EL CARIOTIPO

EL CARIOTIPO
1.
2.
3.
4.
5.
Introducción
Metodología
Clasificación de los cromosomas
Técnicas de bandeado cromosómico
Citogenética molecular
Metodología
EL CARIOTIPO
Tejido sólido
Metodología
EL CARIOTIPO
Sangre periférica
Fitohemaglutinina
G-banding
EL CARIOTIPO
Metodología
Metafase humana teñida con Giemsa
EL CARIOTIPO
Clasificación de los cromosomas
Los cromosomas se clasifican por pares de homólogos y
se ordenan atendiendo a:
• Tamaño
• Posición del centrómero (constricción primaria)
• Presencia de constricciones secundarias
En el cariotipo humano los cromosomas se clasifican en siete grupos:
A, B, C, D, E, F y G
EL CARIOTIPO
Clasificación de los cromosomas
Cariotipo estándar
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
1. Bandas que marcan todo el cromosoma
Bandas Q
Bandas G
Bandas R
Bandas G de alta resolución
2. Bandas que marcan regiones específicas
Bandas C
Bandas T
Bandas NOR
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan todo el cromosoma
Bandas Q
ADN rico en AT
Bandas Q Quinacrina  patrón similar a las bandas G se observan con
el microscopio de fluorescencia
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan todo el cromosoma
Bandas G
ADN rico en AT
Resultan de interacciones del ADN y proteínas con los colorantes que
componen la tinción Giemsa. Se desnaturalizan proteínas con tripsina.
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas-G
Los cromosomas se tiñen en zonas oscuras y claras
• Las bandas G oscuras son regiones de replicación
tardía en la fase S, contienen cromatina más
condensada
• Las bandas G claras se replican generalmente más
tarde en la fase S. Cromatina menos condensada.
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan todo el cromosoma
ADN rico en GC
Bandas R
La técnica de bandas R supone la desnaturalización de regiones del
cromosoma por calor seguida por tinción de Giemsa
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan todo el cromosoma
Bandas de alta resolución
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas de alta resolución
Nº Bandas
400
550
850
• Bandas de alta resolución Sincronización en
prometafase (methotrexate) bandas G
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma
Bandas C
Bandas centroméricas tiñe la heterocromatina
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma
Bandas t
Se tiñen los telómeros
EL CARIOTIPO
Técnicas de bandeado cromosómico
Bandas que marcan regiones específicas del cromosoma
Bandas NOR
Se tiñen los organizadores nucleolares de los cromosomas acrocéntricos
EL CARIOTIPO
Citogenética molecular
Aplicación de las técnicas de biología molecular a
preparaciones citogenéticas.
Identificación de reestructuraciones producidas “de
novo” y de cromosomas marcadores.
Detección de anomalías cromosómicas en células en
interfase.
Estudio de la estructura y función de regiones
cromosómicas específicas.
EL CARIOTIPO
Citogenética molecular
Hibridación “In Situ” con fluorescencia (FISH)
Una o varias sondas de ADN,
unidas a moléculas de marcaje
fluorescentes, se hibridan con
cromosomas en una preparación,
que se visualizan n un
microscopio de fluorescencia.
Hibridación “In Situ” Fluorescente
(FISH)
Cromosoma
en el
portaobjetos
desnaturalización
ADN doble
hélice
desnaturalización
Marcaje de la
sonda con una
molécula
fluorescente
Hibridación de la prueba
con el cromosoma
desnaturalizado
Tipos de sondas de ADN
Centroméricas (α-satélite)
Sonda α-satélite específica de
centrómero
•Metafase: Identificación de
cromosomas
•Interfase: Recuento de cromosomas
Tipos de sondas de ADN
Sonda específica de locus
con sonda control para el
cromosoma
específica de locus
Sonda para identificar la región
delecionada
Sonda para identificar el
cromosoma
Tipos de sondas de ADN
Teloméricas y subteloméricas
(TTAGGG)n
Sitio
de
sondas
FISH
Altas concentraciones de genes
deleciones microscópicas o
submicroscópicas pueden tener un
impacto significativo.
Juegan un papel crítico en el
apareamiento de los cromosomas en
meiosis
Pintado
Tipos de sondas de ADN
Marcaje del cromosoma entero:
pintado
Identifica el material de un
determinado cromosoma
 En translocaciones
cromosoma 8
Multiplex FISH: Multi-FISH
El ADN de cada cromosoma humano se marca directamente con
uno o más fluorocromos, de una manera combinatoria, resultando
un color único para cada uno de los 24 cromosomas
Los 24 tonos de color no pueden ser distinguidos por el ojo humano
Se captura un conjunto de imágenes en la escala de grises,
uno por cada uno de los cinco filtros distintos
Las imágenes son procesadas por el ordenador para dar una
imagen pseudocoloreada de la metafase y del cariotipo
Cromosoma 1
Cromosoma 2
Cromosoma 3
METAFASE
Azofeifa et al.
CARIOTIPO
Azofeifa et al.