El Laboratorio Clínico y HbA1c y

El Laboratorio Clínico y HbA1c
y
Dra. Verónica Ramírez M.
Sudepto. Coordinación Externa
Depto . Laboratorio Biomédico Nacional y de Referencia
26 de noviembre, 2012.
1
Hemoglobina A1c (Hb A1c)
y Hemoglobina del adulto
y 97% Hb A
y 2,5% Hb A2
y 0,5% Hb F
y HbA1c ≠ HB A1
HbA HB A
y Hb A1 = Hb A1a, Hb A1b, HbA1c
˜
y Hb A
Hb A1c 80% de Hb A1
8 % d Hb A
y Sinónimos: A1c,Glicohemoglobina, Hemoglobina glicada. 2
Glicación de hemoglobina
val
3
Glicación de hemoglobina
y Ocurre en forma continua durante la vida de los GR.
y Formación es irreversible.
y Concentración de HbA1c depende de :
C
t ió d HbA d
d d y Nivel de glucosa en sangre
y Vida media de los glóbulos rojos: duración de la exposición.
y Permeabilidad de los glóbulos rojos (gap de glicación).
y Se excluye: anemia, hemólisis, déficit de vitamina B12 y
y folatos, hemoglobinopatías.
,
g
p
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Rol del laboratorio en el manejo de DM
y Diagnóstico:
y Preclínico(pesquisa)
y Glicemia de ayuno
y Test de tolerancia a la glucosa
y A1c
y Insulina y Test de resistencia a la insulina
y Clínico
y Glicemia de ayuno
y Test de tolerancia a la glucosa
y A1c
y Manejo o control
y Complicaciones agudas
y
y
y
y
y
Glicemia‐glucosuria
Cetonemia‐ cetonuria
Cetonemia
Estado ácido‐base
Equilibrio hidro‐electrolítico (electrolitos, osmolaridad)
Lactato
y Complicaciones crónicas
y Glicemia‐ glucosuria
y A1c
y Fructosamina
y Proteinuria
y Microalbuminuria
y Insulina
y Péptido C
5
Métodos analíticos para HbA1c
y Según carga:
y HPLC
y Más
Má susceptible
tibl a interferencias
i t f
i por variantes
i t de
d hemoglobina
h
l bi
(hemoglobinopatías).
y Según
g estructura:
y Cromatografía
de afinidad con boronato: menos
interferencias por variantes.
y Inmunoensayos:
y
y
y
Anticuerpos contra el extremo glicado N‐terminal de la cadena beta.
Interferencias poco frecuentes pero difíciles de detectar.
Uso con precaución en algunas
l
poblaciones.
bl
6
Métodos analíticos para HbA1c
Usuarios PEEC ISP Subprograma Hemoglobina Glicada
2005‐2011 2005
2011 Método
Proporción de Usuarios
Inmunoensayo
68.7%
HPLC
26.2%
Cromatografía de intercambio iónico
3.3%
Cromatografía de afinidad
1.8%
7
Los orígenes de la estandarización
y 1993 New England Journal of Medicine
y
y
Resultados de Diabetes Control and Complications Trial (DCCT).
Relación entre niveles de g
glucosa en sangre
g
y riesgo
g de
complicaciones vasculares.
y 1996National
Glycohemoglobin
y
g
Program (NGSP)
y
y
y
y
y
Standardization
Estandarización contra el método usado por el laboratorio de
referencia del DCCT Æ HPLC.
Patrocinado en parte por American Diabetes Association (ADA).
Certificado de trazabilidad al método DCCT a los fabricantes de
ensayos.
HbA expresada
HbA1c
d en %.
%
Mejora la comparabilidad de los resultados entre laboratorios.
8
Método IFCC
y La trazabilidad establecida de esta forma corresponde a
“método de comparación designado (DCM)” más que a un
“método
método de referencia (RM)
(RM)”.
y International Federation Of Clinical Chemistry
y ((IFCC))
y IFCC Working Group on HbA1c Standardization (1995)
y
2001
y
2010
Preparación de material de referencia primario y
desarrollo de métodos de referencia aprobados por IFCC.
