Guía de la asignatura Créditos totales: 9 ECTS MICROBIOLOGIA Grado de Biotecnología 2º curso. OBJETIVOS Y COMPETENCIAS El mundo de los microbios, aunque invisible, incluye la mayor biodiversidad de sistemas vivos que existe en la Tierra, y este mundo microscópico influencia a todas las otras formas de vida. Los microorganismos ofrecen recursos y estrategias ausentes en otros niveles de organización y presentan una enorme importancia básica y aplicada. El curso analiza a grandes rasgos la diversidad microbiana y su papel en la naturaleza, ya que el conocimiento de sus actividades es fundamental para dirigir y emplear su extenso potencial en procesos biotecnológicos de interés para el hombre. El control, manipulación y modificación de los microorganismos constituye la base de muchas realizaciones biotecnológicas actuales. El programa teórico de la asignatura está dividido en secciones temáticas que resumen los conocimientos y competencias que el alumno debe adquirir a lo largo del aprendizaje. Este programa se complementa con sesiones prácticas, que cubren aspectos básicos y esenciales de la Microbiología en relación con la Biotecnología. Los objetivos fundamentales de cada sección se especifican en la información que acompaña a los diversos temas. DESARROLLO DEL CURSO Incluyendo el tiempo dedicado a evaluaciones (4 horas; 5%), se proponen 81 horas presencia les (100%) para el alumno durante el calendario y horario oficial del curso, que se distribuirán en las actividades que se citan a continuación. El resto de horas hasta cubrir los 9 créditos totales ECTS corresponde a estudio y dedicación no presencial por parte del alumno. Clases de teoría (56 horas; 69%) Presentación y desarrollo, en el formato de clase magistral, de 30 temas especificados en el programa de clases de teoría de la asignatura. A lo largo del curso se plantearán preguntas ocasionales a los alumnos en relación con el tema expuesto, que servirán como control de asistencia. Seminarios (5 horas; 6%) Al acabar determinadas secciones del programa de teoría, se facilitará una relación de temas apropiados para seminarios y se establecerán grupos de tres/cuatro alumnos voluntarios para la elaboración, presentación y discusión de cada tema elegido. En los días señalados al efecto, los voluntarios de cada grupo -de manera conjunta o individual- procederán a la presentación del tema correspondiente en sesiones expositivas de 30 minutos, con control de asistencia. Prácticas de laboratorio (12 horas; 15%) Cada alumno realizará 4 sesiones prácticas de la boratorio, de 3 horas cada una, con arreglo al temario de clases prácticas. La realización de al menos el 75% de esta actividad es obligatoria para superar la asignatura, y su evaluación se hace conjuntamente con la de las clases de teoría. 1 Tutorías individuales (voluntarias) y en grupo (4 horas; 5%) Para cualquier consulta individual, el profesorado estará a disposición de los alumnos en el horario de tutorías indicado mas adelante. Por otro lado, habrá 4 horas de tutoría conjunta adicional para todos los alumnos, distribuidas a lo largo del curso (normalmente a mediados y final de curso). En ellas, podrán solicitar aclaraciones sobre clases ya impartidas o plantear cualquie r duda o asunto relacionado con la asignatura. La asistencia a las tutorías individuales es voluntaria, pero habrá control de asistencia para las tutorías en grupo. EVALUACION Y CALIFICACIONES 1.- Evaluación continuada por curso Para evaluar periódicamente el proceso de aprendizaje se realizarán -en convocatorias programadas- dos controles escritos, con 25 cuestiones tipo test y dos temas cortos que, en cada caso, versarán sobre el temario teórico y el práctico. Cada respuesta correcta en el test se calificará con 0.2 puntos, la errónea descontará 0.1 puntos y no se computarán respuestas en blanco. El desarrollo de cada tema corto se puntuará sobre 2.5 puntos. Será necesario superar un total de 5 puntos para aprobar cada examen parcial. Estas puntuaciones no son compensatorias ni trasladables de un año a otro. La superación de ambos exámenes parciales supone aprobar por curso sin necesidad de realizar el examen final, salvo que se quiera aumentar nota (en cuyo caso, en el examen final mantendrán como mínimo la calificación ya obtenida por curso). 