Metabolitos activos en la hoja de Quixtan

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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
ESCUELA DE QUIMICA FARMACEÚTICA
DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUÃMICA
CURSO DE FITOQUÃMICA
TRABAJO DE INTEGRACIÓN
Información General:
• Evaluación de la actividad antioxidante y caracterización fitoquÃ-mica de alcaloides en hoja de
Quixtán (Solanum wendlandii)
• Duración 4 semanas.
• INVESTIGADORES
• Otros Departamentos que colaboraron para la Investigación:
LIPRONAT
Encargada: Suly Cruz
• Presentación del Proyecto
• RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue extraer, identificar y cuantificar el metabolito secundario más abundante
del Quixtan (Solanum welandi), por pertenecer a la familia de la Solanáceas, se comenzó por extraer e
identificar alcaloides, cumarinas y saponinas, para ello se empleo un extracto etanólico, que se realizó a
partir de un extracto concentrado semisólido de esta planta.
La investigación de los metabolitos secundarios se realizó por pruebas presuntivas, utilizando para
alcaloides la observación de precipitado en tubos de ensayo con los reactivos de Mayer, Dragendorff, ___, y
por medio de cromatografÃ-a en capa fina (CCF), utilizando como revelador Dragendorff. En las pruebas en
tubos y en CCF no se observo la presencia de alcaloides. AsÃ- también para la investigación de saponinas
se realizaron pruebas presuntivas en tubos y CCF, en los tubos se observo la presencia de espuma, en el tubo
conteniendo la muestra de Quixtan al agitarse no mostró la aparición de espuma persistente, en la CCF
después de asperjar con anisaldehido−ácido sulfúrico, no se observo la presencia de saponinas. Al
cuantificar en un espectrofotómetro UV/vis, el resultado también fue negativo, por lo que no se detecto la
presencia de saponina en esta planta. En la investigación de cumarinas el resultado observado en la CCF el
resultado observado también fue negativo, al no observar ninguna mancha caracterÃ-stica de las cumarinas.
A partir del extracto etanólico, también se deseo investigar la actividad antioxidante de esta planta, para
ello se empleo CCF y se asperjo con DPPH, en la cual toda la placa se tiño de fucsia, sin observar espacios
sin teñir en la misma, por lo que puede observarse que la actividad antioxidante de esta planta en muy poca
o nula.
• PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1
Hoy en dÃ-a en Guatemala es un poco complicado encontrar información acerca del Quixtan (Solanum
welandi), por lo que es conveniente realizar con ella un tamizaje fitoquÃ-mico, determinando asÃ- los
metabolitos secundarios que se encuentran en esta especie de la familia de las Solanáceas; asÃ- también
con el fin de ampliar la información con respecto a esta planta, es muy conveniente cuantificar estos
metabolitos, para determinar los más importantes que se encuentren en mayor concentración.
• OBJETIVOS
• Objetivo General
Extraer el metabolito más abundante del Quixtan (Solanum welandi).
• Objetivos EspecÃ-ficos
2.3.2.1 Identificar el metabolito secundario de mayor representación en un extracto etanólico del Quixtan
(Solanum welandi).
2.3.2.2 Cuantificar el metabolito secundario de mayor representación extraÃ-do en la especie.
2.3.2.3 Evaluar la actividad antioxidante de esta planta.
• HIPOTESIS
De la familia de las Solanáceas el metabolito secundario de mayor predominio son los alcaloides, seguidos
por las cumarinas y saponinas, por lo que son los metabolitos de elección para la extracción y
cuantificación en el Quixtan.
• ANTECEDENTES
2.5.1 Compuestos Bioactivos
Se les conoce como fitoquÃ-micos, son compuestos que pueden tener efectos fisiológicos en el cuerpo,
capaces de cambiar funciones básicas de la célula en un nivel metabólico cuando el cuerpo se puede ver
afectado por alguna enfermedad [1].
Los fitoquÃ-micos pueden actuar de diferentes maneras para reducir el riesgo de enfermedades: reducen la
formación de la ateroesclerosis, porque actúan como antioxidantes, incrementan la actividad de las enzimas
que destruyen carcinógenos o suprimen enzimas que forman o activan carcinógenos ya que los
fitoquÃ-micos pueden modificar la expresión genética de las enzimas; estimulan el sistema inmune para
responder a células anormales; interfieren en la estimulación hormonal de algunos cánceres; reducen el
riesgo de infección porque actúan como agentes antimicrobiales. Muchas de estas funciones tienen
implicaciones para el desarrollo de enfermedades del corazón, cáncer y otras enfermedades [1].