IFCC
Grupo de trabajo termina la tarea, queda funcionando
una red de laboratorios supervisada por el IFCC
Committee on Traceabilityy in Laboratoryy Medicine ((C‐
TLM).
9
Método IFCC
y Definición del analito
y HbA1c es la hemoglobina que está irreversiblemente
glicada en uno o ambos extremos N
N‐terminal
terminal de las
valinas de la cadena beta.
y Material de referencia primario
y Mezclas de Hb A1c HbA0 puras. Fracciones aisladas
usando cromatografía de intercambio catiónico y de
afinidad y caracterizada isoelectroenfoque capilar y
espectrometría de masas con ionización electrospray
(ESI MS)
(ESI‐MS)
10
Método IFCC
y Método de referencia IFCC
y Se
desarrollaron
dos
métodos
que
miden
específicamente
ífi
t los
l residuos
id
Nt
N‐terminal
i l glicados
li d de
d las
l
cadenas beta.
y
y
y
y
Proteolisis de hemoglobina
g
en p
péptidos.
p
Peptidos glicados y no glicados resultantes son separados por
HPLC.
Cuantificación por espectrometría de masas (MS) o
electroforesis capilar (CE).
Se mide HbA1c como una razón entre péptidos N‐terminal
glicados y no glicados y se expresa como porcentaje.
porcentaje
11
Relación IFCC‐NGSP
• Excelente correlación.
• Valores absolutos son diferentes:
• Los resultados IFCC son
consistentemente 1.5-2.0 % más
bajos .
¿Cuál reportar?
Ecuación maestra: NGSP% = (0.9148 • IFCC%) + 2.152
2007Æ IFCC recomienda expresar resultados como
mmol HbA1c/mol Hb
0.09148
12
Relación IFCC‐NGSP
l ó
% HbA1c NGSP
% HbA1c IFCC
5,0
3,1
6,0
4,2
70
7,0
53
5,3
8,0
6,4
9,0
IFCC HbA1c
(mmol/mol)
NGSP HbA1c
(%)
eAG
(mg/dL)
eAG
(mmol/L)
31
5
97
5.4
7,5
42
6
126
7.0
10,0
86
8,6
53
7
154
8.6
11,0
9,7
64
8
183
10.2
12,0
10,8
75
9
212
11.8
86
10
240
13.4
97
11
269
14.9
108
12
298
16.5
eAG (mg/dL) = (28.7 • HbA1c) – 46.7
eAG (mmol/L)= (1.59 • HbA1c) ‐ 2.59
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HPLC
CPRL Lab. Central de Referencia 1°
PRL Lab. de Referencia 1°
Métodos comerciales
SRL Lab. de Referencia 2°
Monitoreo
• Mensual (Red - CPRL)
10 muestras sangre congeladas
rango 4-10%.
• Bianual (IFCC/NGSP)
Límites para las diferencias observadas
CPRL/laboratorios
individuales
y
seguimiento de CV% (PRL, SRL)
R.Little. Clin Chem 2011;57:205-214
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Procesos NGSP
• Calibración
- Certificado de trazabilidad a los
f bi
fabricantes.
t
- Proceso anual.
- Comparación con SRL
• Certificación
- Incluye laboratorios individuales
en dos niveles de cumplimiento de
requisitos.
requisitos
• Evaluación de la calidad
-Vigilancia de los datos de CAP
Survey GH2 y LN15.(Sesgo
promedio y CV%)
-Dos envíos al año, sangre total.
-Valores asignados por NGSP.
NGSP
R.Little. Clin Chem 2011;57:205-214
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Procesos NGSP
R.Little. Clin Chem 2011;57:205-214
16
R.Little. Clin
n Chem 2011
1;57:205-214
HPLC
1.4- 3.5%
Inmunoensayo
1.7- 6.0%
17
Métodos analíticos para HbA1c
Usuarios PEEC ISP Subprograma Hemoglobina Glicada
5 2011 2005‐
18
www.ngsp.org
19
Informe de resultados 20
I f
d
lt d
Informe de resultados
21
22