Prueba de idoneidad del sistema para el control de calidad de Aripiprazol con LC Agilent 1120 Compact y las columnas ZORBAX C-18 Nota de aplicación Cl Siji Joseph, Patric Hörth Cl O N NH N H + O O O N H N N BrH2 C Cl Cl Resumen Equipo Agilent • LC Agilent 1120 Compact • Columna ZORBAX Eclipse XDB C18 Área de aplicación • Industria farmacéutica: QA/QC El LC Agilent 1120 Compact es el sistema de elección para la cromatografía líquida convencional a escala analítica. Es un LC integrado diseñado para ofrecer sencillez de uso, rendimiento, y fiabilidad. Es adecuado para el análisis de fármacos debido a tiempos de retención y áreas de pico sumamente precisos y bajos límites de detección. Esta nota de aplicación muestra: • Excelente precisión del tiempo de retención, con una desviación estándar relativa (RSD) < 0.07%. • Excelente precisión de área, con RSD < 0.25% para picos separados a nivel de la línea base. • Excelente precisión de altura, con RSD < 0.25% para picos separados a nivel de la línea base. Introducción En la industria farmacéutica, la cromatografía líquida es una herramienta versátil para la separación de analitos individuales. Se han desarrollado innumerables métodos para el análisis de HPLC ya que se ha demostrado que es muy confiable y reproducible en todas las etapas desde el descubrimiento del fármaco hasta su fabricación. Como resultado, es necesario verificar que todo sistema HPLC funcione dentro de un rango aceptable de precisión y exactitud todos los días. La prueba de idoneidad del sistema (SST) es una medida del desempeño del instrumento día a día. Estas pruebas aseguran que el método y el sistema HPLC pueden generar resultados de precisión y exactitud aceptables. El criterio seleccionado está basado en parámetros cromatográficos críticos tales como resolución, reproducibilidad en el tiempo de retención, área y altura de los picos, eficiencia de las columnas y sus variaciones (Desviación estándar) dentro de límites aceptables, los cuales se definen durante los experimentos de validación de métodos. En esta nota de aplicación, nos enfocamos en este paso de validación final y evaluamos la idoneidad del sistema LC Agilent 1120 Compact para el análisis de Aripiprazol y sus precursores. Parte experimental Equipo El sistema LC Agilent 1120 Compact incluye: • Una bomba de gradiente con mezclado de baja presión • Un inyector automático con bandeja de viales 2 Figura 1 LC Agilent 1120 Compact. • Un compartimento de columna para una columna de hasta 250 mm de longitud • Un detector de longitud de onda variable (VWD) El Aripiprazol y los dos materiales iniciales fueron disueltos en metanol inicialmente (20% del volumen total de ajuste), y luego se agregó diluyente hasta las marcas. Se usó una columna Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18, 5µm, 150 x 4.6 mm Muestra de idoneidad del sistema: Se preparó una mezcla de prueba para la idoneidad del sistema con 10 µg/ml de Aripiprazol y cada una de las impurezas a 5 µg/ml. El instrumento fue controlado con el software de conformidad Agilent EZChrome Elite Compact. Compuestos Hidrocloruro de 1-(2,3-diclorofenil)piperazina (material inicial-1) y 7-(4-bromobutoxi)-3,4-dihidrocarbostirilo (material inicial-2) son los dos materiales iniciales para la síntesis de Aripiprazol. El esquema sintético se muestra en la Figura 2. Para este estudio, los dos materiales iniciales son tratados como impurezas. Preparación de las muestras Preparación de la solución madre: se prepararon 2 mg/ml de Aripiprazol y 5 mg/ml del material inicial-1 y del material inicial-2 como soluciones madre individuales. Parámetros cromatográficos El método cromatográfico se configuró para que todos los compuestos fueran separados a nivel de la línea base. Las condiciones fueron: • Muestra: 1-(2,3-diclorofenil) de piperazina, 7-(4-bromobutoxi)3,4-dihidrocarbostirilo y Aripiprazol • Columna: Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18, 