2.- Examen final Los alumnos que no hayan demostrado a lo largo del curso la suficiencia requerida en pruebas escritas realizarán un examen final de tipo oral o escrito, a su elección. En el primer caso, consistirá en la exposición de dos temas del programa sacados a sorteo y se evaluará con una calificación máxima de 10 puntos, siendo necesarios 5 puntos para superar el curso. En el segundo caso, la prueba será de naturaleza similar a la indicada en la evaluación continuada. Los alumnos que hubieran aprobado por curso y desearan subir nota, podrán efectuar una prueba adicional de tipo oral, manteniendo cuando menos la calificación previamente obtenida. 3.- Valoración de otras actividades La evaluación global de otras actividades (regularidad en la asistencia a clases, prácticas, tutorías, elaboración en su caso de informes, y participación en seminarios) puede aumentar la calificación final hasta 1,5 puntos, siempre que se hayan superado los requisitos exigidos para aprobar por evaluación continuada o por examen final. CRONOGRAMA La impartición de enseñanzas seguirá la secuencia indicada en los horarios oficiales establecidos en el Grado para este curso. PROFESORADO Profesor de teoría: Mariano Gacto /Tutorías: Lunes y Martes, 16-19 h Profesora de clases prácticas: Teresa Soto / Tutorías: Miércoles y Jueves, 16-19 h 2 PROGRAMA TEORICO DE LA ASIGNATURA Sección 1. Introducción Tema 1. El descubrimiento del mundo microbiano. La controversia sobre la generación espontánea. La fermentación y la vida anaerobia. Los cultivos puros. Microorganis mos y enfermedades. Desarrollo de la inmunización y la quimioterapia. Los microorganismos como agentes biogeoquímicos. La Microbiología actual. Tema 2. Los microorganismos en la escala biológica. Propiedades de los sitemas vivos: unidad bioquímica y diversidad celular. Niveles de organización. El concepto de protista. Los tres dominios de Woese. Células procariotas (bacterias y arqueas) y eucariotas: diferencias estructurales y funcionales. Principales grupos de microorganismos. Los microorganismos y el proceso evolutivo. Objetivos: (i) Introducir el concepto de la Microbiología como ciencia y los hitos históricos de su desarrollo, ilustrando el papel de los microorganismos como agentes transformadores de la materia,l como causantes de enfermedades y como instrumentos útiles en diversas actividades humanas. (ii) Destacar la noción de microorganismo como objeto material de estudio y su situación en el conjunto de los seres vivos, resaltando diferencias entre la organización procariota y eucariota. Presentar una visión moderna de los campos actuales y el futuro desarrollo de la Microbiología en relación con otras ciencias. Sección 2. Técnicas básicas en Microbiología Tema 3. Cultivo de microorganismos. Necesidades nutricionales. Factores limitantes. Captación de nutrientes. Tipos de medios de cultivo. Técnicas de aislamiento de cultivos puros. Mantenimiento y conservación de cultivos. Colecciones de microorganismos. Tema 4. Observación microscópica de microorganismos. Fundamentos de microscopía óptica y tipos de microscopios. Amplificación, poder de resolución y contraste. Observación directa y técnicas de tinción. Tinciones simples, diferenciales y específicas. Microscopía electrónica. Objetivos: (i) Iniciar al alumno en la metodología del cultivo microbiano como base del estudio de microorganismos aislados en forma de cultivos puros. (ii) Presentar las diversas técnicas de observación microscópica de los microorganismos y su fundamento, objetivo