protocolo para la produccion de semen en ciavt

1
PROTOCOLO PARA LA PRODUCCION DE SEMEN EN CIAVT
Especialmente indicado para la preparación de semen bovino congelado en
pajuelas de 0,50 cc.
1. Preparación de los toros para la extracción de semen.
En la tarde del día previo a la extracción, se procede a:
a) Baño de los toros.
b) Control vello prepucial.
c) Traslado de los toros a un galpón para pernoctar.
El día de la extracción, se trasladan los toros a la explanada lateral al patio de
salto y se procede a:
2. Excitación pre-coital (montas falsas/maniobras a realizar) – Regla = XXRX
Donde X= monta falsa
Donde R= reposo activo del toro. En esta etapa el operario va en busca de la
vagina artificial en la sala de vaginas.
3. Extracción de semen con Vagina Artificial (V.A.): los tipos de camisas
utilizadas son la Francesa IMV y la Inglesa Minitub.
La temperatura dentro de la VA oscila en un rango desde los 38 grados
centígrados hasta los 52 grados centígrados, dependiendo del donante.
Cada tubo colector de semen se identifica con el código de cada donante.
4. Recepción del eyaculado en el Laboratorio. Temperatura bañomaría = 30°C
5. Instrumental a utilizar:
FOTOMICROSCOPIO III (Zeiss): óptica (objetivo de Fase Inversa de 20x /0.5).
SPERM VISION (SISTEMA CASA)
CAMARAS DESCARTABLES LEJA
DILUTOR ELECTRÓNICO (1/29)
MICRO PIPETA (graduada en 2,3 ul.
PLATINAS TERMICAS (37/38°C)
2
6. Valoración del eyaculado:
a) Macroscópica:
volumen – color – aspecto
b) Microscópica:
realizada con SPERM VISION (valoración
determinada por fotografía digital en 10 campos microscópicos diferentes).
 Concentración espermática:
a) Por ml (umbral: 400.000 zoides)
b) Total eyaculado
 Motilidad espermática:
a) % de zoides mótiles (umbral 60 %)
b) Zoides con MP (Motilidad Progresiva): umbral 50%
c) Zoides con ML (Motilidad Local)
d) Zoides SM (Sin Motilidad)

Morfología espermática: (umbral = 70% de zoides normales)

Dilución del semen: zoides x dosis (umbral stándarizado: 16 millones de
zoides mótiles por dosis).

N° de dosis a procesar.
Al aprobarse el semen crudo se realiza una primera dilución, incorporando
diluyente hasta un volumen final (eyaculado + diluyente) de 20 cc y se lo lleva a
etapa de acondicionamiento.
Esta dilución tiene por finalidad uniformar los tiempos de la curva de degradación
de la temperatura en la cámara climatizada a 4 grados centígrados.
7. Procesado del eyaculado
a) Acondicionamiento:
cámara climatizada a 4°C:
degradación de la T°C = 2 hs.
b) Dilución del semen:
A las 2,5 horas de la extracción.
Diluyente a utilizar: Citrato-yema o Triladyl o
Andromed.
c) Estabilización/equilibración: t iempo adecuado = 3 horas
Importante: El lapso de tiempo entre la colecta del semen y su
criopreservación no debe ser menor a 5 hs.
3
d) Fraccionamiento / Envasado: Máquina llenadora de pajuelas Mod. MRS-1
(IMV/Francia).
8. Criopreservación del semen:
Congelado de pajuelas:
congelado horizontal, en rampas IMV, sobre
vapores de Nitrógeno (T°C inicial = -120°C)
durante 7´ (curva standard).
9. Evaluación del semen criopreservado: Control de Calidad.
a) Materiales:
Fotomicroscopio III (Zeiss) c/objetivo de fase inversa de 20x/0.5
Sperm Vision (SISTEMA CASA)
Platina térmica regulada a 37/38°C
Equipo de fluorescencia
b) Descongelado del semen: a 35°C (Cito-Thaw)
c) Pruebas a realizar:
. Observación Directa (hora 0)
. Morfología espermática
. Recuento espermático, Mótiles y MP por dosis.
. Prueba de Viabilidad espermática (fluorescencia)
c) Parámetros a considerar:
-
Porcentaje de zoides c/ MP = mínimo aceptado 30%
(MP = Motilidad Progresiva)
Vigor: escala 0 a 5 , mínimo aceptado grado 3
Morfología espermática. Máximo aceptado 30% de formas anormales.
Total de zoides con MP/dosis = umbral: 6.000.000
10. Almacenamiento del semen: envasado en gobelets IMV de 10 pajuelas de
0.5 ml (cada rack contiene 2 gobelets).