Hba 1C - 10 Castellano C

HbA1c Directo Plus
La formación de sedimento en los otros reactivos es
signo de deterioro y deberán descartarse.
Precauciones y advertencias sobre el uso
-El producto no posee riesgos especiales de
manipulación y descarte ya que NO POSEE materiales
potencialmente infectivos.
-El producto es exclusivamente para uso “in vitro”.
ENSAYO
-Fotómetro o turbidímetro
SIGNIFICACION CLINICA
La Hemoglobina A1c (HbA1c) se forma por adición de
glucosa al extremo N-terminal de la cadena â de la
hemoglobina. Se trata de un proceso no enzimático que
depende de la concentración de glucosa en sangre
durante toda la vida del eritrocito. En consecuencia, su
concentración refleja el promedio de los niveles de
glucemia durante dicho período, elevándose entre 2 a 3
veces sobre el valor normal en diabéticos sin control
metabólico mientras se mantiene cerca del valor normal
en pacientes controlados.
La HbA1c también se ha denominado hemoglobina
rápida, por ser la que primero eluye en los métodos
cromatográficos, poco precisos por su alta dependencia
de la temperatura.
REACTIVOS NECESARIOS PERO NO PROVISTOS
El método debe ser calibrado con los Calibradores
Provistos separadamente por GT Lab (Código 371041: 4
Niveles; Código 590210 Niveles 1 e 4). La calibración
tiene trazabilidad al National Glycohemoglobin
Standardization Program (NGSP) de los Estados
Unidos de América.
FUNDAMENTO DEL METODO
El presente método emplea anticuerpos monoclonales,
lo que le da alta especificidad y lo independiza de la
temperatura ambiente.
Tanto la HbA1c como la hemoglobina no glicoxilada se
adsorben inespecíficamente sobre partículas de látex.
Los anticuerpos monoclonales de ratón contra HbA1c
forman complejos HbA1c-anticuerpo-látex, que
aglutinan en presencia de anticuerpos policlonales de
cabra anti-ratón. La magnitud de la aglutinación es
proporcional a la concentración de HbA1c y se mide
fotométricamente en comparación con una curva de
calibración.
REACTIVOS DE TRABAJO
Preparación
R2: este paso es crítico para el correcto funcionamiento
del reactivo. Trasvase una pequeña porción de R2a
(aproximadamente 1-1.5 ml) al envase de R2b, cierre
nuevamente el envase y mezcle por inversión
suavemente. Vuelque todo el contenido del frasco de
R2b dentro del R2a, empleando pequeñas porciones de
la mezcla R2 de Trabajo resultante para arrastrar restos
que pudieran quedar en el frasco R2b.
Calibradores: agregue 0.5 ml de agua destilada o
deionizada, mezclando suavemente por inversión hasta
disolución.
REACTIVOS PROVISTOS
Lisante:solución lista para usar.
R1: solución lista para usar.
R2a: solución lista para usar.
R2b: solución lista para usar.
Composición de los reactivos provistos
Lisante:azida de sodio 7 mmol/l. Listo para usar.
R1: suspensión de partículas de látex 0.13%.
R2a: buffer de glicina 80 mmol/l, pH 7.3.
R2b: solución de anticuerpo monoclonal de ratón contra
HbA1c y anticuerpo policlonal de cabra anti IgG de ratón
en buffer glicina 20 mmo/l, pH 7.1.
Conservación y estabilidad
Conserve refrigerado (2-8ºC), no congelar. La
estabilidad alcanza la fecha de vencimiento indicada en
la caja.
Indicios de inestabilidad o deterioro
El reactivo R1 es una suspensión que produce
sedimento, pero debe resuspenderse rápidamente por
homoge-neización suave.
Composición
R2: solución de anticuerpo monoclonal de ratón control
HbA1c y anticuerpo policlonal de cabra anti IgG de ratón
en buffer glicina 72.2 mmo/l, pH 7.3.