que, junto a otros de este y otros bloques, se complementan con clases prácticas de laboratorio. Sección 3. Estructura y función en microorganismos procariotas Tema 5. La célula procariota (I). Morfología externa, tamaño y disposición. La membrana plasmática de bacterias y arqueas. Principales mecanismos de transporte especializado en procariotas. Composición, estructura y función de la pared celular: bacterias gram-positivas y gram-negativas. Biosíntesis de peptidoglicano. La pared celular de arqueas. Tema 6. La célula procariota (II). Cápsulas microbianas: naturaleza y composición.Movimiento bacteriano. Flagelos: disposición, estructura y bases del 3 movimiento flagelar. Tipos de tactismos. Fimbrias. Citoplasma, ribosomas y región nuclear. Inclusiones de reserva y otras formaciones intracelulares. Esporulación y germinación. Objetivos: (i) Conocer las propiedades morfológicas de bacterias y arqueas y sus implicaciones biológicas. (ii) Describir sus principales componentes superficiales e intracelulares, su papel fisiológico, y presentar estrategias de resistencia y diferenciación frente a condiciones ambientales adversas en la naturaleza. (iii ) Resaltar característic as distintivas y analizar aspectos comparativos de la estructura y función de la célula procariota. Sección 4. Crecimiento y control Tema 7. Análisis del crecimiento microbiano. Crecimiento celular y poblacional. Métodos de determinación del crecimiento: recuento de totales y viables. Fases de la curva del crecimiento microbiano. Expresión matemática del crecimiento exponencial. Concepto del tiempo de generación. Percepción del quorum. Nociones de cultivo continuo y cultivo sincrónico. Tema 8. Factores ambientales y crecimiento. Temperaturas cardinales y adaptaciones microbianas: psicrófilos, psicotrofos, mesófilos y termófilos. Efectos de la presión osmótica: halófilos, osmófilos y xerófilos. Presión hidrostática. Rangos de pH. Potencial redox. Concepto de aerobio, anaerobio, facultativo y aerotolerante. Defensas frente al oxígeno. Tema 9. Métodos de control. Esterilización y desinfección. Esterilización por calor húmedo y por calor seco. Tiempo de muerte térmica y de reducción decimal. Mecanismo de acción y valoración de otros agentes físicos y químicos de control. Tema 10. Agentes quimioterápicos (I). Toxicidad selectiva: sulfamidas y antibióticos. Inhibidores de la pared celular: beta-lactámicos y otros antibióticos que bloquean la síntesis de peptidoglicano. Antibióticos que afectan la síntesis proteica. Tema 11. Agentes quimioterápicos (II). Antibióticos que actúan sobre membranas. Antibióticos que interfieren la replicación del ADN. Mecanismos de resistencia a los antimicrobianos. Prevención de resistencias y búsqueda de nuevos productos antimicrobianos. Objetivos: (i) Analizar el crecimiento poblacional de los microorganismos y caracterizar los parámetros que definen el crecimiento exponencial, esquematizando el funcionamiento del quimiostato y del cultivo sincronizado y sus aplicaciones. (ii) Conocer los factores que afectan a la velocidad de crecimiento microbiano en el laboratorio y en ecosistemas naturales. (iii) Destacar los conceptos de esterilización y desinfección, y desarrollar los métodos físicos y químicos empleados para el control del crecimiento. (iv ) Describir el modo de acción de los principales grupos de agentes quimioterápicos, los métodos de valoración de su actividad y su aplicació n potencial en procesos biotecnológicos dirigidos. Sección 5. Diversidad metabólica de los microorganismos 4 Tema 12. Fototrofía: fotosíntesis oxigénica y anoxigénica. Pigmentos fotosintéticos. Fotoautotrofía: el ciclo de Calvin y otras vías autótrofas en los fotótrofos. Tema 13.Quimiolitotrofía: oxidación del hidrógeno y del monóxido de carbono, compuestos reducidos del azufre y del hierro. Nitrificación y anamox. Tema 14. Quim iorganotrofía (I). Fermentaciones: consideraciones