5µm, 150 x 4.6 mm • Fases móviles: A = agua + 0.2% ácido trifluoroacético (TFA), B = acetonitrilo + 0.16% TFA • Flujo: 1.0 ml/minuto • Gradiente: a 0 minutos 30%B, a 7 minutos 70%B, luego se mantiene la relación por otros dos minutos • Volumen de inyección: 10 µl • Inyector automático programado con un vial de lavado (usando acetonitrilo) para enjuagar el exterior de la aguja • Tiempo de corrida: 9 minutos • Tiempo posterior: 5 minutos • Horno de columna: 40 °C • VWD: 254 nm, anchura de pico (PW) > 0.05 minutos • Diluyente/blanco: 60:40 acetonitrilo:agua Cl O N + NH O N N BrH2 C Al analizar fármacos con detección UV, resulta especialmente importante la precisión de los tiempos de retención. La precisión de los tiempos de retención y de las áreas se determinó a partir de las 10 inyecciones repetidas de una muestra de idoneidad del sistema. La Figura 4 muestra una superposición de 10 corridas consecutivas. Los criterios de aceptación para este estudio de idoneidad del sistema están tabulados en la tabla 2. Cl Cl Figura 2 Estructuras de material inicial-1 y material inicial-2 y el producto Aripiprazol. Línea Ubicación Nombre de la muestra Nº de inyecciones Volumen de inyección (µl) 1 2 3 Vial 1 Vial 2 Vial 3 Blanco Idoneidad del sistema Blanco 3 10 1 10 10 10 Tabla 1 Tabla de secuencias. 80 Resultados y discusión Material inicial-1 Material inicial-2 60 mUA En la Figura 3, un cromatograma de ejemplo para la prueba de idoneidad del sistema muestra una excelente resolución. El tiempo de separación fue de nueve minutos; el tiempo total de análisis (incluyendo la vuelta al equilibrio) se pudo limitar a 14 minutos. La fase móvil contenía ácido trifluoroacético como modificador, el cual mejoró la retención y la forma de los picos. O N H O N H Aripiprazol Tabla de secuencias Basada en las recomendaciones de la ICH (Conferencia internacional sobre la armonización) para las pruebas de idoneidad del sistema, la tabla de secuencias que aparece como tabla 1 fue configurada en el software de cumplimiento Agilent EZChrom Elite Compact. Cl 40 20 0 0 2 4 6 Tiempo [minutos] 8 Figura 3 Cromatograma de Aripiprazol y sus impurezas. Parámetro Límite RSD del tiempo de retención (RT) RSD del área Resolución Asimetría Platos teóricos Ancho del pico < 0.07 % < 1.00 % > 2.00 < 2.00 > 2000 < 0.08 minutos < 0.50 % RSD de la altura Tabla 2 Criterios de aceptación. 3 Compuesto Material inicial-1 Aripiprazol Material inicial-2 Cantidad (µg/ml) 5.15 10.1 5.4 RSD de RT (%) 0.033 0.027 0.021 RSD de área (%) 0.189 0.129 0.137 PW Asimetría Platos teóricos NA 17.87 17.48 0.07 0.05 0.06 1.02470 1.14031 1.09432 >14000 >58000 >60000 RSD de altura (%) 0.228 0.183 0.169 Aprobado (sí/no) Sí Sí Sí *N/A = no aplica 80 Los resultados de la prueba de idoneidad del sistema se muestran en la Figura 4 y se resumen en la tabla 3. 60 mUA Tabla 3 Resultados de la prueba de idoneidad del sistema. Estos resultados de la prueba de idoneidad del sistema para Aripiprazol muestran que LC Agilent 1120 Compact cumple con los rigurosos requisitos de desempeño para análisis farmacéuticos QA/QC. Resolución 40 20 Conclusión Para el análisis de fármacos en controles de calidad de rutina, es muy importante tener sistemas LC sumamente precisos, exactos y sólidos. Esto permite análisis confiables de fármacos farmacéuticos y sus impurezas. El sistema LC Agilent 1120 Compact se adapta bien para esta aplicación porque proporciona la calidad de datos necesaria y está basado en un diseño sólido probado. 0 2 4 6 Tiempo [minutos] 8 10 Figura 4 Superposición de 10 cromatogramas repetitivos. Siji Joseph es un científico de aplicaciones en Agilent Technologies Life Science Center en Bangalore, India. Patric Hörth es químico de I&D en Agilent Technologies en Waldbronn, Alemania. www.agilent.com/chem/1120 © 2008 Agilent Technologies Inc. Publicado el 1º de junio de 2008 Número de publicación 5989-8333ESMX