PROTEINAS L.C.R. / ORINA
URINE / C.S.F. PROTEINS
METODO CON CLORURO DE BENZETONIO
Para la determinación “in vitro” de Proteinas en orina y L.C.R.
BENZETHONIUM CHLORIDE METHOD
For “in vitro” determination of Proteins in Urine and C.S.F.
Principio
Principle
A pH alcalino las proteínas de la muestra son desnaturalizadas, y con ayuda
del EDTA se eliminan las posibles interferencias de los iones, principalmente
magnesio. Posteriormente el Cloruro de Benzetonio se compleja con las
mismas produciendo turbidez que se cuantifica espectrofotométricamente
a 505 nm.
Cálculos
ΔE = E2 – E1
ΔE PR
x 200 = mg prot./dl.
ΔE ST
At alkaline pH solution, the sample is incubated with EDTA, which denatures
the proteins and basically eliminates the possible interferences from
magnesium ions. Then, Benzethonium chloride is added and produces with
the protein turbidity at 505 nm.
This turbidity is proportional to the protein concentration and it can be
measured spectrophotometrically.
Calculations
ΔE = E2 – E1
ΔE PR
x 200 = mg prot./dl.
ΔE ST
Reactivos
Kit 1 x 150 ml (Ref.99 30 30). Contiene:
A. 1 x 100 ml. Disolución alcalina.
Listo para su uso.
B. 1 x 50 ml. Cloruro de Benzetonio.
Listo para su uso.
C. 1 x 5 ml. Standard.
Disolución acuosa de Proteínas.
Equivalente a 200 mg/dl. (2 g/ L).
D. 1 x 5 ml. Control.
Ver la concentración en la etiqueta del vial.
Para calcular mg Prot./24 horas: mg/L x litros
Orina 24 h. = mg/24 h.
Si desea expresar los resultados en μg/min,
multiplicar los mg/24 h por el factor 0,6944.
Ref. 99 30 32
Ref. 99 30 34
(mg / 24 h) x 0,6944 = μg / min
Ref. 99 23 05
Valores normales
L.C.R.: 15 - 45 mg/dl.
Orina: < 12 mg/dl. (< 130 mg/ L )
< 150 mgl (<1500 mg ) en 24 horas.
Ref. 99 58 95
Las concentraciones de la solución reactiva son:
Na OH
EDTA
Cloruro de Benzetonio
Tensoactivos
Se aconseja que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
550 mM
76 mM
35 mM
1%
Conservación y estabilidad
Los reactivos del kit, mantenidos a temperatura ambiente (15-25º C), son
estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Sin embargo
el Standard y el Control deberán conservarse en refrigerador a 2-8ºC.
NOTA: Para obtener mayor exactitud en los resultados, se recomienda
utilizar una curva de calibración.
Para su creación se efectúan seriadas a partir del standard de 200 mg/dl,
obteniendo los siguientes puntos: 200, 100, 50, 25 y 12,5 mg/dl.
Técnica semi-micro
Puede llevarse a cabo con la mitad de los volúmenes indicados
anteriormente.
Muestra
Orina y Líquido cefalorraquídeo ( L.C.R.). Las muestras, pueden conservarse
48 horas en refrigerador (2 - 8º C).
El Standard y Control contienen Azida sódica al 0,09%. Manipular con
precaución. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa
legal vigente.
Técnica
Muestra
Standard
Reactivo A
BL
ml
--2,0
PR
ml
0,1
-2,0
ST
ml
-0,1
2,0
Mezclar e incubar 5 min., a 37ºC.
Leer (E1).
Reactivo B
1,0
1,0
1,0
Mezclar e incubar 1 min., a 37ºC.
Leer (E2).
Lectura
Longitud de onda: 505 nm.
Blanco: El contenido del tubo BL.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Octubre 2011
Kit 1 x 150 ml (Ref.99 30 30). Contents:
A. 1 x 100 ml. Alkaline solution.
Ready-to-use.
B. 1 x 50 ml. Benzethonium clhoride.
Ready-to-use.
C. 1 x 5 ml. Standard.
Solution of Proteins.
Equivalent to: 200 mg/dl. (2 g/L ).
D. 1 x 5 ml. Protein Control.
See the concentration on the vial label.
