stachrom® antiplasmin - Annar Diagnóstica Import

- STACHROM® ANTIPLASMIN
Determinación colorimétrica de la antiplasmina
• Contenido del kit:
– 4 viales de Reactivo 1 (Plasmin)
– 4 viales de Reactivo 2 (Substrate)
– 4 viales de Reactivo 3 (Plasmin Solvent)
(REF 00659)
Agosto 2011
Español 6
1/ UTILIZACIÓN DEL KIT
El kit STA® - Stachrom® Antiplasmin está destinado a ser utilizados con
analizadores de la línea STA® compatibles con estos reactivos para
determinar cuantitativamente el nivel de actividad de antiplasmina en el
plasma recurriendo al método del sustrato cromogénico sintético.
2/ SUMARIO
La α2-antiplasmina es una glicoproteína de cadena simple de peso
molecular de aproximadamente 65 000 daltons (9). Ésta reacciona con la
molécula de plasmina para formar un complejo en proporciones
estequiométricas (9). Su rápida acción con la plasmina sugiere que es un
importante regulador de la fibrinolisis. Bajo el efecto del factor XIIIa, la
α2-antiplasmina se puede ligar a las cadenas α de fibrina (10).
La α2-antiplasmina se sintetiza en el hígado. Su nivel disminuye durante
las enfermedades del hígado (7). La medición del nivel de antiplasmina es
útil en:
– la detección de deficiencias congénitas poco frecuentes (6, 8). Estas
deficiencias están asociadas con tendencias hemorrágicas (6,10)
– los tratamientos fibrinolíticos (9): una disminución del nivel de
α2-antiplasmina es evidencia de que los tratamientos son efectivos (5)
– como una prueba auxiliar en el diagnóstico de la coagulación
intravascular diseminada (CID) (4).
3/ PRINCIPIO DEL TEST
En presencia de plasmina añadida (Reactivo 1), la muestra de plasma de
prueba presenta un potencial rápido y poderoso para inhibir la plasmina, y
ésta inhibición es ejercida por la antiplasmina presente en el plasma de
prueba. El ensayo STA® - Stachrom® Antiplasmin se lleva a cabo en dos
pasos:
– Incubación del plasma de prueba con un exceso conocido de plasmina
antiplasmina + plasmina
plasmina-antiplasmina + plasmina
(exceso)
(residual)
– Determinación de la plasmina residual por su actividad amidolítica sobre
el sustrato cromogénico sintético CBS 10.85 (Reactivo 2) (se libera pNA
a 405 nm).
La cantidad residual de plasmina (medida por la liberación pNA) es
inversamente proporcional al nivel de antiplasmina que contiene la
muestra.
4/ COMPOSICIÓN DEL KIT
Cada estuche de STA® - Stachrom® Antiplasmin contiene una hoja con
código de barras. Este código de barras contiene las siguientes
informaciones: número de lote, referencia del kit, referencia del reactivo,
fecha de caducidad.
• Reactivo 1: plasmina humana, liofilizada. La actividad de la plasmina por
vial es de aproximadamente 26 nKat.
• Reactivo 2: sustrato cromogénico CBS 10.85, aprox. 12 µmoles por vial
de MM-L-Tyr-Arg-pNA, AcOH, liofilizado.
• Reactivo 3: vial de 2 ml de solvente que contiene glicerina. Este solvente
se utiliza en la reconstitución del Reactivo 1 (plasmina).
El Reactivo 3 contiene azida sódica (< 1 g/l) como conservante.
Es preciso eliminar con precaución los reactivos que contienen azida sódica. Si estas
soluciones se vierten en el desagüe del lavabo, enjuagar con abundante agua para evitar la
formación de azidas metálicas que, si están concentradas, pueden provocar explosiones.
Algunos reactivos de este kit contienen productos de origen humano y/o animal. Cuando se
ha utilizado plasma humano en la preparación de estos reactivos, se excluye previamente la
presencia del antígeno HBs, de los anticuerpos anti-HCV, anti-HIV 1 y anti-HIV 2 con los
correspondientes análisis. Sin embargo, ningún test puede garantizar de manera absoluta la
ausencia de agentes infecciosos. Por eso, estos reactivos de origen biológico han de ser
manipulados con las precauciones habituales, ya que se trata de productos potencialmente
infecciosos.
5/ PRECAUCIONES
Los estuches intactos se deben conservar a 2-8 °C. Estos reactivos se
destinan exclusivamente a un uso in vitro y deben ser manipulados por
personal autorizado del laboratorio. Utilizar únicamente reactivos de un
mismo kit o de un mismo lote. Los residuos se eliminarán con arreglo a la
reglamentación local vigente.
El estuche STA® - Stachrom® Antiplasmin esta diseñado para los aparatos
de la línea STA® que pueden utilizar estos reactivos. Antes de cualquier
utilización, leer con atención el “Manual del Operador” del instrumento
utilizado. Tener cuidado en el manejo de estos reactivos y las muestras.
