fdp plasma - Annar Diagnóstica Import

FDP PLASMA
Determinación cualitativa y semicuantitativa de PDF en el plasma
mediante aglutinación de látex
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Kit para 60 determinaciones aproximadamente:
– 1 vial de Reactivo 1 (Latex)
– 1 vial de Reactivo 2 (Buffer)
– 1 vial de Reactivo 3 (Control − )
– 1 vial de Reactivo 4 (Control + )
– 10 Placas
– Agitadores
(REF 00540)
Abril 2011
5/ PRECAUCIONES
11/ PROTOCOLO SEMICUANTITATIVO
El estuche intacto se debe conservar a 2-8 °C. Estos reactivos se destinan
exclusivamente a un uso in vitro y deben ser manipulados por personal
autorizado del laboratorio. Los residuos se eliminarán con arreglo a la
reglamentación local vigente. Tener cuidado en el manejo de estos
reactivos y las muestras.
Los niveles de PDF en el plasma pueden ser semicuantificados
sometiendo los plasmas a prueba a diluciones más elevadas. Diluya los
plasmas en serie para la semicuantificación. Siga el mismo procedimiento
de análisis descrito para el protocolo cualitativo. Los niveles de PDF en el
plasma se obtienen multiplicando el límite de detección de la prueba PDF
Plasma por el factor de dilución. Por ejemplo, si la dilución 1/32 es la mayor
dilución que produce aglutinación, entonces el nivel de PDF en el plasma
es igual o mayor que 80 µg/ml (2,5 µg/ml x 32).
6/ OBTENCIÓN Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Español 6
1/ UTILIZACIÓN DEL KIT
El kit FDP Plasma suministra reactivos para la detección y
semicuantificación de productos de degradación de la fibrina/fibrinógeno
(PDF) en el plasma mediante la utilización de partículas de látex revestidas
con anticuerpos monoclonales a los PDF.
La obtención de la muestra debe ajustarse a las recomendaciones para las
pruebas de hemostasia.
• Obtención de sangre en solución de citrato trisódico 0,109 M: 1 vol. de
citrato por 9 vol. de sangre.
• Centrifugación: 15 minutos a 2000-2500 g.
• Conservación del plasma: 8 horas a 20 ± 5 °C
1 mes a –20 °C. Atemperar la muestra a 37 °C
el tiempo necesario y suficiente para que la
descongelación sea completa.
7/ CONSERVACIÓN Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
2/ SUMARIO
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El fibrinógeno es una glicoproteína con un peso molecular de 340 000
daltons. Está compuesto de dos áreas periféricas D y un dominio central
E (2).
In vivo, la trombina convierte el fibrinógeno plasmático en fibrina
insoluble, siendo el coágulo de fibrina estabilizado por el factor XIII. La
plasmina divide el fibrinógeno así como la fibrina en diversos productos
de degradación (2). Los fragmentos X e Y constituyen los productos de
división tempranos del fibrinógeno y de la fibrina no entrecruzada, y los
fragmentos D y E constituyen los productos de división tardíos (2). La
degradación de la fibrina estabilizada por la plasmina resulta en la
formación de complejos denominados X-oligómeros (YXD/DXY,
YY/DXD, DY/YD) y finalmente en el producto terminal dímero-D (2).
En condiciones normales, el proceso fibrinolítico está localizado en el
coágulo de fibrina, puesto que la α2-antiplasmina y los inhibidores del
activador plasminógeno impiden la propagación de la fibrinólisis.
Por otro lado, durante la coagulación intravascular diseminada (CID) la
fibrinólisis se propaga y se vuelve sistémica, en cuyo caso ocurrirá la
degradación del fibrinógeno circulante (2). Los fragmentos producidos
son muy heterogéneos: productos derivados de la fibrina, complejos
solubles, y productos de degradación del fibrinógeno y de la fibrina no
estabilizada.
Una actividad fibrinolítica y/o fibrinogenolítica anormal mostrada por
niveles altos de PDF en el plasma también se puede hallar en estado
clínicos, tales como (3, 5, 6):
– eclampsia
– carcinoma (leucemia promielocítica, etc.)