energéticas. Fermentaciones del ácido láctico, butilenglicólica y ácido mixta. Fermentación acetobutírica y de la acetona-butanol. Reacción de Stickland. Respiración aerobia. El efecto Pasteur en microorganismos facultativos Oxidaciones aerobias de metilotrofos y metanotrofos Tema 15. Quimiorganotrofía (II). Respìración anaerobia: desnitrificación, reducción de sulfatos y de azufre. Acetogénesis . Metanogénesis: vías alternativas. Bioluminiscencia. Tema 16. Fijación del nitrógeno en la naturaleza. Nitrogenasa y enzimas alternativas. Flujo de electrones. Valoración de la nitrogenasa. Regulación de la fijación. Transporte especializado. Objetivos: (i) Adquirir conocimientos sobre los tipos nutricionale s microbianos según la fuente energética y la fuente de carbono empleada para el crecimiento, estableciendo en cada caso los mecanismos de obtención de energía. (ii) Introducir el concepto de fermentacion microbiana y su diversidad, incidiendo en los aspectos aplicados de las mismas. (iii) Resaltar las diversas estrategias metabólicas utilizadas por los microorganismos que están ausentes en organismos superiores. (iv) Proporcionar evidencias puntuales sobre la capacidad de los microorganimos para utilizar la energía en procesos especializados, como la fijación de nitrógeno o el transporte por traslocación. Sección 6. Principales taxones de los procariotas Tema 17. El proceso evolutivo: aspectos teóricos y analíticos. Origen endosimbiótico de los eucariotas. Análisis fenotípico, genotípico y filogenético en la sistemática microbiana. Concepto de especie y cepa microbiana. Detección de microorganismos no cultivados. El manual Bergey y los procariotas. El árbol filogenético universal y los dominios Bacteria y Arquea Tema 18. Dominio Bacteria. Proteobacterias fotótrofas o quimiolitótrofas: Bacterias fotótrofas rojas (Chromatium, Rhodospirillum). Bacterias verdes sulfúreas (Chlorobium) y no sulfúreas (Chloroflexus). Cianobacterias Bacterias nitrificantes (Nitrosomonas, Nitrobacter), oxidantes de azufre y hierro (Thiobacillus) o hidrógeno (Paracoccus). Tema 19. Bacterias metanótrofas y metilótrofas (Methylomonas, Methylobacter). Tema 20. Proteobacterias quimiorganótrofas aerobias y anaerobias facultativas. Las pseudomonadáceas (Pseudomonas). Bacterias del ácido acético (Acetobacter, Gluconobacter). Bacterias fijadoras de nitrógeno (Azotobacter, Rhizobium). El grupo de las Enterobacterias (Escherichia, Salmonella …). Los géneros Vibrio y Photobacterium. Tema 21. Las rickettsias. Otras proteobacterias de interés (Agrobacterium, Brucella, Bordetella, Neisseria, Legionella…). Proteobacterias de morfología no usual: espirilos, bacterias con vaina y prostecadas. Las mixobacterias deslizantes (Myxococcus). 5 Bacterias reductoras de sulfato y azufre (Desulfovibrio, Desulfobacter). Proteobacterias del grupo épsilon. Tema 22. Bacterias gram-positivas con bajo contenido en G+C. No formadoras de endosporas (Staphylococcus, Lactobacillus…). Formadoras de endosporas (Bacillus, Clostridium, Heliobacterium…). Bacterias sin pared celular (Mycoplasma). Tema 23. Bacterias gram-positivas con alto contenido en G+C. Bacterias corineformes y del ácido propiónico (Corynebacterium, Propionibacterium). Las micobacterias. Actinobacterias filamentosas (Streptomyces). Tema 24. Las clamidias. Las flavobacterias. El grupo Cytophaga. Las espiroquetas. El grupo Deinococcus-Thermus. Bacterias hipertermófilas. Tema 25. Dominio Arquea. Biología molecular de arqueas. Las euriarqueas. Halófilas extremas (Halobacterium), metanogénicas (Methanobacterium), termoplasmatales e hipertermófilas ( Thermococcus , Archaeoglobus, Nanoarchaeum). Tema 26. Las crenarqueas. Hábitats y metabolismo energético (Sulfolobus, Pyrodictiun). Crenarqueas no termófilas. Adaptaciones a la vida a alta temperatura. Objetivos: (i) Proporcionar información sobre la antiguedad y extensión de la vida microbiana, ofreciendo una