conexión (
Protocolo con diseño de tipo experimental, terapéutico, prospectivo, transversal y
comparativo.
Titulo
Recién nacidos con poliglobulia. Tratamiento comparativo con plasma y con solución salina.
Introducción
La poliglobulia es la presencia de un hematocrito venoso igual o mayor al 65%. Se presenta
1
entre 3 y 5% de todos los recién nacidos. La transfusión placentofetal es la causa más
frecuente en el parto y en casos postnatales. La toxemia gravidica, placenta previa, retraso en
el crecimiento intrauterino y las cardiopatías congénitas complejas son causa de policitemia por
un mecanismo de hipoxia y en consecuencia un aumento compensador de eritropoyetina.
2
3
Wood en 1959 , recomendó la caterización umbilical y el recambio parcial de sangre por
plasma humano. Desde entonces, el tratamiento en la mayoría de los hospitales del mundo es
el recambio parcial de coloides como albúmina y plasma. El uso del plasma tiene un costo muy
elevado y además existe el riesgo potencial de transmisión de infecciones.
Planteamiento del problema
En algunos hospitales de atención a recién nacidos se han utilizado soluciones cristaloides,
como la solución isotónica para el tratamiento de la poliglobulia. Sin embargo, hasta el
momento no se cuenta con un estudio comparativo acerca del beneficio desde el punto de vista
fisiológico y bioquímico de ambos tratamientos en el recién nacido.
Justificación
El tratamiento de la poliglobulia en el recién nacido ha sido a base de plasma humano y
solución salina, o ambos, pero se desconocen los beneficios fisiológicos y bioquímicos con el
uso u otro tipo de tratamiento.
Objetivos
Comparar desde el punto de vista fisiológico y bioquímico los tratamientos de plasmaferesis y
salinoferesis en la poliglobulia del niño neonato. El resultado servirá de estándar terapéutico de
menor riesgo y aun bajo costo para las instituciones que atienden a recién nacidos.
16
Hipótesis
El tratamiento a base de salinoféresis no diferirá en las variables bioquímicas y fisiológicas con
respecto al uso de plasmaferesis.
Material y método
Clasificación de la investigación. Experimental, terapéutica, doble ciego, prospectiva,
transversal y comparativa.
Población objetivo. Recién nacidos con poliglobulia.
Criterio de inclusión. Pacientes con poliglobulia cuyas cifras de hematocrito sean superiores a
65%.
Criterio de exclusión. Pacientes que presentan datos de deshidratación
Grupos. Se elegirán al azar en una muestra de 74 recién nacidos con poliglobilia, de acuerdo a
su llegadla hospital, quienes recibirán salinoferesis (grupo experimental) y los que recibirán
plasma (grupo Control).
Procedimiento. Se efectuara exanguinación de plasma fresco congelado humano y solución
salina, o ambas, por medio de onfaloclisis venosa y de no ser posible, mediante venodisección
de las venas del brazo.
Variables y mediciones. Historia clínica completa. Registro de signos vitales (frecuencia
cardiaca, frecuencia respiratoria, tensión arterial, y temperatura) antes; durante el
procedimiento de exosanguinotransfusión de plasma humano (control) y solución salina
isotónica (experimental), o ambas, cada 10 minutos y después seis veces al día.
Biometría hemática completa. Hemoglobina, hematocrito, cuenta leucocitoria, plaquetas,
reticulocitos, sedimentación globular antes y después del procedimiento, tanto al grupo
experimental como al grupo testigo o control.
Determinación de electrólitos. Sodio potasio, cloro y bicarbonato, antes y después del
procedimiento en ambos grupos de estudio.
Química sanguínea. Glucosa, urea, ácido úrico y creatinina, antes y después del procedimiento
en ambos grupos de estudio.
Análisis estadístico. Aplicación de la prueba t de student para encontrar diferencias entre los
grupos experimental y testigo o control.
Bibliografía
1.- Worth FH, Goldberg KE, Lubchenco LO. Neonatal hyperviscosity. Incidnece. Pediatrics
1979; 63: 833-836.
2.-Shurin Sb. Polycythemia. En:Fanaroff AA, Martin RJ. Neonatal-perinatal medicine
5a.ed.St.Louis: CV Mosby; 1992:967-968.
3.-Wood JL, Plethora in the newborn infant associated with cyanosis and conclusions. J Pediat
1959; 54:143-151.
