Producción de radicales oxigenados en los neutrófilos de mujeres

SUMARIO
EUROPEAN JOURNAL OF
obstetrics &
GYNECOLOGY
AND REPRODUCTIVE BIOLOGY
European Journal of Obstetrics & Gynecology and
Reproductive Biology (Ed. Española) 2002; 2: 95-100
Producción de radicales oxigenados en los neutrófilos de mujeres con
preeclampsia y síndrome HELLP
Petra L.M. Zusterzeela, Geert J.A. Wantenb, Wilbert H.M. Petersb, Hans M.W.M. Merkusa,
Eric A.P. Steegersa
Departamentos de Obstetricia y Ginecología, Centro Médico de la Universidad de Nijmegen, Apartado de Correos 9101, 6500 HB Nijmegen, Holanda
a
Departamentos de Gastroenterología, Centro Médico de la Universidad de Nijmegen, Nijmegen, Holanda
b
Aceptado: 15 marzo 2001
Resumen
Objetivo: Determinar si la preeclampsia grave complicada por hemólisis, elevación de las enzimas hepáticas y descenso de las plaquetas síndrome HELLP- altera la producción de radicales oxigenados en los neutrófilos. Materiales y métodos: Se obtuvieron neutrófilos de 10
mujeres no gestantes sanas, de 9 gestantes sanas y 9 mujeres con preeclampsia grave y síndrome HELLP simultáneaneamente. La producción
de radicales oxigenados se evaluó usando quimioluminiscencia potenciada por luminol y medida por reducción del citocromo C. Además,
incubamos suero de casos y controles con neutrófilos sanos aislados y medimos su capacidad de generar radicales oxigenados. Resultados:
La producción no estimulada de radicales oxigenados por los neutrófilos fue significativamente más baja en mujeres con preeclampsia grave
que en mujeres sanas no gestantes y gestantes, aunque la producción de radicales oxigenados inducida por éster forbol fue similar en todos
los grupos. La reducción del citocromo C en los neutrófilos no estimulados mostró resultados similares. En neutrófilos sanos incubados con
suero de mujeres preeclámpsicas aumentó la producción de radicales oxigenados significativamente más que en neutrófilos incubados con
suero de sujetos sanos. Conclusiones: La preeclampsia grave se caracteriza por un descenso de la producción de radicales oxigenados en los
neutrófilos no estimulados. Esto puede ser el resultado de un agotamiento de la respuesta celular, debido a la estimulación por un factor presente en el suero de estas pacientes. © 2001 Elsevier Science Ireland Ltd. Reservados todos los derechos.
Palabras clave: Quimioluminiscencia; Neutrófilos; Radicales oxigenados; Preeclampsia; HELLP.
Introducción
Aunque la preeclampsia complica el 5% de las gestaciones y es una de las causas principales de morbilidad y mortalidad materna y perinatal, la etiología de esta enfermedad
permanece sin establecerse. La lesión y la disfunción endotelial pueden desempeñar un papel importante en la fisiopatología de la preeclampsia [1]. La activación de los neutrófilos puede producir lesión vascular por su capacidad
para generar sustancias oxigenadas reactivas [2]. Los neutrófilos activados se adhieren al endotelio y posteriormente liberan contenidos de sus gránulos, como elastasa y otras
proteasas, que son capaces de destruir la integridad de las
células endoteliales. Los radicales oxigenados generados
por los neutrófilos activados pueden producir peroxidación
de los lípidos de la membrana y posteriores aumentos de la
permeabilidad y de la reactividad vascular [2]. No está claro qué es lo que desencadena la alteración del endotelio en
la preeclampsia, pero la actividad de los neutrófilos puede
desempeñar algún papel en la lesión endotelial típica de
este trastorno.
