OLI-10 EFECTO BIOPESTICIDA DEL ALPERUJO ESTABILIZADO. ESTUDIO PRELIMINAR LORITE, M.J., LECONTE, M.C., NOGALES, R. , ROMERO, E. , BENITEZ, E. Departamento de Agroecología y Protección Vegetal. Estación Experimental del Zaidín, CSIC, c/Profesor Albareda, 1, 18008 Granada, España FORO DEL OLIVAR Y EL MEDIO AMBIENTE RESUMEN En los últimos años se ha prestado especial atención al estudio de nuevas tecnologías que posibiliten el uso de prácticas de producción agrícola sostenibles, dirigidas hacia la explotación racional de los recursos naturales y tendiendo a reducir el uso de pesticidas sintéticos. En este sentido, diversas enmiendas orgánicas han sido utilizadas en el control de hongos del suelo fitopatógenos. El objetivo de este estudio es el determinar el efecto biopesticida del alperujo, compostado o vermicompostado sobre Rhizoctonia solani y Fusarium oxysporum. Los resultados sugieren que el alperujo, natural o estabilizado mediante procesos de compostaje o vermicompostaje, presenta un interesante potencial como agente de biocontrol de hongos fitopatógenos. El hecho de que el alperujo presente una elevada cantidad de polifenoles de efecto microbicida, los cuales desaparecen tras un proceso de compostaje o vermicompostaje, así como características químicas desfavorables desde un punto de vista agrícola (elevada relación C/N, elevada demanda biológica de oxígeno, etc.) hacen desaconsejable su uso sin un proceso previo de bioestabilización. INTRODUCCIÓN Una de las características sociales de las últimas décadas ha sido la toma de conciencia del paulatino agotamiento de los recursos naturales debido a la explotación desmesurada de los mismos. En el ámbito de la producción agrícola, las demandas cada vez más exigentes del mercado mundial han llevado a un uso exhaustivo del suelo. La explotación intensiva del suelo agrícola aumenta la frecuencia de aparición de organismos del suelo que causan enfermedades en las plantaciones y por lo tanto pérdidas económicas muy costosas. Para solucionar este problema se comercializan numerosos pesticidas químicos, en la mayoría de los casos muy efectivos, pero que producen graves daños al medio ambiente, contaminando suelos y aguas. En los últimos años se ha prestado especial atención al estudio de nuevas tecnologías que posibiliten el uso de prácticas de producción agrícola sostenibles, dirigidas hacia la explotación racional de los recursos naturales y tendiendo a reducir el uso de pesticidas sintéticos. En este sentido, diversas enmiendas orgánicas han sido utilizadas en el control de hongos del suelo fitopatógenos. Así, diferentes tipos de compost de residuos vegetales, de corteza de cultivos leñosos o de residuos sólidos urbanos han mostrado su eficiencia en el control de Rhizoctonia (Kwok et al., 1987), Pythium ultimum (Bettiol et al., 1997), Phytophthora (Nelson and Hoitink, 1982) o Fusarium oxysporum (Serra-Wittling et al., 1996). El grado de estabilización del enmendante orgánico ejerce un efecto positivo sobre la actividad biopesticida del mismo (García et al., 2004). Uno de los residuos orgánicos susceptible de ser empleado como bioenmendante, dada su elevado volumen de producción (3 millones de toneladas en la temporada 2002-2003 en Andalucía) y relativo bajo coste, es el alperujo procedente de la extracción del aceite de oliva según el sistema dos fases. Sin embargo, su elevada toxicidad para plantas, insectos y microorganismos (González et al., 1990), y sus desfavorables características químicas (elevada relación C/N, materia orgánica no estabilizada, etc.) hacen desaconsejable su uso agrícola. El compostaje y el vermicompostaje son dos sistemas eficientes para la bioremediación del alperujo dos fases, a partir del cual se obtienen materiales orgánicos estabilizados (compost y vermicompost) con óptimas características agronómicas (Balis et al., 2001; Nogales et al., 1999; Benitez et al., 2002). 1 Pese a la gran cantidad de alperujo producido en Andalucía, el potencial para utilizar este residuo, previamente biotransformado, como bioenmendante agrícola ha sido escasamente estudiado. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto biopesticida del alperujo, compostado o vermicompostado sobre dos hongos fitopatógenos del suelo, Rhizoctonia solani y Fusarium oxysporum, principales causantes de enfermedades como la podredumbre de la semilla y el “damping-off” de pre- y pos-emergencia en cultivos hortícolas protegidos. MATERIAL Y METODOS Residuos Alperujo u orujo 2 fases procede de la Empresa Oleícola ROMEROLIVA, situada en Deifontes (Granada). Estiércol de oveja suministrado por la Unidad de Nutrición Animal de la Estación Experimental del Zaidín del Consejo Superior de Investigaciones Científicas, Armilla, Granada. Biosólidos residuales procedentes de la EDAR Churriana-Sur Emasagra, Granada. Compostaje El alperujo fue mezclado con hojas de olivo y estiércol de oveja en una proporción de 7:4:1 (peso seco), para formar una pila de compostaje de 40 m3 de 4 m (altura) x 4 m (anchura en la base) x 2.5 m (anchura en el vértice). La mezcla fue seleccionada para alcanzar una relación inicial C:N de 30. La pila de compost fue volteada una vez al mes durante un periodo de 6 meses. A continuación, el material se dejó en reposo durante 3 meses (periodo de maduración). Vermicompostaje Para el vermicompostaje se utilizó una litera de 0,75 m2 de superficie y construida de madera, manteniéndose la base inclinada (5%) para facilitar el drenaje. La litera fue rellenada con 14 kg de una mezcla de alperujo y biosólidos en proporción 8:1 (peso seco). A ambos lados de la mezcla se colocó una banda (cordón de amortiguación) de 10 cm de ancho consistente en un cordón de vermicompost de estiércol en donde se introdujo una biomasa total de lombrices equivalente al 10% del peso seco de cada sustrato. Durante el periodo experimental (6 meses) se mantuvo la humedad entre el 80 y el 85% con riegos periódicos por aspersión. La litera fue colocada bajo cubierta, en un invernadero de temperatura no controlada. Algunas características químicas de los materiales orgánicos utilizados se exponen el la tabla 1 Tabla 1. Características químicas de alperujo (A), compost de alperujo (C) y vermicompost de alperujo (V) pH (H2O) EC dS m-1 Carbono orgánico total g kg-1 Sustancias húmicas g kg-1 Ácidos húmicos g kg-1 Carbono soluble g kg-1 C/N N Total g kg-1 P Total g kg-1 A 5,3 6,3 481 62 6 101 53 9,5 0,8 C 8,4 2,4 233 110 49 6,9 16 15 2,1 V 7,4 1,3 351 20 11 10 24,5 14,4 3,72 Hongos fitopatógenos Las cepas de Fusarium oxysporum. y Rhizoctonia solani proceden del stock del departamento de Agroecología y Protección Vegetal de la Estación Experimental del Zaidín (CSIC). Ambos hongos fueron cultivados en medio agar patata dextrosa (PDA) a 24ºC durante los 15 días anteriores al inicio del experimento (placas primarias). Diseño experimental Se realizó un ensayo en placas de Petri con medio de cultivo PDA. En un extremo de la placa se aplicó, en estrías, 100 µL del extracto acuoso (1:5) de las diferentes enmiendas (alperujo, compost o vermicompost de alperujo) y en otro extremo de la misma se colocó un trocito de PDA procedente de 2 las placas primarias inoculado con Rhizoctonia solani o Fusarium oxysporum. Asimismo se utilizó un fungicida (Benomyl (50 g/100 L)) como control positivo. Se realizaron 4 repeticiones por tratamiento. Las placas se incubaron a 24 ºC en cámara de cultivo y en oscuridad durante 8 días. RESULTADOS En la figura 1 se observa el efecto del alperujo sobre el crecimiento de Rhizoctonia solani. El área punteada muestra el desarrollo del micelio, aproximadamente un 20% de la placa, desde el inóculo inicial de R. solani (R). De igual forma, la aplicación de compost o vermicompost de alperujo (Figuras 2 y 3) inhibió o repelió el crecimiento del micelio, y a niveles comparables a los de un fungicida comercial (Benomyl) (Figura 4). R Figura 1. Efecto del extracto de alperujo sobre Rhizoctonia solani Figura 2. Efecto del extracto de compost de alperujo sobre Rhizoctonia solani 3 Figura 3. Efecto del extracto de vermicompost de alperujo sobre Rhizoctonia solani Figura 4. Efecto del fungicida Benomyl sobre Rhizoctonia solani El efecto biopesticida del alperujo, estabilizado o no, sobre Fusariun oxysporum. fue mucho más evidente que sobre