Taninos en Plantas y Forrajes

TANINO
Los taninos son glucósidos de polipéptidos solubles en agua presentes en
muchas plantas, con un sabor agrio astringente, confiere sabor y olor
indeseable a los alimentos. Afectan la utilización de las proteínas debido a que
ligan a la lisina, haciéndola indisponible para animales monogástricos.
Determinación de Tanino
En nuestro caso la determinación se realiza básicamente a los granos de
sorgo.
Definición:
Polifenoles, los taninos son derivados del ácido gálico
Los taninos se clasifican: 1) Los condensados (Obtiene el catecol)
2) Los hidrolisables (Obtiene el pirogalol).
Fundamento:
Se basa en la extracción de las sustancias tánicas con agua hirviendo, en la
cual se solubilizan.
El tratamiento que se realiza al obtenido de esta extracción se pueden aplicar
dos métodos, uno cuantitativo con el reactivo de Folin – Denis y otro cualitativo
Método Price y Butler método rápido por color.
Se producen reacciones químicas para la determinación de coloración. En el
método cuantitativo la medición se realiza en un equipo UV a 760 nm donde la
muestra incógnita es comparada en una curva de calibración corrida
previamente con cantidades conocidas de ácido tánico y por cálculo se obtiene
el resultado en porcentaje.
En el método cualitativo es solo una apreciación visual por colores
predeterminados.
Las expresiones de los resultados son:
Verde claro
Verde oscuro
Azul
Menor de 0,4 %
Entre 0,4 y 08 %
Mas de 0,8 %
Bajo en tanino
Medio en tanino
Alto en tanino
Método de Folin-Denis
• Cuantitativo
• Colorimétrico (espectrofotométrico)
• Usa patrón
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Determina taninos condensados y no condensados determinación de taninos.
método folin - denis. Extracción y determinación.
Pesar 2 gramos de sorgo molido en un vaso de precipitados, hervir 15
minutos con 100 ml de agua destilada. Filtrar a través de papel de filtro de
filtración rápida, lavar el residuo con agua destilada y filtrar al vacío. Trasvasar
el filtrado a un matraz aforado de 250 ml, enrasar con agua destilada.
Para determinar el contenido de tanino de la muestra se toma una alicuota de 5
ml y se transfiere a un matraz aforado de 100 ml que contenga (75 - 80) ml de
agua destilada, se le agregan 2 ml del reactivo de FOLIN - DENIS, 5 ml de
solución de carbonato de sodio al 35 % y agua destilada hasta enrasar.
Mezclar bien, dejar 30 minutos, y luego medir la absorbancia a 760 nm.
El resultado se obtiene en gramos de ácido tánico por 100 ml. Luego calcula el
porcentaje en la muestra de acuerdo a las diluciones hechas.
Reactivos.
Reactivo de FOLIN - DENIS.
75 ml de agua destilada.
10 g de wolframato de sodio dihidratado (WO4 Na2 .2H2O)
2 g de ácido fosfomolíbdico.
5 ml de ácido fosfórico (PO4 H3)
Hervir a reflujo durante dos horas, enfriar.
Trasvasar a un matraz aforado de 100 ml, enrasar con agua destilada.
Solución saturada de carbonato de Sodio.
35 g de carbonato de sodio (CO3 Na2) se añaden a 100 ml de agua destilada a
80º C - dejar estar toda una noche y sembrar unos cristales de carbonato de
Sodio.
Disolución patrón de ácido tánico.
Pesar 10 mg de ácido tánico - diluir a 100 ml de matraz aforado (0,1 mg/ml),
prepara a diario.
Curva de calibración
Agregar a matraces aforados de 100 ml que contengan (75 - 80 ml) de agua
destilada las siguientes alícuotas de la solución patrón de ácido tánico:
ml de solución
0
0,8
1.0
1.2
1.6
2.0
2.5
3.0
mg ácido tánico / 100 ml
0
0.08
0.10
0.12
0.16
0.20
0.25
0.30
Agregar 2 ml del reactivo de FOLIN - DENIS, 5 ml de solución de carbonato de
Sodio al 35 % y agua destilada hasta enrasar. Mezclar bien. Dejar 30 minutos y
luego medir la absorbancia a 760 nm (ver nota).