La adhesión de los neutrófilos al endotelio vascular
depende de la asociación entre las moléculas de adhesión
presentes en la superficie de las células endoteliales. En la
preeclampsia se produce un aumento de la expresión de
dichas moléculas de adhesión [3,4], además de un aumento de las concentraciones plasmáticas de algunos componentes granulares, como elastasa, lactoferrina, endotelina 1
y gravidina [5-7]. En la mayoría de los estudios, sin
embargo, se han usado técnicas indirectas para demostrar
la activación de los neutrófilos. Los neutrófilos producen
radicales oxigenados en respuesta a la estimulación, y la
Zusterzeel PLM, Wanten GJA, Peters WHM, Merkus HMWM, Steegers EAP. Neutrophil oxygen radical production in pre-eclampsia with
HELLP syndrome. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology 2001; 99: 213-218 (usen esta cita al referirse al
artículo).
96
P. L.M. Zusterzeel, et al. / European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology (Ed. Española) 2002; 2: 95-100
medida directa de la producción de radicales oxigenados es
un marcador de la activación de los neutrófilos [8].
Para estudiar el papel de los neutrófilos en la patogenia de
la preeclampsia y del síndrome HELLP (hemólisis, enzimas
hepáticas elevadas, plaquetas bajas) [9], medimos la producción de radicales oxigenados en los neutrófilos de mujeres
no gestantes y gestantes normotensas y de mujeres con preeclampsia grave complicada por el síndrome HELLP, usando quimioluminiscencia potenciada por luminol con y sin
estímulo externo de PMA (éster forbol 12-miristato 13-acetato) [10]. Además, medimos la producción del anión superóxido con un ensayo de reducción del citocromo C. Para
determinar si hay un factor humoral en el suero de las mujeres con preeclampsia, que altera la producción de radicales
oxigenados en los neutrófilos, también estudiamos la activación de los neutrófilos de la sangre de una donante sana en
respuesta al suero (10% v/v) de todos los sujetos.
Materiales y métodos
Sujetos
Los sujetos fueron mujeres holandesas asistidas en el
Centro Médico de la Universidad Nijmegen, Holanda, desde septiembre de 1998 a febrero de 1999. La población del
estudio se compuso de nueve primigrávidas con preeclampsia grave complicada por síndrome HELLP. La preeclampsia grave se definió como presión arterial diastólica
persistente > 110 mm Hg (fase V de Korotkoff) en dos o
más medidas consecutivas en una mujer previamente normotensa, después de las 20 semanas de gestación, con proteinuria mayor de 3 g a las 24 horas. El síndrome HELLP
se definió como la incidencia simultánea de recuento plaquetario < 10 x 109/l, concentraciones séricas de lactato
deshidrogenasa (LDH) > 600 UI/l y de aspartato aminotransferasa (AST) y alanino aminotransferasa (ALT) > 70
UI/litro [11]. Todas las mujeres preeclámpsicas estaban
muy enfermas, por lo que se ingresaron en la unidad de
cuidados intensivos. Seis de las pacientes preeclámpsicas
se trataron con metildopa (Aldomet©; Merck Sharp &
Dohme BV, Haarlem, Holanda) y sulfato de magnesio por
vía intravenosa, una con hidrogenotartrato de ketanserina
(Ketensin©; Pharmacia y Upjohn, Woorden, Holanda) y
sulfato de magnesio intravenoso, y dos con metildopa sólo.
Nueve primigrávidas sanas normotensas, seleccionadas
aleatoriamente en la clínica ambulatoria, formaron el grupo de control; eran mujeres normotensas sin proteinuria.
Los sujetos se equipararon en cuanto a edad materna y gestacional. Además, se extrajo sangre de 10 mujeres no gestantes sanas de edad similar con antecedentes obstétricos
no complicados. Los sujetos con antecedentes de enfermedad vascular renal, diabetes o cualquier trastorno autoinmune, o que recibían cualquier tipo de medicación distinta
de vitaminas o suplementos de hierro, se excluyeron del
estudio. Se obtuvo el consentimiento por escrito de los
casos y controles antes de la inclusión en el estudio y fue
aprobado por el comité de ética local. Se recogieron muestras de sangre en estado avanzado de la gestación de las
pacientes con preeclampsia y de los controles gestantes
durante una visita prenatal sistemática.