6/ OBTENCIÓN Y TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
10/ RESULTADOS
La obtención de la muestra debe ajustarse a las recomendaciones para las
pruebas de hemostasia.
• Obtención de sangre en solución de citrato trisódico 0,109 M: 1 vol. de
citrato por 9 vol. de sangre.
• Centrifugación :15 minutos a 2000-2500 g.
• Conservación del plasma: 8 horas a 20 ± 5 °C
1 mes a –20 °C. Atemperar la muestra a
37 °C el tiempo necessario y suficiente para
que la descongelación sea completa.
El nivel de antiplasmina (%) de las muestras analizadas aparece en tiempo
real en la pantalla del aparato (ver el “Manual del Operador”). El resultado
debe interpretarse en función del estado clínico y biológico del paciente.
Si el aparato señala que los resultados obtenidos para los controles se
sitúan fuera del intervalo de valores indicado en la hoja incluida en el
estuche, es preciso asegurarse del buen funcionamento de todo el
sistema: condiciones de ensayo, reactivos, calibración, plasmas en los que
se efectúa el test, etc. Si es necesario, repetir las muestras.
11/ LIMITACIONES
7/ CONSERVACIÓN Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Conservados a 2-8 °C en su embalaje original, los reactivos son estables
hasta la fecha de caducidad indicada en el estuche.
• Reactivo 1
Agitar bien un vial de Reactivo 3 (R3). Luego, reconstituir cada vial de
Reactivo 1 con el contenido de un vial de Reactivo 3, incluido en el
mismo estuche. Dejar estabilizarse la solución durante 60 minutos a
temperatura ambiente (18-25 °C). Homogenizar. Luego, añadir un
STA® - mini Reducer nuevo (REF 00797) y el tapón perforado antes de
cargar el vial en el analizador.
Una vez reconstituido: estable 8 días en su vial original con STA® - mini
Reducer y tapón perforado en STA Compact® y STA-R®.
• Reactivo 2
Reconstituir cada vial con 6 ml de agua destilada. Dejar estabilizarse la
solución durante 60 minutos a temperatura ambiente (18-25 °C).
Homogenizar. Luego, añadir un STA® - mini Reducer nuevo (REF 00797)
y el tapón perforado antes de cargar el vial en el analizador.
Una vez reconstituido: estable 8 días en su vial original con STA® - mini
Reducer y tapón perforado en STA Compact® y STA-R®.
No se debe congelar.
• Reactivo 3 (R3) listo para emplear. Agitar bien el vial antes de usarlo
para reconstituir el Reactivo 1.
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12/ VALORES NORMALES
El nivel plasmático de antiplasmina en adultos suele estar comprendido entre
el 80 y el 120 % (9). Sin embargo, cada laboratorio debería establecer sus
propios valores normales.
13/ CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
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8/ REACTIVOS Y MATERIALES AUXILIARES
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STA® - Owren-Koller (REF 00360).
STA® - Unicalibrator (REF 00675).
STA® - System Control N + P (REF 00678): controles normal y
anormal.
Instrumento de la línea STA® que puede utilizar estos reactivos.
STA® - mini Reducer (REF 00797).
Equipamiento habitual en los laboratorios de análisis médicos.
9/ PROCEDIMIENTO
9.1. Calibración
La calibración se lleva a cabo con la ayuda de los estuches
STA® - Unicalibrator. Preparar STA® - Unicalibrator y tranferir al
aparato las informaciones contenidas en los códigos de barras de la
hoja. Los estándares son preparados automáticamente por el
analizador, diluyendo con tampón Owren-Koller de acuerdo a los
parámetros ingresados en el instrumento para la dosificación. El
tampón Owren-Koller sólo representa 0 % de los puntos.
La curva de la calibración se puede ver en la pantalla del instrumento
con la ayuda del menú “Calibración” (ver el “Manual del Operador”).
9.2. Plasma del paciente
Los plasmas a testar han de estar sin diluir. Introducirlos en el
instrumento (ver el "Manual del Operador" del instrumento utilizado).
Las diluciones con el tampón Owren-Koller son preparadas
automáticamente por el instrumento.
Seleccionar el(los) test(s) a efectuar en los plasmas de pacientes.
9.3. Controles
Los controles son necesarios para verificar la exactitud y la
reproducibilidad de los resultados. Se deben utilizar dos diferentes
niveles de control. Utilice STA® - System Control N + P . Preparar
los controles y transferir la información contenida en el código de
barras impreso en su respectivos insertos, al instrumento. Estos
controles se utilizan han de estar sin diluir; la dilución con el tampón
Owren-Koller es preparada automáticamente por el analizador.
9.4. Dosificación
Para la realización de la dosificación, seguir los protocolos descritos
en los “Standardized Operating Procedures” del instrumento.
