Documento descargado de http://www.revclinesp.es el 20/11/2016. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato. TOMO XXVII NúMERO 1 DETERMINACI ON DE S.4.LICILATO UN METODO SENCILLO DE DETERMINACION DE SALICILATO E. ARJONA, J. M. ALÉS y J. M. SEGOVIA Instituto de Investigaciones Médicas. Director: Profesor c. JDIÉNEZ DíAZ. La creciente importancia que el estudio de la salicilemia va tomando en la clínica a partir de los trabajos de COBURN 1 preconizando la necesidad de mantener niveles determinados de salicilato en el tratamiento de la fiebre reumática, ha impulsado a la obtención de métodos que, trabajando con suficiente exactitud, no r equieran grandes cantidades de sangre. El método más empleado ha sido el de ERODIE y col. 2 , que siendo muy exacto, tiene el inconveniente de ser muy laborioso y su manejo no está exento de peligros, ya que el dicloruro de etileno usado en él es una sustancia de elevada toxicidad. Estos inconveni-entes hicieron que WEICHSELBAUM y SHAPIRO 2 preconizasen un método original fundado en el color azul de la reacción del grupo salicílico con la solución alcohólica del reactivo del fenol de Folin y Ciocalteau. Con este último método hemos hecho nuestros primeros estudios de salicilemia, y en su manejo diario nos hemos podido dar cuenta de los numerosos inconvenientes que presenta. Ya los propios autores r econocen que los sueros o plasmas exentos de salicilato dan un derto color azul, más intenso que el de la prueba de blanco de los reactivos, y que este color es variable de unos sueros a otros, oscilando su equivalencia ・ョエイセc@ 13 y 24 mgr. por 100 de salicilato. Nosotros, haciendo curvas de recuperación, nos hemos podido dar cuenta de que cuando las cantidades de salicilato añadidas al suero son pequeñas, el error. del método es tan grande, que no puede utilizarse ni en el trabajo clínico. Por otra parte, el margen de error de unos sueros a otros es más amplio que el declarado por los autores, sobre todo si se emplean sueros hipercolémicos, hasta tal punto, que en las cifras en que suele moverse la salicilemia el error en nuestras manos llega a ser hasta de un 25 por 100. También la temperatura ambiente influye demaセゥ。、ッ@ sobr-e el desarrollo del color, y todos estos mconvenientes unidos a la engorrosa preparacwn del reactivo del fenol nos han inducido a buscar un método sencillo y exacto que nos permitiera dosificar fácilmente el salicilato. La reacción clásica del grupo salicílico con el percloruro de hierro no puede ser utilizada, ya que el color pardo del percloruro varía demasiado con el transcurso del tiempo, y, por otra parte, precipita las albúminas del plasma o suero, lo que nos obliga al empleo de plasma desproteinizado, y ello entraña una gran pérdida de salicilato que queda adsorbido en el precipitado proteico. POWELL 4 , en su método de determinación de sulfocianuro en sangre, advierte que la reacción 21 empleada es interferida por la presencia de salicilato. Esta advertencia nos indujo a probar si con un método 15imilar se podía llegar a una dosificación de la salicilemia, evitando la precipitación de las proteínas, que ya habíamos visto arrastraban parte del salicilato añadido. El método, tal como ha sido practicado por nosotros, consiste en poner 0,5 c. c. de suero (que deberá estar totalmente exento de hemolisis) directamente en un tubo del fotocolorímetro (nosotros hemos empleado el de Evelyn) y añadir después 9 c. c. de agua destilada; una vez mezclados se agrega lentamente y agitando 0,5 c. c. del reactivo nitrato férrico (50 gr. de nitrato férrico cristalizado pro análisis, 500 c. c. de agua destilada y 25 c. c. de ácido nítrico puro, una vez disuelto enrasar hasta 1.000 c. c.). En presencia de salicilato se produce inmediatamente una coloración violeta, cuya intensidad varía proporcionalmente con la cuantía de salicilato. En ausencia de él se proouce un ligero color amarillo sin trazas de color violeta. Es de advertir que en los sueros ricos en globulinas al ser añadidos del agua destilada se produce un enturbiamiento que desaparece totalmente al añadirles el reactivo. La prueba en blanco de los reactivos es totalmente incolora, e igualmente cuando al suero se le agrega 0,5 c. c. de solución de ácido nítrico al 25 por 1.000 no se desarrolla color alguno. Por esta razón aconsejamos sustituírla por una prueba en que utilizamos el propio suero del enfermo antes de comenzar el tratamitmto más el agua destilada y el reactivo igual que en la prueba problema. También se puede sustituir el suero de} enfermo por un suero normal, ya que las vanaciones encontradas por nosotros en sueros no hemolizados son muy pequeñas y oscilan en un equivalente de 5 a 7 mgr. de salici· lato por 100. Estas variaciones son mucho más amplias en sueros h emolizados y dependientes del grado de