Ni las pacientes ni los controles gestantes no estaban de
parto en el momento del muestreo de la sangre.
Procedimientos y ensayos
Se recogieron muestras de sangre anticoagulada con
heparina- litio (para el aislamiento celular) o sin anticoagulantes (para la preparación del suero) de todos los sujetos.
Se hicieron medidas de quimioluminiscencia en sangre
heparinizada diluida simultáneamente de las gestantes preeclámpsicas, normotensas y no gestantes. La sangre fue recogida en tubos "vacutainer corvac" y se centrifugó a 3000 g
durante 10 minutos y el suero se almacenó a –20ºC hasta su
análisis. El suero se diluyó en solución salina con tampón
fosfato (PBS) y se añadió a los neutrófilos en una concentración final del 10% (v/v). Todos los productos químicos se
adquirieron en Laboratorios Sigma (San Luis, MO, Estados
Unidos), a menos que se especifique lo contrario.
Aislamiento de los neutrófilos
El aislamiento de los neutrófilos se realizó de la forma descrita en otros trabajos [12,13]. La sangre diluida al 1:1 con
PBS que contenía citrato trisódico al 0,4% (a/v) (pH 7,4) se
diluyó en Percoll (densidad específica 1.076 g/ml; Pharmacia
Biotech, Uppsala, Suecia) y se centrifugó (700 g durante 20
minutos a 25°C). El sedimento se suspendió en 50 ml de solución de lisis isotónica en hielo (que contenía 155 mmol/l de
NH4Cl, 10 mmol/l de KHCO3 y 0,1 mmol/l de EDTA, pH 7,4)
durante 10 minutos. Después de la centrifugación (400 g
durante 5 minutos a 4°C), los eritrocitos restantes se lisaron en
la solución reciente de lisis en hielo durante otros 5 minutos.
Después se lavaron las células y se resuspendieron en una
concentración final de 2 x 106 células/ml y se mantuvieron a
temperatura ambiente. Las preparaciones mostraron más del
97% de granulocitos y una viabilidad mayor del 99%.
Quimioluminiscencia
La quimioluminiscencia potenciada por luminol se midió
a 37°C durante 120 minutos en microplacas de 96 pocillos
con un luminómetro automático LB96V Microlumat Plus
(EG & G Berthold, Bad Wildberg, Alemania), como se describió en otro artículo [13]. Se añadieron a cada pocillo, que
contenía 200 µl de suspensión de neutrófilos (2 x 106 células/ml), 20 µl de una dilución 1:20 de luminol en solución
de sal equilibrada de Hank (HBSS) (Life Technology, Breda, Holanda) complementada con albúmina sérica humana
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al 0,5% (a/v) (Behring, Westwood, MA, Estados Unidos).
Además de realizar medidas basales, también se añadieron
como estímulo 20 µl de PMA; 0,1 mg/ml. La cantidad de
quimioluminiscencia se midió cada 60 segundos durante 2
horas y el valor máximo (que representaba el porcentaje
máximo de producción de radicales) y completo durante
este período (medida de la producción global de radicales)
se expresaron como unidades relativas de luz (URL). Para
controlar también el efecto de la producción de radicales
oxigenados en la fase precoz de activación, los porcentajes
de producción de radicales se midieron inmediatamente
después de la inducción con luminol y de la estimulación
con un estímulo permeable a la membrana (PMA), en presencia o ausencia de suero (10% v/v). Los datos analizaron
con la aplicación informática Winglow (EG & G Berthold).
La activación de los neutrófilos de la sangre de una
mujer sana en respuesta a los sueros de pacientes y controles se midió de la forma siguiente: a 100 ml de suspensión
de neutrófilos (2 x 106 células/ml) se añadieron 100 µl de
suero (10% v/v), seguido de 20 µl de una dilución al 1:20
de luminol en medio HBSS.
