Buffers de Carga Electroforesis
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Protocolos y métodos Laboratorio de Genómica Viral y Humana Facultad de Medicina UASLP Preparación de buffers de carga para electroforesis Creado: 14 de Febrero del 2008 Ultima modificación: 11 de Noviembre del 2008 Buffers de carga para electroforesis. Este protocolo describe el modo de prepara buffers de carga para electroforesis en agarosa y acrilamida. El producto de PCR o el ácido nucleíco generalmente se mezcla con buffer de carga 6x. Los buffers de carga facilitan la visualización y sedimentación del producto de PCR o de ácidos ncucleicos en los pozos para lo cual emplean distintos tipos de colorantes, cada uno de ellos exhibe un patrón de migración diferente. Preparación de Buffer de Xylene Cyanol 6x (Migración nominal 4 kbp) • • • 25 mg de Xylene Cyanol 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4 grs de Sucrosa Aforar a 10 mL con dH20 Preparación de Buffer de Azul de Bromofenol 6x (Migración nominal 300 bp) • • • 25 mg de Azul de Bromofenol 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4 grs de Sucrosa Aforar a 10 mL con dH20 Preparación de Buffer de Naranja G 6x (Migración nominal 50 bp) • • • Mezcle 18 mL de Glicerol grado ACS con 40 mL de agua destilada. Agregue 60 mg de Naranje G y afore a 50 mL. Homogeneice la mezcla con vortex. Preparación de Buffer Mixto 6x (Azul de Bromofenol y Xylene Cyanol) • • • • 25 mg de Azul de Bromofenol 25 mg de Xylene Cyanol 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4 grs de Sucrosa Aforar a 10 mL con dH20 Colorante Xylene cyanol Rojo cresol Azul de bromofenol Naranja G Tartazina Mobilidad en agarosa ≤ 1.5% 10,000 a 4,000 bp 2,000 a 1,000 bp 500 a 400 bp < 100 bp < 20 bp Mobilidad en agarosa ≥ 2% 750 a 200 bp 200 a 125 bp 150 a 50 bp ? < 20 bp Notas: 1. Almacene los buffers preparados a base de ficoll o sucrosa bajo refrigeración para evitar el crecimiento de hongos. Laboratorio de Genómica Viral y Humana – Facultad de Medicina – Universidad Autónoma de San Luis Potosí