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Cálculos de los resultados.
Graficar en papel milimetrado.
Absorbancia vs.mg ácido tánico / 100 ml solución. Obtenidos los valores de
absorbancia para las muestras, interpolar para calcular los mg tánico / 100 ml
existentes en la solución de la muestra. Para calcular el % de tanino en las
muestras tener en cuenta que:
250 ml ............................2 g de sorgo.
5 ml ................................2g X 5 ml = 0,04 g de sorgo.
250 ml.
Suponiendo que de acuerdo a la absorbancia se obtiene una concentración de
0,08 mg tánico / 100 ml.
Entonces:
0,04 g de sorgo = 40 mg de sorgo.
40 mg de sorgo..............................0,08 mg de tanino.
100 mg de sorgo
0,08 X 100 = 0,8 = 0,2 %
40
4
De donde resulta: concentración de tanino = 0,2 % -----------Baja concentración.
Nota:
No es necesario realizar el cálculo de los resultados, como anteriormente se
expresó si se tiene espectrofotómetro con software apropiado que permita
entrar la curva de calibración de patrones y extrapolar la concentración de la
muestra incógnita.
Considerando las diluciones y el dato que extrapoló el equipo de la curva de
calibración de patrones, se saca la concentración final de la muestra incógnita.
De izquierda a derecha, comenzando con un blanco de agua destilada y en
forma creciente los diferentes porcentajes de tanino que serán leídos por el
equipo UV para la realización de la calibración de patrón para poder luego
comparar con una muestra incógnita.
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Método rápido para tanino.
Método Price y Butler.
Fundamento:
Se basa en la extracción de las sustancias tánicas con agua hirviendo, en la
cual se solubilizan.
Procedimiento:
Colocar 2,5 gr de sorgo molido (tamiz Nº 20) en un tubo de ensayo grande,
agregar 50 ml de agua destilada, tapar y agitar durante 3 minutos.
Luego dejar descansar durante 1 minuto.
En un tubo de ensayo común se pipetea 1 ml del líquido sobrenadante, se
agrega 1 ml de solución de cloruro férrico (Cl3 Fe 8 m M en HCl 8 m M) y 1 ml
de sol. de Ferricianuro de Potasio Fe (CN)6 K3 3 mM en sol acuosa) se agita y
se observa exactamente al minuto.
Color:
Verde claro
Verde oscuro
Azul
Marcha
Moler aproximadamente 30 - 40g de semilla tal cual en molinillo de cuchilla horizontal
durante un minuto una cucharada al ras (2 mi capacidad) de molienda se coloca en un
Erlenmeyer de 125 mi. Agregar 50 ml de agua destilada.
Extraer durante 3 minutos agitando continuamente.
Dejar reposar un minuto, pipetear 1 ml. del líquido sobrenadante y colocarlo en un tubo
de ensayos.
Agregar 1 mi de solución N° 1 (Cloruro Férrico 0,008 M).
Agregar 1 mi de solución ISP 2 (Ferricianuro de Potasio 0,003) (K6 Fc2 (CN)12).
Dejar reposar un minuto.
Ver coloración (Los colores observados van del amarillo al verde azulado, indicando el
aumento de concentración de taninos), se comparan con testigos efectuado por el método de
Falling.Donis.
Hasta 0,4% de ác.Tánico ---baja concentración de tanino --amarillo.- verde claro
Desde 0,4% a 0,8% --— media concentración de tanino -- verde.
Mayor de 0,8%
—— alta concentración de tanino — verde azulado
Equipo de fabricación casera.
Caja de madera cerrada con una lámpara eléctrica común en su interior, en el extremo o frente a
la lámpara se coloca un vidrio esmerilado.