visión actualizada de su complejidad. (ii) Manejar los conceptos básicos y los criterios generales empleados en la taxonomía de los procariotas siguiendo las directrices de la clasificación filogenética del manual de Bergey. (iii) Presentar un panorama global de la biodiversidad del mundo de los procariotas complementada con su extensa variedad fisiológica. (iv) Conocer las especies microbianas más importantes destacando su propiedades más relevantes y distintivas, su localizacioón ecológica, y abordando con énfasis especial su potencial interés industrial o biotecnológico. Sección 7. Micología Tema 27. Los hongos como modelo de microorganis mos eucariotas. Las levaduras y su estilo de vida. La pared celular en hongos y levaduras. Compuestos antifungicos: dianas y modo de acción. Objetivos: (i) Describir las propiedades biológicas de las levaduras como sistema modelo de microorganismos eucariota, teniendo en cuenta su amplia utilización como herramientas biotecnológicas y su importancia clínica. Sección 8. Fundamentos de biotecnología microbiana Tema 28. Utilización de microorganismos y productos de interés industrial. Metabolismo primario y secundario. Ais lamiento y producción de antibióticos. Vitaminas, aminoácidos y enzimas. Biotransformaciones. Tratamientos de aguas residuales. Tema 29. Los microorganismos en la industria alimentaria. Elaboración de vinos y cervezas. Obtención de ácido acético y ácido cítrico. Agentes de fermentación y empleo de los microorganismos como suplemento alimenticio. 6 Tema 30. Microorganismos modificados. Expresión de genes heterólogos en microorganismos. Producción de hormonas y vacunas. Vectores de transferencia en agricultura. Insecticidas microbianos: toxinas-Bt. Objetivos: (i) Presentar nociones básicas sobre el empleo de los microorganismos en actividades humanas de interés industrial, desarrollando los fundamentos de su utilización. (ii) Establecer las bases científicas y tecnológicas del uso de los microorganismos como introducción didáctica a cursos especializados sobre Biotecnología Microbiana o Microbiología Aplicada. SESIONES PRACTICAS DE LABORATORIO (3 horas cada una) Sesión 1.- Normas de trabajo. Esterilización y medios de cultivo: utilización, preparación y manejo. Técnicas básicas de siembra y aislamiento de microorganismos. Recuento de totales. Medios comunes, selectivos y diferenciales. Análisis en fresco de caracteres microscópicos. Aislamiento de bacterias endosporuladas. Sesión 2.- Observaciones microscópicas en muestras teñidas. Tinciones simples y diferenciales (Tinción de Gram y de Ziehl-Neelsen). Tinciones específicas. Sesión 3. - Recuento del número de viables. Caracterización bioquímica de microorganismos y sus aplicaciones en la identificación. Pruebas Kligler, Hugh-Leifson, IMViC, catalasa y oxidasa. Demostración identificativa mediante tiras multitest API 10S. Sesión 4. - Microorganismos del aire, agua y suelos. Análisis de microorganismos presentes en derivados lácteos. Observación de Rhizobium en nódulos de leguminosas que fijan nitrógeno. Microorganismos de la flora normal del cuerpo humano. BIBLIOGRAFIA GENERAL Madigan M.T. et al. (2009) “Brock: Biología de los microorganismos”, 12ª ed. Ed. Pearson [El texto de Microbiología general más extendido en el mundo, con excelente nivel y buenas ilustraciones ] Prescott L.M. et al. (2009) “Microbiología”, 7ª ed. Ed. Mc Graw Hill. [Moderno, claro y bien ilustrado] Schaechter M. et al. (2006) “Microbe”, 1ª ed. American Society for Microbiology. [En inglés, presenta una visión original de temas generales y específicos] Kun L.Y. (2008) “Microbial biotechnology: principles and applications””, 2ª ed. World Scientific. [En inglés, desarrolla aspectos aplicados de la Microbiología] Smith J.E. (2009) “Biotechnology”, 5ª ed. Cambridge University Press [En inglés, capítulos especializados sobre el im pacto de los microorganismos en la biotecnología ] 7