El aparato lleva a cabo automáticamente la dosificación de la
antiplamina de los plasma a probar a 405 nm, a medida que se van
introduciendo las muestras. Si cualquiera de los resultados del
paciente queda fuera del rango de trabajo de la dosificación, el
instrumento revalora automáticamente la muestra en según una
dilución apropiada, siempre que esta opción haya sido intoducida en
la configuración de la prueba (ver el “Manual del Operador”).
No utilice plasmas obtenidos con tubos de recolección que contengan
cualquiera de los inhibidores de plasmina (ej.: ácido ε-aminocaproico (1),
aprotinina...) o heparina (1).
Una sobreestimación del nivel de antiplasmina se puede observar en
pacientes que reciben terapia con aprotinina.
Se ha demostrado que la hemoglobina, la bilirrubina y los triglicéridos no
interfieren con la determinación si sus concentraciones son inferiores,
respectivamente, a 6 g/l, 900 µmol/l y 7 g/l.
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Especificidad
La actividad antiplasmina determinada por el método amidolítico está
relacionada con α2-antiplasmina o antiplasmina de acción rápida (1, 2).
La especificidad de STA® - Stachrom® Antiplasmin está garantizada por:
– el corto tiempo de inhibición (30 segundos)
– la elevada fuerza iónica del medio de reacción la cual reduce al
mínimo la interferencia de α2-macroglobulina (3)
– la inclusión de inhibidores en el reactivo, tales como hirudina o
Polybrene® los cuales eliminan la interferencia de la trombina y
heparina a niveles terapéuticos.
En algunos casos, no se puede evitar una ligera interferencia de
α2-macroglobulina, por ejemplo cuando el nivel de α2-antiplasmina está
muy decaído frente a la presencia de un alto nivel de α2-macroglobulina.
Intervalo de medición - Límite de detección
En la STA®, la linealidad de la dosificación se observa hasta una
actividad de 130 %; el valor del límite de detección es 7 %.
Reproducibilidad
Se han realizado estudios de reproducibilidad intra e inter-series con
muestras normales y anormales. Los resultados obtenidos con
STA® - Stachrom® Antiplasmin por la STA® se indican en la siguiente
tabla:
BIBLIOGRAFÍA
1. TEGER-NILSSON A.C., FRIBERGER P., GYZANDER E.:
“Determination of a new rapid plasmin inhibitor in human blood by
means of a plasmin specific tripeptide substrate”. Scand. J. Clin. Lab.
Invest., 37, 403-409, 1977.
2. NAITO K., AOKI N.:
“Assay of α2-plasmin inhibitor activity by means of a plasmin specific
tripeptide substrate”. Thromb. Res., 12, 1147-1156, 1978.
3. GYZANDER E., TEGER-NILSSON A.C.:
“Activity of the α2-macroglobulin-plasmin complex on the plasmin
specific substrate H-D-Val-Leu-Lys-p-nitroanilide”. Thromb. Res., 19,
165-175, 1980.
4. SAMAMA M., SCHLEGEL N., CAZENAVE B., HORELLOU M.H.,
CONARD J., CASTEL M., DOUENIAS R.:
“α2-antiplasmin assay: amidolytic and immunological method. Critical
evaluation. Results in a clinical material” in “Synthetic substrates in
clinical blood coagulation assays”, Lijnen H.R., Collen D., Verstraete
M., La Haye: Martinus Nijhoff, 93-101, 1980.
5. LASIERRA J., DIEZ M., PERERA C., VILADES E.:
“Plasmin inhibitors in different fibrinolytic treatment patterns”.
Haemostasis, 10, 51-62, 1981.
6. TAMAKI T., SAKATA Y., AOKI N.:
“Survival of transfused α2-plasmin inhibitor in a patient with its
congenital deficiency”. Thromb. Res., 22, 281-286, 1981.
7. WOHL R.C., SINIO L., ROBBINS K.C.:
“Methods for studying fibrinolytic pathway components in human
plasma”. Thromb. Res., 27, 523-535, 1982.
8. YOSHIOKA A., KAMITSUJI H., TAKASE T., IIDA Y., TSUKADA S.,
MIKAMI S., FUKUI H.:
“Congenital deficiency of α2-plasmin inhibitor in three sisters”.
Haemostasis, 11, 176-184, 1982.
9. SAMAMA M., CONARD J., HORELLOU M.H., LECOMPTE T.:
“Physiologie et exploration de l’hémostase”. Paris: Doin, 197-199, 1990.
10. SAMPOL J., ARNOUX D., BOUTIERE B.:
“Manuel d’hémostase”. Paris: Editions scientifiques et médicales
Elsevier, 67-68, 171, 1995.
Reproducibilidad intra-serie Reproducibilidad inter-serie
Muestra
_n
X (%)
SD (%)
CV (%)
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Muestra 4
21
101
2,0
2,0
21
47
1,8
3,8
10
98
3,5
3,6
10
46
1,8
3,9
Los cambios significativos son indicados por las líneas punteadas en el margen.
DIAGNOSTICA STAGO S.A.S.
9 rue des Frères Chausson
92600 Asnières sur Seine (France)
+33 (0)1 46 88 20 20
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