The concentrations in the reagent solution are:
Na OH
EDTA
Benzethonium ClhorideSurfactants
To calculate the mg Prot./24 h: mg/L x liters
Urine 24 h. = mg/24 h.
To express the results in μg/min, multiply the mg/24
h. result by the factor 0.6944.
Ref. 99 30 32
Ref. 99 30 34
(mg / 24 h) x 0,6944 = μg / min
Ref. 99 23 05
Normal values
C.S.F.: 15 - 45 mg/dl.
Urine: < 12 mg/dl. (< 130 mg/L)
< 150 mg (< 1500 mg) in 24 h
Ref. 99 58 95
It is advisable that each lab determines its own
reference values.
550 mM
76 mM
35 mM
1%
Storage and stability
The reagents, when kept at room temperature (15-25ºC), will remain stable
until the expiration date stated on the label.
On the contrary, the Standard and the Control should be kept in the
refrigerator (2-8º C).
NOTE: To obtain a better recovery, it is recommended to carry out a
calibration curve, by preparing dilutions from the Standard of 200 mg/dl
included in the kit, with the following points: 200, 100, 50, 25, 12.5 mg/dl.
Semi-micro method
It can be carried out with half of the volumes above indicated.
Sample
Prestaciones. Características de funcionamiento.
Precauciones
Reagents
Margen de reacción hasta 200 mg proteínas/dl.
Para concentraciones superiores diluir la muestra con salina y multiplicar
el resultado por el factor de dilución adecuado.
Las características de funcionamiento del producto dependen tanto del
reactivo como del sistema de lectura manual o automático empleados. Los
siguientes datos se han obtenido de forma manual:
Cerebrospinal fluid (CSF) and Urine. Samples may be stored at 2- 8ºC for
48 hours.
Caution
The standard and Control contains Sodium azide at 0.09%. Handle with
care. The disposal of the residues has to be made according to legal local
regulations.
Coeficiente de Variación en la serie: 2,31%
Coeficiente de Variación entre series: 2,85%
Exactitud: 96,7 de porcentaje de recuperación.
La hemoglobina interfiere a partir de 50 mg/dl, la bilirrubina a partir de 45
mg/dl.
Autoanalizadores
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles bajo
demanda.
Bibliografía
Iwata, J., Nishikaza, O., (1979), Clin. Chem., 25, 1317 – 1319.
Luxton, R.W., Patel, P., Keir, G., Thompson, E.J., (1989), Clin. Chem. 35,
1731 – 1734.
PRO4_REG9_LCRBE
Procedure
BL
SA
ST
ml
ml
ml
Sample
-0.1
-Standard
--0.1
Reagent A
2.0
2.0
2.0
Mix well, and incubate 5 min. at 37ºC.
Read (E1).
Reagent B
1.0
1.0
1.0
Mix well, and incubate 5 min. at 37ºC.
Read (E2).
Reading
Wavelength: 505 nm.
Blank: BL contents.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
ISO 9001 / ISO 13485 Certified Company
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revision: October 2011
Performances Characteristics
Reaction range: up to 200 mg of proteins/dl. Concentrations higher than
this value will require a prior dilution of the sample with saline (NaCl 0.9%).
Multiply the result by the dilution factor used.
The analytical performance characteristics of the product depend both
of the reagent and the reading system used, manual or automatic. The
following data have been obtained manually.
Intraserie Variation Coefficient: 2.31%
Interseries Variation Coefficient: 2.85%
Recovery: 96.7 %.
Concentrations of haemoglobin up to 50 mg/dl, as well as bilirubin up to 45
mg/dl do not interfere with the assay.
Autoanalyzers
Technical bulletins for different analyzers are available upon request.
References
Iwata, J., Nishikaza, O., (1979), Clin. Chem., 25, 1317 – 1319.
Luxton, R.W., Patel, P., Keir, G., Thompson, E.J., (1989), Clin. Chem. 35,
1731 – 1734.
PRO4_REG9_LCRBE
PROTÉINES LCR/URINE
MÉTHODE UTILISANT LE CHLORURE DE BENZÉTHONIUM
Pour la détermination in vitro des protéines dans l’urine et le LCR
Principe
À un pH alcalin, les protéines de l’échantillon sont dénaturalisées. Les
éventuelles interférences dues aux ions, notamment au magnésium,
sont éliminées à l’aide de l’EDTA. Ensuite, les protéines et le chlorure de
benzéthonium forment un complexe qui produit une turbidité quantifiée par
spectrophotométrie à 505 nm.
