La inmunogenicidad se evaluó tanto por la respuesta serológica a la inhibición de la hemaglutinación, como por la resistencia al desafio con la cepa Texas GB (velogénica viscerotrópica) en pollos vacunados por gota ocular a las tres semanas de edad. La protección con Clone-30 fue superior a B1 y comparable a La Sota. Los resultados completos se presentan en la Tabla 3. Resúmen El desarrollo de la cepa Clone-30 representa un avance significativo en el control de la enfermedad de Newcastle. Clone-30 posee las capacidades inmunizantes y de difusión de cepa La Sota y la baja reactividad de la cepa B1. Debido a su adaptabilidad, clone-30 se ajusta a cualquier programa de vacunación. Boletín Técnico marca la diferencia Cepa Clone-30 Tabla 3 Persistencia del título o de anticuerpos y resultados de desafío en pollos de engorda vacunados por gota ocular a tres semanas de edad con las cepas B1, La Sota o Clone-30 Media geométrica del título de HI Semanas posvacunación Cepas vacunal Porcentaje* de protección Media geométrica del título de HI posdesafío 0 2 4 6 Clone-30 1.0 21.3 37.1 35.1 100% 320 B1 de referencia 1.1 7.8 17.1 8.2 86% 320 La Sota de referencia 1.0 22.1 43.1 37.4 100% 320 Control sin vacunar 1.0 1.0 1.0 1.0 0% 320 Conclusiones La cepa Clone-30 es tan inmunogénica como la cepa La Sota pero menos reactiva, para reacciones respiratorias de más corta duración y más suaves. • • • • Clone-30 es más suave, pero más efectiva que la cepa B1. Clone-30 es extremadamente estable. Clone-30 no revierte a patógena. Clone-30 no siembra susceptibilidad a cepas patógenas. 1. Schloer y Hanson,1967 Daniel y Hanson,1968 Spalatin y Hanson,1976 2. Tomado del trabajo realizado en la Universidad de Georgia y el Laboratorio Internacional * de Referencia para la enfermedad de Newcastle en Weybridge, Inglaterra. Porcentaje de protección (Número de aves resistentes/Número de aves desafiadas x 100). Se desafiaron treinta aves por tratamiento con el virus Texas GB. Intervet tiene disponibles los siguientes productos con la cepa Clone-30: Vacunas Vivas: Nobilis® ND Clone 30 La dispersión del virus vacunal es muy importante, especialmente cuando la vacuna se aplica por vía agua de bebida como por aspersión. La protección en las aves vacunadas fue, una vez más, superior a B1 y comparable a La Sota, así como en la capacidad del virus vacunal en difundirse conferir protección a aves susceptibles compañeras de batería de aves vacunadas. Los resultados de este experimento se presentan en la tabla 4. Reg. SAGARPA B-0273-032 Es una vacuna liofilizada a virus activo, elaborada en embriones de pollo SPF para la inmunización de aves sanas contra la enfermedad de Newcastle. Nobilis® Clonevac 30 + Ma5 Reg. SAGARPA B-0273-063 Es una vacuna bivalente liofilizada a virus activo, elaborada en embriones de pollo SPF para la inmunización de aves sanas contra la enfermedad de Newcastle y la bronquitis infecciosa aviar. Combovac® 30 Reg. SAGARPA B-0273-076 Es una vacuna trivalente liofilizada a virus activo, elaborada en embriones de pollo SPF para la inmunización de aves sanas contra la enfermedad de Newcastle y la bronquitis infecciosa aviar. Vacunas Inactivadas: Nobilis® Newcavac Inac Tabla 4 Título de anticuerpos y mortalidad en aves White Leghorn SPF vacunadas vía agua de bebida a las 4 semanas de edad con B1, La Sota y Clone-30 Media geométrica del título de HI 4 Clone-30 1 B1 de referencia 1 La Sota de referenica 1 Control sin vacunar 1 Semanas 5 6 7 8 12 19 Resultados de desafío* a 9 semanas de edad Compañeros de bateríano vacunados Pollos vacunos * Reg. SAGARPA B-0273-012 Es una vacuna inactivada y emulsionada, para la inmunización de aves sanas contra la enfermedad de Newcastle. 9 4 5 Semanas 6 7 8 9 Pollos vacunos Compañeros de de batería no vacunados 28 35 27 1 1 8 11 17 19 100% 95% 10 15 18 14 1 1 3 5 19 9 94% 85% 13 24 28 38 30 1 1 11 13 17 19 100% 95% 1 1 1 6 1 1 Porcentaje de protección (Número de aves resistentes/Número de aves desafiadas x 100). Se desafiaron veinte pollos por grupo con el virus Texas GB. 0% n/a Nobilis® Newcastle Broiler Inac Reg. SAGARPA B-0273-084 Es una vacuna inactivada y emulsionada, para la inmunización de aves sanas contra la enfermedad de Newcastle. Nobilis® Hepatitis + ND Inac Reg. SAGARPA B-0273-109 Es una vacuna bivalente inactivada y emulsionada, para la inmunización de aves sanas contra la hepatitis con cuerpos de inclusión y la enfermedad de Newcastle. Línea de Breedervac Plus Estrés Mínimo Protección Máxima L a i n ve s t i ga c i ó n I n te r ve t m a rc a l a d i fe re n c i a Para mayor información contacte a su representante Intervet. Consulte al Médico Veterinario Zootecnista Intervet México, S.A. de C.V. Av. Paseo de los Frailes No. 22, Parque Industrial Santiago Tianguistenco, C.P. 52600, Edo de México, Tel.: 01(713) 1350-300 Fax: 01(713) 1350-354 www.intervet.com.mx Oficinas Interlomas Dirección Técnica, Tel.: (55) 5290-2527 Fax: (55) 5290-2536 050303 • Prohibida la reproducción parcial o total de este folleto sin autorización escrita de Intervet Internacional L I N E A A V I C O L A Introducción Purificación de Placa o Clonación Una capa viral puede separarse en placas (áreas locales de crecimiento viral) inoculando