Producción de superóxido
La producción de superóxido se determinó a 37°C en
función de la reducción de citocromo C inhibible por la
superóxido dismutasa en un espectrofotómetro con termostato (Perkin-Elmer, Norwalk, CT, Estados Unidos), como
se describió previamente [14]. Las medidas se expresaron
como el porcentaje máximo de reducción de citocromo C
en en nmol/1 por 106 neutrófilos a 550 nanómetros, usando
21,1 mmol/l cm como coeficiente de extinción molar del
citocromo C [13].
Análisis estadístico
Las variaciones entre los grupos se indicaron usando
ANOVA de una vía de Kruskal-Wallis y el test de rangos
97
de señales de Wilcoxon. Se consideró significativamente
estadístico un nivel de probabilidad de p <0,05 (de dos
ramas). Todos los análisis estadísticos se realizaron con
ayuda del programa estadístico Astute de Microsoft Excel
(Aplicación 1993 UDD, Universidad de Leeds, Reino Unido).
Resultados
La edad materna, la edad gestacional y la paridad en el
muestreo no variaron significativamente en las mujeres con
preeclampsia y síndrome HELLP y las mujeres gestantes
sanas. La presión arterial diastólica fue significativamente
más alta en las mujeres preeclámpsicas que en las mujeres
gestantes sanas (p<0,01). En la Tabla 1 se presentan estos
datos para los tres grupos del estudio.
En las mujeres con preeclampsia complicada por el síndrome HELLP, la producción de radicales oxigenados en
neutrófilos no estimulados fue menor que en mujeres gestantes sanas (en ambas p <0,05 para el porcentaje máximo
de producción de radicales y producción global de radicales) y que en controles no gestantes (en ambas p <0,01 para
el porcentaje máximo de producción de radicales y producción global de radicales). La respuesta de los neutrófilos no estimulados en gestantes se redujo significativamente sobre los controles no gestantes (p<0,05 para el
porcentaje máximo y p <0,01 para la producción global de
radicales). No encontramos ninguna diferencia entre las
mujeres preeclámpsicas que fueron tratadas con sulfato de
magnesio (n=7) o sin él (n=2). Los neutrófilos estimulados
con PMA no mostraron diferencias en la producción de
radicales oxigenados entre no gestantes, gestantes sanas y
preeclámpsicas. Los resultados se resumen en la Tabla 2.
Además, la producción de superóxido, medida por el ensayo de reducción del citocromo C, fue significativamente
más baja en mujeres preeclámpsicas comparadas con mujeres no gestantes (p<0,05), pero no con mujeres gestantes
sanas (p=0,21). La producción de superóxido tendió a ser
más baja en mujeres gestantes sanas comparadas con no
Tabla 1
Características de los casosa
Edad materna (años)
Presión arterial diastólica (mm Hg)
Edad gestacional (semana+días)
Nulíparas (%)
Hemoglobina (g/dl)
Hematocrito (l/l)
Recuento plaquetario (x 109/l)
AST sérica (UI/l)
ALT sérica (UI/l)
LDH sérica (UI/l)
Proteínas en orina (g/l)
a
Pacientes con PE y HELLP (n=9)
Mujeres gestantes (n=9)
Mujeres no gestantes (n=10)
29 (28-32)
110 (110-130)b
30+1 (29+2 a 32+1)
8 (89%)
13,0 (10,1-14,0)
0,35 (0,28-0,40)
53 (33-90)
128 (79-1.230)
121 (72-985)
825 (760-1.380)
7,2 (3,2-23,5)
31 (29-34)
75 (65-80)
31+1 (29+5 a 32+4)
7 (78%)
11,9 (11,2-12,9)
0,34 (0,32-0,46)
ND
ND
ND
ND
0,3
30 (27-35)
80 (70-85)
–
–
11,4 (11,0-13,2)
0,36 (0,31-,50)
ND
ND
ND
ND
ND
Los valores se expresan como medianas (intervalos intercuartiles) o porcentajes; PE=preeclampsia; ND=no determinado
ANOVA de una vía de Kruskal-Wallis de mujeres preeclámpsicas frente a gestantes sanas y mujeres no gestantes, P<0,01.