Calibradores: las concentraciones tras reconstituir,
están indicadas en el rótulo, con trazabilidad al National
Glycohemoglobin Standardization Program (NGSP) de
los Estados Unidos.
Conservación y estabilidad
Los reactivos R2 y los Calibradores deben conservarse
refrigerados (2-8ºC). Su estabilidad es de 30 días
después de reconstituidos.
Indicios de inestabilidad o deterioro
La aparición de turbidez es índice de deterioro. En tal
caso, deberán desecharse.
ENSAYO:
Calibración
La calibración se efectúa mediante una curva de 5
puntos, el primero de los cuales es agua destilada
(HbA1c 0%) y los otros cuatro empleando los
Calibradores provistos, cuyas concentraciones varían
de lote a lote y están indicadas en los rótulos de los
frascos.
MATERIAL NECESARIO PERO NO PROVISTO
-Reloj alarma o cronómetro.
-Tubo de hemólisis o de Khan.
-Material volumétrico para los volúmenes indicados en
Procedimiento: (Nota 1)
1-Obtención del Lisado: este paso debe efectuarse
tanto con las muestras como con los Calibradotes.
1.a-Coloque en un tubo 0.5 ml de Lisante y 10 µl de
MUESTRA
Sangre.
No es necesaria preparación alguna del paciente ni
estar en ayuna. Obtener la muestra de la manera usual
empleando EDTA como anticoagulante. Se recomienda
el uso de ANTICOAGULANTE HEMOGRAMA GT Lab,
provisto separadamente (Código 46005). Homogeneice
la muestra por inversión suave antes de ensayar.
Aditivos
Solamente el anticoagulante es necesario.
Condiciones de conservación de las muestras
La muestra es estable 10 días refrigerada (2-8ºC). El
lisado es estable 7 días refrigerado y 6 meses
congelado (-20ºC)
Sustancias interferentes
Elevadas concentraciones de hemoglobina F pueden
producir subestimación de resultados.
No se han detectado interferencias por bilirrubina hasta
50 mg/dl, ácido ascórbico hasta 50 mg/dl, hemoglobinas
carbamiladas hasta 7.5 mmol/l y hemoglobinas
acetiladas hasta 5 mmo/l.
Manipulación y descarte
Las muestras de pacientes deben manipularse
considerándolas potencialmente infectivas, al igual que
el material descartable y los utilizados en el ensayo, que
hayan estado en contacto con las mismas, incluido el
papel absorbente. El descarte debe hacerse de acuerdo
a la buenas prácticas de laboratorio y a las regulaciones
locales.
Un procedimiento sugerido para descartarlos es el
autoclavado a 121ºC durante una hora y el tratamiento
de los líquidos residuales con hipoclorito de sodio
durante una hora a una concentración final del 5%.
Determinación cuantitativa
de Hemoglobina A1c en sangre.
Método Inmunoturbidimetrico Directo
sangre homogeneizada (muestra) o Calibrador.
1.b-Agite fuertemente durante 10 segundos y deje en
reposo durante 5 minutos para lograr la hemólisis
completa. La solución deberá verse límpida (Lisado).
2-Parámetros del analizador: (NOTA 2)
Nombre de ensayo
Tipo de redacción
Dirección de reacción
Lisado
R1
R2T
Temperatura
Calibración
Incubación 1
Incubación 2
Longitud de onda
HbA1c
Cinética de 2 puntos
Creciente
4 µl
150 µl
50 µl
37ºC
5 puntos: agua destilada y 4 Calibradores
300 segundos (5 minutos)
300 segundos (5 minutos)
600 nm (570-630 nm)
CALCULOS
Los cálculos se obtienen empleando la Curva de
Calibración anterior.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO
1.Sensibilidad: Leyendo mezclas de lisado de una
muestra con solución fisiológica, se determinó que la
sensibilidad del método leyendo a 600 nm es de 0.05%.
