Herramientas de Detección

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Diagnós.co
Molecular
1
Herramientas
de
Detección
‐
Colorimetría
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Molecular
1
Técnicas
de
Detección
 
Colorimetría
 
Fluorescencia
Baja
Dificultad
Riesgo
Sensibilidad
 
Radioac.vidad
Alta
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Principio
Físico
de
las
Técnicas
de
Detección
 
Colorimetría
 
Fluorescencia
 
Radioac.vidad
Emisión
de
ParJculas
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Colorimetría
–
Detección
de
Color
 
Detección
de
prescencia/auscencia
de
reacciones
por
intensidades
de
color
 
En
Física
/
Química
Analí.ca:
Determinación
de
concentraciones
de
soluciones
por
comparación
de
color
hPp://en.wikipedia.org/wiki/Colorimetry_(chemical_method)
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El
color
son
fotones
cargados
de
energía
–
Energía
electromagné.ca
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1
Longitud
de
Onda
y
Energía
 f
*
λ
=
c
f
–
Frecuencia
λ
–
Longitud
de
onda
(wavelength)
c
–
Velocidad
de
la
luz
 E
=
h
*
f
f
–
Frecuencia
h
–
Constante
de
Planck
E
–
Energía
 E
=
h
*
c
/
λ
hPp://cimss.ssec.wisc.edu/satmet/modules/spectrum/wavelength.html
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Longitud
de
Onda
y
Energía
hPp://en.wikipedia.org/wiki/Color
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Espectro
Visible
del
Color
Longitud
de
Onda
hPp://hirise.lpl.arizona.edu/HiBlog/tag/false‐color/
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1
Espectro
hPp://en.wikipedia.org/wiki/Visible_spectrum
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Color
Absorvido
y
Transmi.do
‐
Longitud
de
Onda
Dominante
y
Complementaria
 
El
color
observado
corresponde
a
las
longitudes
de
onda
y
energías
no
absorvidas
 
El
color
absorvido
es
el
“complementario”
a
la
fuente
de
color
(normalmente
blanca)
Dominant/complementary
wavelength
example
on
the
CIE
color
spaceThe
"x"
marks
the
color
in
ques.on.
For
the
white
point
indicated,
the
dominant
wavelength
for
"x"
is
on
the
nearer
perimeter,
around
600
nm,
while
the
complementary
wavelength
is
opposite,
around
485
nm.
Intui.vely,
the
dominant
wavelength
of
"x"
corresponds
to
the
primary
hue
of
"x".
hPp://en.wikipedia.org/wiki/Dominant_wavelength
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Molecular
1
Todas
las
moléculas
/
átomos
.enen
un
espectro
de
absorción/emisión
Hidrógeno
Fierro
Longitud
de
Onda
Absorbancia
Transmitancia
hPp://www.educa.madrid.org/web/ies.rayuela.mostoles/Publicaciones/Color/queescolor.htm
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Molecular
1
Energía
Energía
Energía
de
Nivel
Electrónico
Energía
de
Vibraciones
(infrarojo
lejano
–
medio)
Energía
Rotacional
(infrarojo
lejano
‐
microondas
Analy.cal
Chemistry
–
Gary
D.
Chris.an
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1
Ley
de
Beer‐Lambert
(Beer‐Lambert
Law)
Transmitancia
Absorbancia
α
–
Coefficiente
de
Absorción
l
–
Longitud
c
–
Concentración
ε
–
Absorbavilidad
molar
Transmitancia
%T
=
I
*
100
/
I0
=
10^(2‐A)
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Molecular
1
Espectrofotómetro
 
Medición
de
colores
de
diferentes
longitudes
de
onda
 
Calibración
con
Esandares
Fuente
hPp://www.biology.lsu.edu/introbio/tutorial/Spec/spectrophotometry.html
Filtro
Monocromá.co
Muestra
Detector
Lectura
de
Salida
hPp://www.beckman.com/products/images/analy.cal/uvvis/du800.jpg
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1
Colorimetría
–
Detección
de
Concentraciones
de
DNA
/
RNA
y
Proteínas
 
DNA
y
RNA
absorben
a
~
260nm
(pico
máximo)
 
 
 
 
Se
expone
la
muestra
a
radiación
260nm,
entre
mas
luz
absorban,
más
concentración
(Beer’s
Law)
hPp://abe.leeward.hawaii.edu/
Protocols/General%20Guidelines
%20for%20Working%20with
%20RNA.htm
 
Anillos
Aromá.cos
absorben
alrededor
de
280nm
hPp://hcgs.unh.edu/protocol/basic/
rnaabs.html
 
hPp://en.wikipedia.org/wiki/
Quan.fica.on_of_nucleic_acids
Relación
Absorbancia
260nm
/
280nm
hPp://www.kenkyuu.net/js/nacalc.html
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Molecular
1
Colorimetría
–
Detección
de
Concentraciones
de
DNA
/
RNA
y
Proteínas
 
Lecturas
>
0.15
abs
 
A200=1

40ug/ml
RNA
 
Ra.o
de
2.0

Pureza….
 
Fenol
Absorbe
alrededor
de
270nm
 
Influencia
de
pH,
pH
=
7.5
hPp://www.kenkyuu.net/js/nacalc.html
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Molecular
1
Colorimetría
–
Detección
de
Concentraciones
de
DNA
/
RNA
hPp://www.kenkyuu.net/js/nacalc.html
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Diagnós.co
Molecular
1
ELISA
–
Enzyme
Linked
Immuno‐Assay
A
sandwich
ELISA.
(1)
Plate
is
coated
with
a
capture
anJbody;
(2)
sample
is
added,
and
any
anJgen
present
binds
to
capture
anJbody;
(3)
detecJng
anJbody
is
added,
and
binds
to
anJgen;
(4)
enzyme‐
linked
secondary
anJbody
is
added,
and
binds
to
detecJng
anJbody;
(5)
substrate
is
added,
and
is
converted
by
enzyme
to
detectable
form.
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1
ELISA
–
Enzyme
Linked
Immuno‐Assay
Abs
Dilución
Well
A1
A2
A3
A4
A5
A6
B1
B2
B3
B4
B5
B6
C1
C2
C3
C4
C5
C6
D1
D2
D3
D4
D5
D6
Blue
+
0
0
0
0
+
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
+
+
++
++
0
0
Yellow
+
0
0
0
0
+
+
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
++
++
++
++
0
0
Absorbance
at
450mm 0.112 0.414 0.490 0.431 0.533 0.547 0.684 0.597 0.538 0.488 0.524 0.485 0.681 0.489 0.645 0.615 0.515 0.465 1.052 0.466 0.488 0.581 0.468 0.521 [email protected]
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Molecular
1
Tarea
 
Que
es
Fluoresencia,
sus
parJculas
y
3
ejemplos
de
aplicaciones
en
biología
 
Que
es
radioac.vidad,
sus
parJculas
y
3
ejemplos
de
aplicaciones
en
biología
 
A
mano
 
Máximo
2
páginas
 
Mínimo
100
palabras