b
98
P. L.M. Zusterzeel, et al. / European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology (Ed. Española) 2002; 2: 95-100
Tabla 2
Producción de radicales oxigenados en los neutrófilosa
No estimulados
Producción global
(URL x 103)
Estimulados por PMA
Porcentaje máximo
(URL)
Producción global
(URL x 106)
Mujeres no gestantes (n=10)
198 (162-237)
49 (39-67)
138 (122-198)
Mujeres gestantes (n=9)
156 (79-199)b
33 (21-47)b
139 (125-197)
Pacientes con PE y HELLP (n=9)
68 (50-87)c,d
17 (9-30)c,d
146 (127-161)
a
Los valores se expresan como medianas (intervalos intercuartiles); URL=unidades relativas de luz; PE=preeclampsia.
b
Test de rangos de señales de Wilcoxon, gestantes sanas comparadas con no gestantes, p<0,05.
c
Test de rangos de señales de Wilcoxon, mujeres preeclámpsicas comparadas con gestantes sanas, p<0,05.
d
Test de rangos de señales de Wilcoxon, mujeres preeclámpsicas comparadas con no gestantes, p<0,001.
Porcentaje máximo
(URL x 103)
99 (81-130)
104 (85-123)
103 (87-126)
Tabla 3
Porcentajes de producción de radicales oxigenados de los neutrófilos en respuesta a la adición de suero (10% v/v)a
No estimulados
Producción global
(URL x 103)
Estimulados por PMA
Porcentaje máximo
(URL)
Producción global
(URL x 106)
Mujeres no gestantes (n=10)
297 (277-436)
122 (97-168)
524 (396-574)
Mujeres gestantes (n=9)
301 (259-371)
126 (122-165)
535 (493-625)
Pacientes con PE y HELLP (n=9)
540 (416-667)
236 (154-278)b,c
530 (466-581)
a
Los valores se expresan como medianas (intervalos intercuartiles); URL=unidades relativas de luz; PE=preeclampsia.
b
Test de rangos de señales de Wilcoxon, mujeres preeclámpsicas comparadas con gestantes sanas, p<0,05.
c
Test de rangos de señales de Wilcoxon, mujeres preeclámpsicas comparadas con no gestantes, p<0,01.
gestantes, pero esta diferencia no alcanzó la significación
estadística. En mujeres no gestantes, gestantes y preeclámpsicas, los valores medios y los intervalos intercuartiles de la producción de superóxido en neutrófilos estimulados por PMA fueron 9,2 (7,3-9,6) nmol/min por cada 106
células, 7,2 (6,0-7,5) nmol/min por cada 106 células y 5,8
(5,2-6,2) nmol/min por cada 106 células, respectivamente.
El suero de mujeres preeclámpsicas añadido a los neutrófilos aislados de sangre de una mujer donante sana
aumentó la producción de radicales más que el suero de
una mujer gestante sana o no gestante. En este sistema de
prueba, el suero de mujeres preeclámpsicas mostró un porcentaje máximo mayor de producción de radicales oxigenados que el suero de gestantes sanas (p<0,05) o no gestantes (p<0,01). De nuevo, no se encontraron diferencias
entre los grupos cuando se estimularon los neutrófilos por
PMA. Los resultados de estos experimentos se detallan en
la Tabla 3.