2.Especificidad: Las variantes de hemoglobina HbA2,
HbC, HbS y la formación de bases de Schiff débiles no
interfieren en la determinación. Elevadas
concentraciones de hemoglobina F pueden producir
subestimación de resultados.
3.Linealidad: hasta 16%. Muestras con valores
superiores deberán reensayarse tras diluirlas en
solución fisiológica; el resultado así obtenido deberá
multiplicarse por la dilución efectuada.
4.Reproducibilidad
Intraensayo
(N:10) Interensayo
(N:10)
MUESTRA 1 2 3 MUESTRA 1 2 3
MEDIA U/I 5,07 7.45 10.11 MEDIA U/I 5.11 7.46 10.31
S.D U/I ±
0.077 0.063 0.308 SD U/I ±
0.122 0.09 0.44
C.V. % ±
1.52 0.85 3.05 C.V. % ±
2.39 1.18 4.31
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda procesar diariamente muestras de
concentración conocida, normales y anormales, para
controlar la perfomance del ensayo. Se aconseja el uso
de Qualiset HbA1c Controles GT Lab (Código 591210: 2
Niveles, Código 591105: Control Nivel 1 y Código
591205: Control Nivel 2).
Cada Laboratorio debe diseñar su propio sistema de
Control de Calidad Interno y establecer las medidas
correctivas si se superan los límites de tolerancia
aceptables.
NOTAS
1-Puede efectuarse la técnica manualmente, para lo cual
deberán adecuarse proporcionalmente los volúmenes
indicados en ENSAYO.
2-Están disponibles adaptaciones para distintos
analizadores automáticos.
VALORES DE REFERENCIA
Pacientes no diabéticos: <6%
Pacientes diabéticos controlados: <7%
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de
valores normales.
Para monitorear un paciente diabético, los resultados
deben ser interpretados individualmente, comparándose
los resultados con sus propios antecedentes. Debe
tenerse en cuenta que los valores de HbA1c reflejan los
cambios en los niveles de glucemia después de unas 3-4
semanas de producidos. Por esta razón, tales valores
reflejan los niveles promedio de glucosa sanguínea
durante períodos largos, a diferencia de niveles
puntuales de determinación de glucemia.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
La adicción a opiatos, la intoxicación con plomo, el
alcoholismo y una elevada ingesta de aspirina afectan el
valor de la determinación.
PRESENTACIONES
Código 371020:20 ml
Código 371040:40 ml
Código 371080:80 ml
Código 371041: Calibradores (4 Niveles)
BIBLIOGRAFIA
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3.Gabbay, K.H., Hasty, K., Breslow, J.L., Ellison, R.C.,
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Philadelphia, W.B. Saunders Company, p.794-795
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11.American Diabetes Association: Clinical
PracticeRecommendations (Position Statement).
Diabetes Care 24 (Suppl. 1): S33-S55, (2001).
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Garantía de Calidad del Producto
GT Laboratorio elabora y comercializa productos para
Diagnóstico de uso IN VITRO habiendo certificado
Normas de Buenas Prácticas de Fabricación
(O.M.S./W.H.O. Techincal Report Series 908/2003,
C.E.E. Resolución 91/536 y A.N.M.A.T. Disposición Nº
3623/1997), ISO 9001:2008 e ISO 13485:2003. Los
términos y condiciones de calidad son absolutos dentro
de la competencia de responsabilidades que correspondan a GT Lab.
Información para contactarse
E-mail: [email protected]
USO PROFESIONAL EXCLUSIVO.
Producto autorizado por A.N.M.A.T. PM 121-35
Elaborado por GT laboratorio S.R.L.
Establecimiento Inscripto y Habilitado por ANMAT
Industria y Tecnología Argentina
Dir. Téc. Daniel Gazzola. Bioquímico
Código y fecha de revisión: 37190000/10-3