17
Cuestionario
1.-Mencione cual es el conocimiento generado a partir de explicaciones objetivas y
confirmadas, siempre verificables:
a) Empírico
b) investigación c) científico
d) Lógica
2.-La bioquímica al ser una rama de la biología, mencione a que tipo de ciencia pertenece
a) Formal
b) Biomédica
c) Naturales d) Factural
3.-Cual es el diseño de investigación donde el investigador maneja la variable
independiente:
a) Retrospectivo b) Longitudinal c) Observacional
4.- Mencione
d) Experimental
en que diseño de investigación se recopilan los datos en diversos
momentos de la evolución fenómeno a investigar:
a) Prospectivo b) Longitudinal c) Observacional
d) Descriptivo
5.- Cual es la parte del protocolo de investigación donde se describe la necesidad de
realizarlo, el costo que representa y el beneficio que pueda esperarse al terminar la
investigación:
a) Hipótesis b) Planteamiento del problema c) Objetivos d) Justificación
6.- En que diseño de investigación el evento o fenómeno a estudiar ya ha ocurrido y la
relación causa efecto ya está registrada después de haberse presentado:
a) Descriptivo b) Longitudinal c) Transversal d) Retrospectivo
7.- Que parte del protocolo de investigación menciona la falta de diferencia en la
investigación:
a) Análisis estadístico b) Hipótesis alterna c) Objetivos d) Hipótesis nula
8.- En que sección del protocolo de investigación se describe el análisis estadístico a
aplicar durante la investigación:
a) Marco teórico b) Planteamiento del problema c) Objetivos d) Metodología
9.-
Cual es la parte del protocolo de investigación donde el lector tiene un primer
contacto con la idea del investigador:
a) Título b) Justificación c) Resumen d) Hipótesis
10.-El diseño de investigación que se incluye dentro de las investigaciones de tipo
observacional
a) Transversal
b) Longitudinal
c) Experimental
d)Descriptivo
BIBLIOGRAFÍA
1.-Canales FH. Metodología de la Investigación. México D.F: Ed. Limusa O.P.S; 1992: 101-125.
2.-Orozco J. Metodología documental para investigaciones en ciencias de la salud. México D.F:
Ed. Ciencia y Cultura; 1983: 13-16.
3.-Serna LC. Metodología de la Investigación en Ciencias de la Salud. México: Ed. El Manual
Moderno; 2001: 1-78.
18
4.-García J. Taller de Introducción a la Metodología de Investigación Médica Interdisciplinaria.
México D.F: Programa Universitario de Investigación en Salud. 1991: 13-30.
19
MATERIAL DIDÁCTICO.
1/9
Método Científico y el Protocolo de Investigación
2/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
Conocimiento
Empírico
Científico
Tipos de Investigación
Investigación Clínica
Investigación Sociomédica
Investigación Biomédica
20
Investigación
Científica
3/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
El método científico es todo un procedimiento formado por una secuencia lógica de actividades que
procura descubrir las características de los fenómenos, las relaciones internas entre sus
elementos y sus conexiones con otros fenómenos, mediante el raciocinio y la comprobación a
través de la demostración y la verificación.
Ciencia
Factural
Natural
Formal
Cultural
Lógica
Matemáticas
Física, Bioquímica y Biología
Ía , Psicología, Sociología
4/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
Pasos del Método
Científico
Identificación del Problema
Estudio de Antecedentes
Formulación de Hipótesis
Verificación de Hipótesis
(Observación , Experimentación)
Aceptación o rechazo de la Hipótesis
Nueva Información
Planteamiento de nuevos problemas
21
5/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
DISEÑO DE
INVESTIGACIÓN
Actitud del
Investigador
Observacional Experimental
Momento de
colección
de los datos
Retrospectivo Prospectivo
Cinética
de los
datos
Proyección
de la
investigación
Descriptiva Comparativa
Transversal Longitudinal
6/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
ELEMENTOS DEL PROTO COLO DE
INVESTIGACIÓN
TITULO
Debe tener el objetivo del estudio, ser breve, conciso y no mayor de 20
palabras.
Además de tener palabras clave.
AUTORES RESPONSABLES
Se consignan en orden, grado de responsabilidad y tareas especificas realizadas.
RESUMEN
En este se encuentra una versión breve del contenido del protocolo.
22
7/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
MARCO TEORICO
Esta parte del protocolo se dedica a exponer en forma clara, objetiva y
ordenada el objetivo de la investigación planeada en
comparación con otros estudios realizados en el mismo terreno.
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La investigación se lleva acabo porque hay algo que no se conoce. El planteamiento se redacta
de preferencia en una sola oración interrogativa, que pueda ser contestada afirmativa o
negativamente.
JUSTIFICACIÓN
Aquí se enmarca la congruencia y la necesidad de realizar
la investigación, así como el beneficio que se espera de esta
8/9
Método Científico y el Protocolo de
Investigación
HIPÓTESIS
Es la explicación lógica y razonada acerca de cómo los factores o
variables participan en el fenómeno por estudiar.
MATERIAL Y MÉTODO
Aquí se menciona la el diseño de la investigación, la población a estudiar, las variables a
estudiar
y el análisis estadístico
CRONOGRAMA
El cronograma divide a todo el proceso de investigación en etapas,
Marcando los tiempos para cada actividad.
REFERENCIAS Y OBRAS DE CONSULTA
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