Discusión
Varios estudios indican que la activación inadecuada de
los neutrófilos puede estar implicada en la lesión endotelial
de la preeclampsia [1,3]. Los neutrófilos activados liberan
constituyentes granulares y radicales libres de oxígeno. Los
radicales oxigenados pueden iniciar la peroxidación y producir lisis y otras lesiones en las células endoteliales. En
este estudio medimos la producción de radicales oxigenados de neutrófilos no estimulados (basal) y estimulados
con PMA, mediante quimioluminiscencia potencicada por
Porcentaje máximo
(URL x 103)
290 (246-339)
347 (287-394)
339 (299-348)
luminol y reducción de citocromo C inhibible por superóxido dismutasa. También evaluamos el efecto del suero de
mujeres preeclámpsicas, gestantes normales y no gestantes
sobre la capacidad de los neutrófilos sanos aislados para
generar radicales oxigenados. Nuestros datos sobre las respuestas basales de los neutrófilos sugieren que la producción de radicales oxigenados disminuye en el grupo de gestantes normales y, en mucho mayor grado, en preeclámpsicas,
mientras que la estimulación de la producción de radicales
oxigenados de neutrófilos (activación respiratoria) permanece inalterada. Sin embargo, la respuesta al estímulo
externo PMA fue similar en los neutrófilos de las pacientes
y de los controles. Puesto que PMA es independiente de los
receptores y activa directamente a la proteína cinasa [10],
esto indica que puede participar otra vía, por ejemplo, un
proceso mediado por un receptor. Aunque conuerda con
algunos estudios sobre la medida directa de la producción
de superóxido en gestaciones normales [15-18], estos
resultados no concuerdan con otros estudios sobre la producción de radicales de oxígeno en gestaciones normales y
con preeclampsia.
Crouch et al., usando quimioluminiscencia potenciada
por lucigenina con formil-metionil-leucil-fenilalanina
(FMLF) o zimosan como estímulo, demostraron una producción significativamente más baja de radicales oxigenados en monocitos y granulocitos de gestantes sanas a las
30-34 semanas, comparadas con controles no gestantes,
pero no mostraron diferencias entre los grupos con un estímulo externo [15]. Sin embargo, Sevaraj et al., usando
quimioluminiscencia inducida por poliestireno y potenciada por luminol, observaron una tendencia al aumento de
P. L.M. Zusterzeel, et al. / European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology (Ed. Española) 2002; 2: 95-100
producción de radicales oxigenados en los neutrófilos en el
tercer trimestre de una gestante normal comparada con
controles no gestantes [18]. Estudiando la quimioluminiscencia potenciada por luminol e inducida por estímulo y
midiendo la actividad NADPH-oxidasa, Miller y Russell
demostraron que en la gestación aumentaba la luminiscencia pero que la producción de aniones superóxido se reducía [19]. Tsukimori et al. publicaron que la preeclampsia se
caracterizaba por un aumento de la producción de aniones
superóxido en los neutrófilos estimulados con FMLF, un
agonista mediado por receptores [20]. Sin embargo, estos
resultados no pudieron reproducirse en otro estudio del
mismo grupo de investigación [21]. Además, no encontraron ninguna diferencia en la producción de superóxido de
los neutrófilos cuando se uso como estímulo PMA, un agonista que se escapa de los receptores y activa directamente
a la proteína cinasa [20]. En otro estudio sobre producción
de radicales oxigenados en la preeclampsia, realizado por
Sacks et al., se demostró una tendencia al aumento de la
producción de radicales oxigenados en granulocitos y
monocitos periféricos no estimulados y estimulados por
FMLF en gestaciones normales y gestaciones con preeclampsia, pero no pudieran demostrar una diferencia significativa entre estos grupos [22].