2.5.1.1 Clasificación de los FitoquÃ-micos
Los fitoquÃ-micos no están clasificados como nutrientes, ya que son sustancias indispensables para generar
energÃ-a o construir estructuras. No obstante, existe la evidencia de que los fitoquÃ-micos pueden
desempeñar otras funciones importantes relacionadas con la prevención de enfermedades [1].
A continuación se enumeran los fitoquÃ-micos de interés en dicho estudio y se describen sus funciones
[1]:
• Carotenoides: en estos se incluyen a los beta−carotenos y el licopeno. Pueden actuar como
2
antioxidantes . [1]
• Alcaloides: son sustancias básicas, que se caracterizan por poseer uno o más átomos de
nitrógeno en un sistema heterocÃ-clico. Poseen actividad farmacológica significativa usualmente
sobre el sistema nervioso central [2].
• Flavonoides: muchos pueden actuar como antioxidantes; ligar nitratos en el estómago previniendo la
conversión a nitrosaminas e inhibir la proliferación de células [1].
• Saponinas: pueden interferir con la replicación del ADN, prevenir la multiplicación de células
cancerÃ-genas y estimular las respuestas inmune [1].
Mencionadas las funciones de cada uno de estos constituyentes, se puede decir que la ingesta prolongada y
constante de vegetales que contengan estos constituyentes, representa una posibilidad de mejoramiento de la
salud y de prevención de enfermedades.
2.5.2 Familia Solanaceae
Es una familia de plantas herbáceas o leñosas, anuales, bianuales o perennes; erguidas o decumbentes. Las
hojas son generalmente alternas, simples, pecioladas o subsésiles; y sin estÃ-pulas. Frecuentemente son
inodoras pero, en ocasiones, son aromáticas o fétidas. Las flores son en general hermafroditas, si bien hay
especies monoicas, andromonoicas o dioicas. Éstas a su vez pueden ser solitarias o estar agregadas en
inflorescencias cimosas, terminales o axilares. Además son de tamaño intermedio, fragantes, fétidas o
inodoras [3,4].
Dicha familia es perteneciente al orden Solanales, de las dicotiledóneas (Clase Magnoliopsida).[
]Comprende aproximadamente 98 géneros y unas 2700 especies,[] con una gran diversidad de hábito,
morfologÃ-a y ecologÃ-a; muchas de ellas son conocidas por el elevado contenido en alcaloides [3,4].
La familia es cosmopolita, distribuyéndose por todo el globo con la excepción de la Antártida. La mayor
diversidad de especies se halla en América del Sur y América Central. En esta familia se incluyen
especies alimenticias tan importantes como la papa (Solanum tuberosum), el tomate (Solanum lycopersicum)
entre otros. Al igual que muchas plantas ornamentales populares o no populares [3]. Entre estas últimas, una
de ellas constituye el objeto de estudio de la investigación, esta planta es la llamada comúnmente Quixtán,
cuyo nombre cientÃ-fico es el siguiente, Solanum wendlandii.
A continuación se describen las caracterÃ-sticas más importantes de la planta, asÃ- como del género al
que pertenece.
2.5.3 Género Solanum
Con un número estimado de 1400 especies, Solanum es el género más rico en especies de la familia
Solanaceae y uno de los más grandes de las Angiospermas [5].
Solanum comprende plantas herbáceas, arbustos, árboles o lianas, con o sin espinas, glabras o pubescentes,
con pelos ramificados o simples, frecuentemente glandulares [5].
Las hojas son alternas o apareadas, simples a pinatilobadas o compuestas, pecioladas o sésiles, sin
estÃ-pulas. La inflorescencia es una cima. Las flores son usualmente perfectas, actinomorfas o cigomorfas. El
cáliz es acampanado, muchas veces acrescente en el fruto. La corola es rotada, campanulada, estrellada o
urceolada. El color de la corola puede ser blanco, verde, amarillo, rosado, o púrpura. Los estambres pueden
ser iguales o desiguales, los filamentos son en general cortos e insertos en la base de la corola. Las anteras son
basifijas y se abren por poros terminales que muchas veces se expanden a aberturas longitudinales. El ovario
es bi−carpelar, con numerosos óvulos. El estilo está articulado en la base, el estigma es capitado. El fruto es
una baya, usualmente carnosa, pero ocasionalmente seca, con muchas semillas chatas [5].