hemolisis; de aquí nuestra recomendación de emplear siempre sueros limpios. En las numerosas investigaciones hechas por nosotros hemos podido llegar a eliminar la prueba en blanco, ya q!le constantemente pudimos comprobar que el coeficiente de transmisión con el colorímetro y tubos empleados por nosotros era de un 83 por 100 de la transmisión para el agua destilada. Naturalmente que para otro coセッイ■ュ・エ@ y otros tubos deberá siempre determinarse con un número suficiente de sueros normales el coeficiente de transmisión de estos sueros más los reactivos. Como en toda determinación con el fotocolorímetro es necesario comprobar si el color formado sigue la ley de Beer. Para ello hemos trazado varias curvas de titulación empleando cantidades variables de salicilato sódico, primera· mente en suero y posteriormente al convencernos de la inutilidad de esta precaución en agua destilada. En todas las curvas obtenidas se ha podido comprobar que entre 5 y 50 mgr. de salicilato por 100 la gráfica representa una linea Documento descargado de http://www.revclinesp.es el 20/11/2016. Copia para uso personal, se prohíbe la transmisión de este documento por cualquier medio o formato. 15 octubre 1947 REVISTA CLINICA ESPA1VOLA 22 recta, como puede comprobarse en la figura 1. Por encima de los 50 mgr. existe una varia· ción de la recta que no hace aconsejable su empleo; ahora bien, como los niveles útiles de sa· licilemia se mueven precisamente alrededor de los 35 mgr. por 100 (CoBURN 1 ) , se puede utili· zar nuestra gráfica que trabaja prácticamente sin error, como veremos a continuación. Como puede verse por estos ejemplos, prácticamente la recuperación obtenida es total, sin que s ea influenciada por la existencia anterior de un determinado nivel de salicilato. Parecidas pruebas han sido practicadas en orina, donde el método es perfectamente adaptable para la determinación de la saliciluria. RESUl\IEN. filtro .520 250 Se describe un método sencillo y rápido de determinación de salicilato en sangre y orina, fundado en la reacción del salicilato con el nitrito férrico y se aportan las pruebas de su exactitud como método clínico, proponiendo los autores este método como ventajoso sobre los demás existentes para el control de la salicilemia y saliciluria en los enfermos tratados con este medicamento. 200 BIBLIOGRAFIA 150 COBURN, A. F.-Bull. jッィョセ@ Hopklns Hosp., 73, 435, 1943. BRODII!l, B. B ., UNDEJ-<FRIE:!o.'l>, S. y COilURN, A. F.-Jour. Pharmac. Exp. Therap. , 80, 114, 1944. 3. WEICHSELBAID!, T . E . y SHAPIRO, 1. -Amer. Jour. Clln. Path., 15, 42, 1945. 4. PowELL, W . N.-Jour. Lab. and Clln. Med., 30, 1071, 1945 500 450 400 350 セP@ l. 2. 100 10 15 20 25 30 35 <40 45 50 ュセNLッ@ 5 Fíg. 1.-Fotocolorlmetro de Evelyn. Filtro 520 mp.. Con este método hemos hecho pruebas de re· cuperación, agregando cantidades variables conocidas de salicilato sódico a sueros normales, dando los resultados siguientes: Cantidad afladlda 15 mgr. por 100 40 10 26 6 14 20 30 44 10 20 so Cantidad r ecuperada 15 mgr. por 100 41 10,5 26,5 6,75 13,5 20 29 44 10,5 21 31,25 También hemos hecho la prueba de agregar a sueros con salicilemia conocida cantidades variables de salicilato sódico para comprobar su recuperación. Contenl. basal de salicilato Cantidad afiad ida Cantidad obtenida cantidad recuperada ·- - - 20,5 20,5 20,5 00,0 16,0 17,5 mgr. mgr. mgr. mgr. mgr. mgr. % % % % % % 2 10 20 30 20 10 mgr. % 22,5 mgr.% mgr. % 32,25 mgr.% mgr. % 40,5 mgr. % mgr. % 31 mgr.% mgr. % 35,5 mgr.% mgr.% 27,5 mgr.o/o 2 mgr.% 11,75 mgr.% 20 mgr.% 31 mgr.% 19,5 mgr.% 10,0 mgr.o/o SUMMARY A simple and rapid method is described for the determination of salicylate in the blood and urine, based on the creaction of salicylate with ferric nitrite. Proofs of its accuracy as a clinical method are adduced. The authors propase this method as having advantagcs over other existing ones, for the control of salicylemia and salicyluria in pati€nts treated with this drug. ZUSAMMENFASSUNG Beschrieben wird eine einfache und schnelle Methode zur Bestimmung von Salizylsalzen im Blut und Urin, die darauf beruht, dass das Salizylat mit Eisennitrid eine R eaktion gibt. Die Beweise für die Genauigkeit zur klinischen Me· thcde werdm beigebracht. Die Autoren schlag·en deshalb diese Methode zur Kontrolle von Salizy· laten im Blut und Urin bei mit diesem Medikament behandelten Patientm vor, weil sie gros.sere Vorteile hat. R:f';SUM:e On décrit une méthode simple et I'apide de détermination de salicylate dans du sang et dans de l'urine, basée sur la réaction du salicylate avec le nitrite férrique et on apporte les preuves de son exactitude comme méthode clinique. Les auteurs proposent cette méthode, tres avantageuse pour le contróle de la salicylémie et de la salicylurie chez les malades traités avec ce méclicament.