M.R.S. Agar

M.R.S. Agar
DM613. Para el aislamiento, cultivo y enumeración de
Lactobacilos y otras “bacterias ácido lácticas” de
alimentos y otros materiales.
Contenido: Ver etiqueta del envase.
Composición*
Mezcla de peptona
Extracto de levadura
Glucosa
Tween 80
Fosfato dipotasio de hidrógeno
Citrato triamonio
Acetato de sodio anhidro
Sulfato de magnesio 7H2O
Sulfato de magnesio anhidro
Agar
pH final: 6.2 ± 0.2
Concentración
del medio:
18.0g/litro
4.0g/litro
20.0g/litro
1.0ml/litro
2.0g/litro
2.0g/litro
3.0g/litro
0.2g/litro
0.034g/litro
12.0g/litro
Conservación y caducidad
Todos los contenedores deben ser mantenidos cerrados
herméticamente y almacenados en un lugar seco a 25°C
o menos hasta la fecha de caducidad mostrada en la
etiqueta del envase. Algunos medios requieren
almacenamiento a 2-8°C, referirse a la etiqueta del
envase.
Precauciones
Exclusivamente para uso diagnóstico in vitro. Respetar
las precauciones de seguridad y utilizar técnicas
asépticas. Debe ser utilizado solo por personal de
laboratorio cualificado y con experiencia. Antes del
desecho, esterilizar todo el material biológico. Consultar
la fecha de seguridad del producto (disponible si se
requiere o a través de la pagina en Internet de MAST).
Materiales requeridos pero no proporcionados
Accesorios y productos para análisis microbiológico de
base, por ejemplo: anillos para análisis, suplementos
selectivos MAST, esponjas, hisopos, incineradores y
termostatos, etc... Otros, como reactivos bioquímicos y
serológicos, y aditivos como sangre.
Procedimiento
1. Referirse a la etiqueta del envase para cantidades y
volúmenes requeridos. Preparar MAST M.R.S. Agar
(DM613) suspendiendo los polvos en agua destilada
o desionizada. Para los envases de sobre, disolver el
contenido entero del sobre en el volumen mostrado
en la etiqueta.
2. Autoclave a 121°C (15 p.s.i.) durante 15 minutos.
3. Enfriar a 50-55°C y mantener a esta temperatura.
Ajustar el pH si se requiere medio acidificado.
-1
4. Preparar un homogenato 10 usando un stomacher o
un mezclador y diluciones seriales posteriores de la
muestra alimenticia.
-1
5. Colocar 1ml de un homogenato a 10 y cada dilución
en placas petri separadas. Añadir 15ml de M.R.S.
agar fundido y enfriado a 45°C a cada placa. Mezclar
uniformemente y dejar solidificar.
6. Incubar bajo condiciones anaerobias o
microaeróbicas 5% de dióxido de carbón, 5-10% de
oxígeno) durante 2-5 días a 30°C. Una temperatura
mas baja de 22-25°C puede ser usada para
recuentos de psicotrofos o 42°C para termófilos. Si
las instalaciones son solamente para cultivo aeróbico,
añadir una capa de aproximadamente 5ml de M.R.S.
agar a cada placa después de que haya solidificado
para producir una placa con capas.
7. No dejar que la superficie de las placas se seque ya
que esto inhibirá los lactobacilos debido a un
incremento en la concentración de acetato de la
superficie del agar.
Interpretación de resultados
Después de la incubación, contar el número de colonias
de cada tipo de colonia en las placas que contengan
entre 15 y 150 colonias, y computar el numero de
lactobacilos / “bacterias ácido lácticas” por gramo de
comida.
Control de calidad
Comprobar si hay signos de deterioro. El control de
calidad debe ser llevado a acabo con al menos un
organismo que demuestre la actuación esperada. No
usar si el resultado del control del microorganismo es
incorrecto. La lista de abajo ilustra una variedad de
actuaciones de las cepas de control de uso rutinario, que
el usuario final puede obtener facilmente.
Microorganismos
Lactobacillus acidophilus
ATCC 314
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Resultado
Crecimiento
Ningún
crecimiento
Limitaciones de uso
Nota: - MAST M.R.S. Agar recuperará las “bacterias
ácido lácticas” y permitirá el crecimiento de levaduras. La
diferenciación entre “bacterias ácido lácticas” y
lactobacilos puede ser conseguida mediante el examen
de películas de diferentes formas de colonias usando el
microscopio óptico.
Referencias
Bibliografía disponible si se requiere.
IFU402 MM 09/08 V2
MAST es una marca registrada
ATCC es una marca registrada de la American
Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA
*La composición puede variar para seguir los criterios de actuación