Calculs
ΔE = E2 – E1
ΔE ESSAI
x 200 = mg de protéines/dl
ΔE ÉTALON
Réactifs
Kit 1 x 150 ml (Réf. 99 30 30). Contenu:
A. 1 x 100 ml Solution alcaline
Prêt à l’emploi.
B. 1 x 50 ml Chlorure de benzéthonium.
Prêt à l’emploi.
C. 1 x 5 ml Étalon.
Solution aqueuse de protéines.
Équivalente à 200 mg/dl (2 g/ l).
D. 1 x 5 ml Contrôle.
Voir la concentration sur l’étiquette de la fiole.
Pour calculer les mg de protéines par 24 heures: mg/l x
litres. Urines.24 h = mg/24 h
Pour exprimer les résultats en μg/min, multiplier les
mg/24 h par le facteur 0,6944.
Réf. 99 30 32
Réf. 99 30 34
(mg/24 h) x 0,6944 = μg/min
Réf. 99 23 05
Valeurs normales
LCR: 15 à 45 mg/dl
Urine: < 12 mg/dl (< 130 mg/l)
< 150 mg (< 1 500 mg) sur 24 heures.
Réf. 99 58 95
Les concentrations de la solution réactive sont les suivantes:
Na OH
EDTA
Chlorure de benzéthonium
Tensioactifs
Il est conseillé que chaque laboratoire établisse ses
propres valeurs de référence.
550 mM
76 mM
35 mM
1%
Conservation et stabilité
Conservés à température ambiante (15 à 25 ºC), les réactifs du kit sont
stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Cependant,
il est conseillé de conserver l’étalon et le contrôle au réfrigérateur à une
température comprise entre 2 et 8 ºC.
REMARQUE: pour obtenir une meilleure précision des résultats, il est
recommandé d’utiliser une courbe d’étalonnage.
À cet effet, des dilutions en série à partir de l’étalon de 200 mg/dl permettent
d’obtenir les points suivants: 200, 100, 50, 25 et 12,5 mg/dl.
Technique semi-micro
Elle peut être effectuée avec la moitié des volumes indiqués précédemment.
Échantillon
Urine et liquide céphalorachidien (LCR). Les échantillons peuvent être
conservés pendant 48 heures au réfrigérateur (2 à 8 ºC).
Précautions d’emploi
L’étalon et le contrôle contiennent de l’azide de sodium à 0,09 %. Manipuler
avec précaution. L’élimination des déchets doit être effectuée conformément
aux normes en vigueur.
Fonctionnement et caractéristiques de performance du dispositif
Limite de la réaction : jusqu’à 200 mg de protéines/dl.
Pour des concentrations supérieures, diluer l’échantillon avec une solution
saline et multiplier le résultat par le facteur de dilution adéquat.
Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de
lecture manuel ou automatique utilisé. Une technique manuelle a permis
d’obtenir les données suivantes:
Coefficient de variation dans la série: 2,31 %
Coefficient de variation entre les séries: 2,85 %
Exactitude: le pourcentage de récupération est de 96,7 %.
Technique
Échantillon
Étalon
Réactif A
BL
ml
--2,0
ESSAI
ml
0,1
-2,0
ÉT.
ml
-0,1
2,0
Mélanger et incuber pendant 5 minutes à
37 ºC. Lire (E1).
Réactif B
1,0
1,0
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Entreprise certifiée ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Révision: Octobre 2011
Analyseurs automatiques
Des adaptations à différents analyseurs automatiques sont disponibles sur
demande.
1,0
Mélanger et incuber pendant 1 minute à
37 ºC. Lire (E2).
Lecture
Longueur d’onde: 505 nm
Blanc: le contenu du tube BL.
L’hémoglobine et la bilirubine interfèrent à partir de 50 mg/dl et de 45 mg/
dl respectivement.
Bibliographie
Iwata, J., Nishikaza, O., (1979), Clin. Chem., 25, 1317 – 1319.
Luxton, R.W., Patel, P., Keir, G., Thompson, E.J., (1989), Clin. Chem. 35,
1731 – 1734.
PRO4_REG9_LCRBE
958 412 886
629 636 705
http://www.cromakit.es/
Calle Tucumán 8 Nave B 18200 Maracena (Granada)
0