Recientemente, Crocker et al. describieron que había una
producción de radicales oxigenados más baja en neutrófilos de gestantes sanas que en no gestantes en respuesta a
FMLF y zimosan, usando quimioluminiscencia inducida
por lucigen, pero las medidas en mujeres con preeclampsia
no mostraron una reducción similar a la de la gestación
normal [17]. Estos resultados aparentemente contradictorios pueden deberse a diferencias en la gravedad de la
enfermedad. Nuestros casos de preeclampsia eran todos de
mujeres gravemente enfermas y la enfermedad se complicó por el síndrome HELLP, mientras que en otros estudios
también se incluyeron casos de preeclampsia leve y moderada [20,22]. Las diferencias en las metodologías usadas
también podrían contribuir a que los resultados sean contradictorios. Algunos artículos discuten los problemas
metodológicos relacionados con la medida de la activación
de los neutrófilos con quimioluminiscencia potenciada por
luminol, puesto que luminol puede inhibir la secreción de
superóxido en algunas circunstancias [23]. Además, luminol puede también detectar la actividad oxidasa intracelular, puesto que es capaz de atravesar las membranas biológicas [22]. Por tanto, no podemos descartar que las
diferencias en la mieloperoxidasa celular pudieran haber
contribuido a nuestros resultados. También debemos saber
que las técnicas de aislamiento de neutrófilos pueden producir la activación de los mismos, produciendo artefactos
[24]. Kuijpers et al. demostraron que comparado con el
gradiente de densidad, ni la incubación, ni los pasos de
lavado ni el paso de lisis durante el procedimiento de purificación alteraron significativamente la expresión de antígenos. El gradiente de densidad contribuyó sólo a la sobrerregulación de moléculas ya expresadas en neutrófilos
99
fijados directamente [12]. Puesto que todas las muestras se
trataron de la misma manera, los efectos mencionados
anteriormente no pueden explicar las diferencias entre las
mujeres preeclámpsicas y los controles.
Tampoco la variabilidad en el tratamiento con sulfato de
magnesio parece influir en la producción de radicales de
oxígeno de los neutrófilos.
Nosotros también demostramos que los neutrófilos de la
sangre de una donante sana sin estímulo externo experimentaron más activación en respuesta al suero de mujeres
preeclámpsicas que al suero de gestantes sanas o no gestantes. Puesto que la preeclampsia y el síndrome HELLP se
asocian con mayor activación del complemento [25], realizamos estos experimentos usando suero con y sin inactivación del complemento (suero calentado a 56°C durante 30
minutos), pero no encontramos diferencias significativas en
la activación de los neutrófilos. Esto indica que el sistema
del complemento puede no ser responsable de las diferencias encontradas. El efecto del suero podría explicarse, al
menos en parte, considerando que los factores humorales
del suero estimularan a los neutrófilos. Por tanto, sugerimos la hipótesis de que los neutrófilos de las pacientes con
preeclampsia se activan en una fase precoz de la preeclampsia, posiblemente, debido un factor circulante en suero y quedan exhaustos cuando la enfermedad llega a estadios más graves. Un efecto de potenciación de la
activación de los neutrófilos por el suero en la preeclampsia se demostró por Tsukimori et al. [20]. Además, Clark et
al. demostraron un aumento de la adhesión al endotelio de
los neutrófilos obtenidos de mujeres con preeclampsia y un
aumento de las respuestas motoras de los neutrófilos, cuando éstos se incuban con suero de mujeres con preeclampsia [26,27].
El tratamiento precoz con antioxidantes, como Vitamina
C y E, que se ha demostrado que es beneficioso para la prevención de la preeclamsia en mujeres que sufren mayor
riesgo de esta enfermedad [28], o con N-acetilcisteína, un
antioxidante y precursor del antioxidante endógeno glutatión [29], puede ser eficaz para reducir el estrés oxidativo,
estabilizando o incluso invirtiendo el proceso de lesión
endotelial.
En conclusión, nuestro estudio indica que los neutrófilos
posiblemente desempeñan algún papel en la fisiopatología
de la preeclampsia. Sugerimos que el descenso de la producción de radicales oxigenados en los neutrófilos de
mujeres con preeclampsia grave complicada por el síndrome HELLP, comparado con los de gestantes sanas y no
gestantes, podría deberse a la sobreestimulación debida a
un factor presente en el suero de estas pacientes.
Agradecimientos
Queremos agradecer su asistencia técnica a Annie van
Schaik y Hennie Roelofs del Departamento de Gastroenterología.
SUMARIO
100
P. L.M. Zusterzeel, et al. / European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology (Ed. Española) 2002; 2: 95-100
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