– complicaciones postoperatorias
– disfunciones cardiacas, hepáticas
– fibrinolisis
– embolia pulmonar
– trombosis venosas.
Los PDF son rápidamente eliminados (4). Por ello, un nivel
persistentemente elevado de PDF indica que el proceso fibrinogenolítico
o fibrinolítico continúa y sugiere que el agente causante sigue ejerciendo
su efecto.
3/ PRINCIPIO DEL TEST
En presencia de los antígenos correspondientes, las partículas de látex
revestidas con anticuerpos anti-PDF monoclonales se aglutinan para
formar grumos macroscópicos. El kit FDP Plasma permite la detección y
semicuantificación de PDF.
4/ COMPOSICIÓN DEL KIT
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Reactivo 1: frasco con 1,3 ml de suspensión de micropartículas de látex
recubiertas con anticuerpos monoclonales de ratón anti-PDF humana.
Reactivo 2: frasco con 20 ml de tampón de glicina, listo para usar.
Reactivo 3: frasco con 0,5 ml de solución exento de PDF utilizada como
control negativo, listo para usar.
Reactivo 4: frasco con 0,5 ml de solución que contiene PDF humano
utilizada como control positivo, listo para usar.
Placas: de un solo uso.
Agitadores: de un solo uso.
Estos reactivos contienen azida sódica (< 1 g/l) como conservante.
Es preciso eliminar con precaución los reactivos que contienen azida sódica. Si estas
soluciones se vierten en el desagüe del lavabo, enjuagar con abundante agua para evitar la
formación de azidas metálicas que, si están concentradas, pueden provocar explosiones.
Algunos reactivos de este kit contienen productos de origen humano y/o animal. Cuando se
ha utilizado plasma humano en la preparación de estos reactivos, se excluye previamente la
presencia del antígeno HBs, de los anticuerpos anti-HCV, anti-HIV 1 y anti-HIV 2 con los
correspondientes análisis. Sin embargo, ningún test puede garantizar de manera absoluta la
ausencia de agentes infecciosos. Por eso, estos reactivos de origen biológico han de ser
manipulados con las precauciones habituales, ya que se trata de productos potencialmente
infecciosos.
Conservados a 2-8 °C en su embalaje original, los reactivos son estables
hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche.
Dejar que los reactivos se estabilicen durante 30 minutos a temperatura
ambiente (18-25 °C) antes del uso.
Agite bien el vial de Reactivo 1 antes de cada uso a fin de resuspender las
partículas.
Estabilidad tras la apertura: los Reactivos 1, 2, 3 y 4, conservados a 2-8 °C
en su embalaje con tapa original, son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en el estuche, en ausencia de cualquier contaminación.
12/ LIMITACIONES
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13/ VALORES NORMALES
Los valores esperados normales en el plasma son < 5 µg/ml (1). El
resultado debe interpretarse en función del estado clínico y biológico del
paciente.
14/ CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
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8/ MATERIALES AUXILIARES
Equipamiento habitual en los laboratorios de análisis clínicos.
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9/ PROCEDIMIENTO
Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente.
• Plasmas a analizar
Los plasmas se analizan a 2 diluciones realizadas en tubos de plástico:
una dilución a 1/2 (50 µl de plasma + 50 µl de Reactivo 2) y una dilución
a 1/8 (50 µl de plasma + 350 µl de Reactivo 2) en Reactivo 2.
• Controles
Cada vez que las diluciones de plasma del paciente son sometidas a
prueba, incluya un control positivo y uno negativo en la ejecución de
pruebas a fin de tener patrones de aglutinación para comparación. El
Control Negativo (Reactivo 3) no dará ninguna aglutinación: su aspecto
es homogéneo. El Control Positivo (Reactivo 4) dará grumos
macroscópicos. Ambos controles son probados sin diluir.
• Dosificación
Pipetee 20 µl del plasma diluido 1/2 del paciente en un círculo de una
tarjeta de prueba, y 20 µl de la dilución 1/8 en otro círculo. Pipetee 20 µl
de cada uno de los Reactivos 3 y 4 en otros dos círculos distintos de la
tarjeta de prueba. A continuación, agite el vial de Reactivo 1 para
resuspender el reactivo y pipetee 20 µl en cada uno de los círculos que
contienen muestras de prueba. Usando varillas mezcladoras distintas,
mezcle los contenidos de todos los círculos. Meza lentamente la tarjeta
de prueba de tal manera que el líquido remolinee alrededor en cada
círculo durante 3 minutos.
