MPB 1020. TITULACIÓN POR UFP DE VACUNA ANTIAMARÍLICA

EL TEXTO EN COLOR ROJO HA SIDO MODIFICADO
Con fundamento en el numeral 4.11.1 de la Norma Oficial
Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente
proyecto a efecto que los interesados, a partir del 1º de
noviembre y hasta el 31 de diciembre de 2015, lo analicen,
evalúen y envíen sus observaciones o comentarios en idioma
español y con el sustento técnico suficiente ante la CPFEUM,
sito en Río Rhin número 57, colonia Cuauhtémoc, código
postal 06500, México, DF Fax: 5207 6890
Correo electrónico: [email protected].
13. Teñir las placas con una solución de carbolfucsina, negro
naftaleno o cristal violeta agitando suavemente durante
3 min
MPB 1020. TITULACIÓN POR UFP DE
VACUNA ANTIAMARÍLICA
19. Determinar la potencia en Unidades Internacionales por
dosis, con relación a la vacuna de referencia.
Titular simultáneamente la vacuna en prueba y una vacuna de
referencia.
Criterios de aceptación
La prueba es válida si:
1. Los controles celulares no muestran UFP.
2. La vacuna de referencia no varía más de 0.5 log10 de
Unidades Internacionales del título establecido.
1. De acuerdo al método validado, preparar placas con una
monocapa confluente de células Vero.
14. Eliminar el colorante y lavar con agua corriente.
15. Dejar secar a temperatura ambiente.
16. Contar el número de placas en todos los pozos.
17. Calcular el promedio del número de placas para cada
dilución de virus probada.
18. Calcular la potencia utilizando las diluciones que
muestren de 1 a 30 UFP por pozo.
2. Reconstituir la vacuna de prueba con su diluyente,
mantenerla a una temperatura entre 20 y 30 °C durante
20 min, hasta que el liofilizado se disuelva
completamente.
3. Preparar diluciones seriadas con factor de dilución 4 de la
vacuna de prueba, de la vacuna sometida a estabilidad
térmica y de la vacuna de referencia, utilizando como
medio de dilución Medio-199 con suero fetal bovino. Por
ejemplo, se pueden preparar las siguientes diluciones:
1:10, 1:40, 1:160, 1:640 y 1:2 560.
4. Inocular cada dilución por duplicado a razón de 0.2 mL
por pozo, iniciando con la dilución más alta. Incluir un
control celular por cada placa inoculando con 0.2 mL de
medio de dilución. Repetir este mismo procedimiento con
la vacuna de referencia.
5. Incubar a 36  0.5 °C y 5 ± 1% de CO2 durante 1 h,
distribuyendo el inóculo con agitación suave cada 15 min.
6. Durante la incubación de las placas preparar el medio
gelificante de la siguiente manera: 50 mL de Medio199 2X, 50 mL, de agarosa (al 1 % en agua destilada) o
carboximetilcelulosa al 3.3 %, adicionado de antibióticos,
glutamina y suero fetal bovino, manteniéndolo a 40 °C y
en agitación constante para evitar su solidificación.
7. Transcurrido el tiempo de incubación, adicionar 3.0 mL
del medio gelificante a cada pozo de la placa.
8. Permitir que dicho medio solidifique durante 20 mina
temperatura ambiente.
9. Incubar a 36  0.5 °C y 5 ± 1% de CO2 durante 7 días.
10. Después de 7 días de incubación, eliminar la capa del
medio gelificante con agitación suave.
11. Fijar las placas con etanol durante 1 min.
12. Lavar las placas con agua corriente durante 1 min.
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