R. solani (Figuras 5, 6 y 7). La aplicación de extractos de los materiales orgánicos inhibió el desarrollo del micelio desde el inoculo inicial (F), el cual llegó a ocupar menos de un 10% de la placa (línea punteada). F Figura 5. Efecto del extracto de alperujo sobre Fusarium 4 Figura 6. Efecto del extracto de compost de alperujo sobre Fusarium Figura 7. Efecto del extracto de vermicompost de alperujo sobre Fusarium CONCLUSIONES Los resultados sugieren que el alperujo, natural o estabilizado mediante procesos de compostaje o vermicompostaje, presenta un interesante potencial como agente de biocontrol de hongos fitopatógenos como Rhizoctonia y Fusarium. A diferencia de otros autores, no se ha detectado una relación entre el grado de estabilización del residuo y su acción fungicida. Estudios precedentes demuestran que el compostaje de biosólidos ejerce un efecto positivo sobre el grado de inhibición que presenta el enmendante orgánico sobre el desarrollo del micelio de algunos hongos fitopatógenos (Garcia et al., 2004), posiblemente por los cambios biológicos y bioquímicos que ocasionan una vez aplicados al suelo. El hecho de que el alperujo presente una elevada cantidad de polifenoles de efecto microbicida, los cuales desaparecen tras un proceso de compostaje o vermicompostaje (Benitez et al., 2004), así como características químicas desfavorables desde un punto de vista agrícola (elevada relación C/N, elevada demanda biológica de oxígeno, etc.) hacen desaconsejable su uso sin un proceso previo de bioestabilización (compostaje y vermicompostaje). AGRADECIMIENTOS El presente estudio ha sido financiado por la Consejería de Innovación, Ciencia y Empresa de la Junta de Andalucía a través del proyecto CAO01-007. M.C. Leconte agradece a la MAE/AECI y al CSIC y E. Benítez y E. Romero al Ministerio de Educación y Ciencia “Programa Ramón y Cajal”, la financiación concedida para la realización del presente estudio. Asimismo, los autores agradecen a la empresa ROMEROLIVA el alperujo suministrado y a la empresa EMASAGRA S.A. el biosólido proporcionado, y a ambas su interés por el desarrollo del proyecto de investigación. 5 REFERENCIAS Balis, C., Nikolarou, S., Coppens, S., Mari, J., Jones, C.E., 2001. Composting of the two phase olive mill residues, En: Balis, C., Lasaridi, K., Szmidt, R.A.K., Stenifort, E., Lopez-Real, J. (Eds.), Proceedings of the International Symposium on Composting of Organic Matter. ISHS, Halkidiki, pp. 71–80. Benitez, E, Melgar, R., Nogales, R., 2004. Estimating soil resilience to a toxic organic waste by measuring enzyme activities. Soil Biology & Biochemistry 36, 1615–1623 Benitez, E., Sainz, H., Melgar, R., Nogales, R., 2002. Vermicomposting of a lignocellulosic waste from olive oil industry: a pilot scale study. Waste Management and Research 20, 134–142. Bettiol, W., Migheli, Q., Garibaldi, A., 1997. Control, with organic matter, of cucumber damping-off caused by Pythium ultimum. Pesqui Agropecu Bras 32, 57–61. Garcia, C., Pascual, J.A., Mena, E., Hernandez, T., 2004. Influence of the stabilisation of organic materials on their biopesticide effect in soils. Bioresource Technology 95, 215–221 Gonzalez, M.D., Moreno, E., Quevedo-Sarmiento, J., Ramos- Cormenzana, A., 1990. Studies of antibacterial activity of wastewaters from olive oil mills (alpechin), Inhibitory activity of phenolic and fatty acids. Chemosphere 20, 423–432. Kwok, O.C.H., Fahy, P.C., Hointink, H.A.J., Kuter, G.A., 1987. Interactions between bacteria and Trichoderma hamatum in suppression of Rhizoctonia Damping-off in bark compost media. Phytopathology 77, 1206–1212. Nelson, E.B., Hoitink, H.A.J., 1982. Factors on suppression of Rhizoctonia solani in container with compost. Phytopathology 72, 275–279. Nogales, R., Melgar, R., Guerrero, A., Lozada, G., Benitez, E., Thompson, R., Gomez, M., 1999. Growth and reproduction of Eisenia andrei in dry olive cake mixed with other organic wastes. Pedobiologie 43, 744–752. Serra-Wittling, C., Houot, S., Alabouvette, C., 1996. Increased soil suppressiveness to Fusarium wilt of flax after addition of municipal solid waste compost. Soil Biol. Biochem. 28, 1207–1214. 6