dosis bajas en cultivo de tejidos. Cada placa representa un virus individual y tiene distintas características. Una vez seleccionada una placa que presente los atributos deseados, la semilla viral se usa para reproducción. (Figura 1). La enfermedad de Newcastle (ENC), continúa siendo una de las enfermedades aviares más importantes. Debido a que la amenaza está siempre presente, es necesario mantener un nivel alto de inmunidad contra la ENC. A pesar de su eficacia, las vacunas vivas lentogénicas clásicas en el mercado presentan limitaciones. De cara a un desafío severo, la clásica vacuna Hitchner B1 no es capaz de conferir una adecuada protección en el campo, particularmente en presencia de anticuerpos maternos. Además la cepa Hitchner B1 confiere inmunidad de duración limitada; de ahí que sea necesario efectuar revacunaciones. Figura 1 Los datos presentados en la Tabla 2 indican que Clone-30 confiere una excelente protección con un mínimo de reacción aceptable. Población múltiple de placas La seguridad de Clone-30 fue evaluada por el índice de estrés al ser aplicada por aspersión. Dicho índice se estima como sigue: Para superar estas limitaciones, se usan las cepas vacunales La Sota, que son más inmunogénicas. Sin embargo, la inmunización con estas vacunas puede causar severos transtornos sistémicos que resulten en un incremento en la mortalidad y reducción en el rendimiento. Número de puntos (factor) Reproduce una población idéntica Escogida y probada para efectos deseados Clonación La Técnica de la Clonación en el Desarrollo de Vacunas El aumento en el conocimiento de la ENC ha revelado que no todas las cepas vacunales que tienen el mismo nombre son idénticas. Se ha demostrado que las cepas lentogénicas del virus de la ENC, así como las mesogénicas y velogénicas, consisten de poblaciones virales genéticamente heterogéneas 1. En su búsqueda para desarrollar una cepa vacunal de la ENC más inmunogénica y con un nivel aceptable de patogenicidad, los especialistas en investigación de Intervet clonaron varias cepas virales lentogénicas para separar las posibles subpoblaciones que se encontraran en ellas. Estos clones fueron después ensayados extensivamente para determinar su inmunogenicidad y patogenicidad. Uno de estos clones, obtenido de una cepa vacunal La Sota, mostró tener un nivel de patogenicidad equivalente al de la clásica Hitchner B1. Sin embargo también se encontró que confería mejor protección, especialmente cuando se administraba a pollos con anticuerpos maternos. En general, vacunas menos reactivas confieren menor protección. Aunque vacunas más inmunogénicas dan mayor protección, las ventajas se contrapesan contra los efectos adversos del incremento en la reactividad. Cada clon se deriva de un sólo virus y se estudia para detectar características favorables. Unicamente la más deseable es seleccionada y reproducida para crear una vacuna uniforme. 01234- Así, la clonación reduce la variación biológica dentro de una población viral. Este fenómeno da como resultado un agente inmunogénico más predecible, lo cual es altamente deseable en una vacuna. Este clon, designado ND Virus Clone-30, fue seleccionado para más ensayos de laboratorio y de campo. Los pollos se sangraron 21 días después de que fueron asperjados. Cada pollo de cada grupo fue observado diariamente durante diez días después de la vacunación. El número de aves que mostró determinado factor se multiplicó por el valor numérico de dicho factor, y esta cifra se dividió por el producto de multiplicar el número de aves por el número de días que fueron observados. La cantidad resultante es el índice de éstres. Un valor bajo significa menos reacción y estrés en la parvada. La tabla 2 presenta los resultados, que muestran que Clone-30 tiene un bajo índice de estrés. (Tabla 2) Pruebas de Laboratorio La cepa Clone-30 se probó para asegurar sus características como cepa lentogénica del virus de la ENC. Los resultados de este trabajo se presentan en la tabla 1, e indican claramente que Clone-30 es una cepa lentogénica del virus de la ENC. (Tabla 1) Tabla 1 Sin signos Estornudos Disnea Depresión Muerte Tabla 2 Comparaciones de Clone-30 con las cepas La Sota y B1 Características lentogénicas de Clone-30 Clone-30 La clonación consiste en seleccionar una partícula viral específica y reproducirla millones de veces para producir una vacuna uniforme. En este caso, la cepa Clone-30 se usó para producir las vacunas conocidas como Nobilis ® ND Clone 30 ®, Nobilis® Clonevac 30 + Ma5 y Combovac® 30, así como la línea de vacunas inactivadas contra la ENC. A A: B: C: Clone-30 cepa madre Cepa la Sota de referencia ICPI .06 - .18 .0 - .37 .2 .1 IVPIB .00 .00 .00 .00 MDTC 122 hrs 115 hrs 104 hrs 128 hrs Indice de patogenicidad intracerebral Indice de patogenicidad intravenosa Tiempo medio de mortalidad de embriones de pollo Clone-30 Clone-30 cepa madre Cepa la Sota de referencia Cepa B1 de referencia Indice de estrés de EidsonA .26 _ .95 .34 Indice de estrés de WeybridgeB .32 1.10 _ .41 69.20 _ Cepa B1 de referencia InmunogenicidadC A: B: C: Vacunación por aspersión a las tres semanas de edad Vacunación por aspersión a una semana de edad Media geométrica del título de HI (Eidson) 92.10 45.20