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Determinación de tanino método de hipoclorito de sodio (En estudio)
Opción (a): Determinación de granos con taninos condensados: Para
determinarlos se utilizará la “Prueba del blanqueo con cloro” (Chloro bleach
test), de acuerdo al siguiente procedimiento: Se toma una muestra de QUINCE
(15) gramos de sorgo (limpios y enteros,
aproximadamente QUINIENTAS
(500) unidades). Se colocan en un recipiente resistente al calor, se agregan
QUINCE (15) gramos de OHK (hidróxido de potasio) en perlas y SETENTA (70)
mililitros de NaOCl (hipoclorito de sodio) concentración CERO COMA CINCO
POR CIENTO (0,5%) peso/volumen. Se calienta a baño de maría, a
temperatura de ebullición, durante DIEZ (10) minutos. Los granos con taninos
condensados tomarán coloración marrón oscuro y aquellos que no posean
taninos condensados se aclararán hasta tomar un color blanco, blancuzco o
blanco crema. Se efectúa el conteo de granos enteros que se hayan
identificado con presencia de taninos condensados y se determina su
porcentaje en la muestra, en relación a la cantidad de granos enteros totales de
la misma.
Opción (b): Determinación de granos con taninos condensados: Para
determinarlos se utilizará la “Prueba del blanqueo con cloro” (Chloro bleach
test), de acuerdo al siguiente procedimiento: Se toma una muestra de QUINCE
(15) gramos de sorgo (limpios y enteros, aproximadamente QUINIENTAS (500)
unidades). Se colocan en un recipiente resistente al calor, se agregan QUINCE
(15) gramos de OHK (hidróxido de potasio) en perlas y SETENTA (70) mililitros
de NaOCl (hipoclorito de sodio) concentración CERO COMA CINCO POR
CIENTO (0,5%) peso/volumen. Se calienta a baño de maría, a temperatura de
ebullición, durante DIEZ (10) minutos. Los granos con taninos condensados
tomarán coloración marrón oscuro y aquellos que no posean taninos
condensados se aclararán hasta tomar un color blanco, blancuzco o blanco
crema. Se seca en estufa a humedad constante, se pesa los granos enteros
que se han identificado con presencia de taninos condensados y se determina
su porcentaje en la muestra (peso/peso) en relación al peso de los granos
enteros de la muestra.
Método de Hipoclorito de sodio
• Cualitativo (semicuantitativo de establecerse una escala de decoloración
• Visual
• No usa patrón
• Sólo indica la presencia de taninos condensados
Sorgo sin tratar
Sorgo tratado
Sorgo tratado con 2% de tanino
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Sorgo tratado con 4% de tanino
Sorgo tratado con 8% de tanino
Otra determinación de Taninos
Reactivos
•
•
Solución 0.1N de ácido oxálico. 1 ml = 0.006235 g de ácido quercitánico
ó 0.0008g 02 absorbido
Solución de permanganato de potasio. Disuelva 1.333g de KMnO4 en un
litro de agua y estandarice contra el ácido oxálico.
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•
Solución índigo. Disuelva 6g de indigotin disulfonato de sodio en 500ml
de agua mediante calentamiento, enfría y adicione 50ml de ácido
sulfúrico. Diluya a 1 litro y filtre.
Procedimiento
1. Extraiga 2g de muestra durante 20 horas con éter anhidro. Hierva el
residuo por 2 horas con 300ml de agua, enfríe, diluya a 500 ml y filtre.
2. Mida 25 ml de la infusión dentro de una cápsula de porcelana de 2 litros,
adicione 20ml de la solución de índigo y 750ml de agua. Adicione la
solución estándar de permanganato, 1 ml a la vez, hasta que cambie el
color azul a verde, luego agregue otras gotas hasta que se torne de
color amarillo dorado.
3. De manera similar, titule una mezcla de 20ml de solución de índigo y
750ml de agua. Multiplique la diferencia entre las titulaciones por el
factor deseado para obtener ácido quercitánico u oxígeno absorbido.
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Método simple para la determinación de taninos en ingredientes alimenticios
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