Compare el patrón de aglutinación de cada dilución de plasma con
aquellos producidos por los Reactivos 3 y 4.
10/ RESULTADOS
Puesto que la prueba PDF Plasma tiene un límite de detección de
2,5 µg/ml, un patrón de aglutinación en un círculo indica la presencia de
PDF a una concentración igual o mayor que 2,5 µg/ml a la dilución que
está siendo probada. Por consiguiente, interprete los resultados de la
prueba como sigue:
Dilución 1/2
Dilución 1/8
Nivel de PDF (µg/ml)
–
+
+
–
–
+
<5
5 ≤ < 20
≥ 20
Cualquier inicio del proceso de coagulación, incluso mínimo, desde la
extracción puede provocar una falsa aglutinación.
Niveles altos del factor reumatoide (FR) pueden resultar en falsas
aglutinaciones. Cualquier sospecha de presencia de FR debe ser
confirmada mediante una prueba distinta para FR.
El método propuesto es insensible a las heparinas (HNF y HBPM) hasta
un nivel de 2 UI/ml.
La presencia de anticuerpos anti-ratón en ciertos sujetos puede producir
resultados erróneos.
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Especificidad
Las partículas de látex están revestidas con un anticuerpo monoclonal
que reacciona con los productos de degradación de la fibrina y los
productos de degradación del fibrinógeno. Este anticuerpo monoclonal
no reacciona con el fibrinógeno nativo (1).
Efecto Hook
No se ha observado efecto Hook hasta niveles de PDF del 500 µg/ml.
Reproducibilidad
Se han realizado estudios de reproducibilidad, intra (n = 21) e inter-series
(n = 10) a partir de muestras normales y positivo. En todos los casos, la
muestra normal no dio ninguna aglutinación, mientras que se observó
una aglutinación con la muestra positiva.
BIBLIOGRAFÍA
1. MIRSHAHI M., SORIA J., SORIA C., PERROT J.Y., BOUCHEIX C.:
“A latex immunoassay of fibrin/fibrinogen degradation products in
plasma using a monoclonal antibody”. Thromb. Res., 44, 715-728,
1986.
2. NIEUWENHUIZEN W.:
“New strategies in the determination of fibrin and fibrin(ogen)
derivatives by monoclonal antibodies”. Blut, 57, 285-291, 1988.
3. WILDE J.T., KITCHEN S., KINSEY S., GREAVES M., PRESTON F.E.:
“Plasma D-dimer levels and their relationship to serum fibrinogen/fibrin
degradation products in hypercoagulable states”. Br. J. Haematol., 71,
65-70, 1989.
4. LAMBERT H., LARCAN A.:
“Les coagulations intravasculaires disséminées”. Thromboses, 113146, 1990.
5. TAKAHASHI H., TATEWAKI W., WADA K., NIWANO H., SHIBATA A.:
“Fibrinolysis and fibrinogenolysis in disseminated intravascular
coagulation”. Thromb. Haemostasis, 63, 3, 340-344, 1990.
6. NIEUWENHUIZEN W., BOS R.:
“Soluble fibrin and degradation products of fibrinogen (FgDP), fibrin
(FbDP; D-dimer) and total of FgDP and FbDP (TDP)”. Laboratory
techniques in thrombosis - ECAT assay procedures. Dordrecht: Kluwer
academic publishers, 275-284, 1999.
–: sin aglutinación
+: presencia de aglutinación
Comprobar que los resultados obtenidos para los Reactivos 3 y 4 son
respectivamente negativo y positivo. Si estos resultados no son obtenidos,
asegurarse del buen funcionamiento de todo el sistema: condiciones
operativas, reactivos, plasmas en los que se efectúa el test, etc. Si es
necesario, repetir las muestras.
Los cambios significativos son indicados por las líneas punteadas en el margen.
DIAGNOSTICA STAGO S.A.S.
9 rue des Frères Chausson
92600 Asnières sur Seine (France)
+33 (0)1 46 88 20 20
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