3
La mayorÃ-a de las especies de Solanum son originarias de Sudamérica, especialmente en los Andes.
Existen centros secundarios de diversidad y endemismo en Norte América, América Central, el Este de
Brasil, las Indias Occidentales, Australia, Ãfrica y Madagascar [5].
Las plantas de este género son ricas en alcaloides, potencialmente peligrosos para quienes las
consuman, sin embargo, suelen ubicarse sólo en las partes verdes y tener poca resistencia a las
temperaturas altas [5].
2.5.4 MonografÃ-a de Solanum wendlandii
• Nombre cientÃ-fico o latino: Solanum wendlandii [6].
• Nombre común o vulgar: Solano o Quixtán [6].
• Familia: Solanaceae (Solanáceas) [6].
• Origen: Costa Rica [6].
• Descripción: planta enredadera o trepadora distribuida por trópicos y subtrópicos [6,7].
• Hojas: completamente glabras, dispuestas en el extremo de las ramas; son simples y lanceoladas;
trilobuladas o trifoliadas (las intermedias), subdivididas en 4−6 pares de folÃ-olos (las inferiores) [6].
• Tallos: poseen espinas curvadas [7].
• Flores: de color lila situadas en la extremidad de ramas colgantes, reunidas en espectaculares mazos
colgantes. Las anteras son amarillentas. Florece en verano avanzado [6,7].
• Frutos: bayas anaranjadas [7].
• Usos: para recubrir glorietas, muros, para formar respaldares contra los muros, etc. Su uso
comúnmente es ornamental. Sin embargo, la planta ha sido usada en medicina tradicional. Y puede
ser tóxica como muchas plantas del género Solanum [6,7].
• Cultivo: a pleno sol. Climas cálidos. No tolera las heladas. Se hiela a 0ºC. En suelo fresco, ligero y
profundo. Necesita de riego abundante (más frecuente en verano) [6].
• Multiplicación: por esqueje en verano [6].
En Guatemala está a alturas de 1000−1800msnm. Es comúnmente sembrada en jardines [7].
2.5.5 Estudios realizados en plantas autóctonas
En 1988, Zelada, E. realizó el estudio Biodisponibilidad de carotenos en plantas autóctonas de Guatemala,
en donde se analizaron las siguientes plantas: Bledo (Amaranthus spp.), ChipilÃ-n (Crotalaria longirostrata),
Hierba Mora (Solanum spp.) y Quixtán (Solanum shanoni) en su preparación más común. En este
estudio se encontró que las ratas de estudio presentaron una respuesta significativamente mejor con la dieta
de Quixtán que con las otras tres dietas vegetales; mostrando esta misma planta alto porcentaje de
biodisponibilidad de vitamina A, seguida por los valores del ChipilÃ-n. Cabe mencionar que dicho estudio no
utilizó la misma especie de Solanum, que en dicha investigación se estudió [8].
En 2003, Campos, J. llevó a cabo el estudio Contenido de macronutrientes, minerales y carotenos en plantas
comestibles autóctonas de Guatemala. En el estudio se incluyeron cinco hojas y un bulbo, siendo éstas:
Anillito (Rytidostylis gracilis), Barba San Nicolás (Calandrinia micrantha), ChipilÃ-n (Crotalaria
longirostrata), Hierba seca (Bidens alba), Quixcamote (Xanthosoma violaceum) y Quixtán (Solanum
wendlandii); las cuales se analizaron tanto en su forma cruda como en la preparación más común.
Obteniéndose como fuente de β−carotenos al chipilÃ-n, el anillito y la hierba seca [1].
En 2007, se realizó un estudio bajo la dirección de LIPRONAT, en el cual se investigó la presencia de
algún tipo de metabolito secundario activo, en el extracto alcohólico de las hojas del Quixtán (Solanum
wenlandii), del cual se obtuvo el concentrado utilizado en dicha investigación.
4
• METODOLOGIA
2.6.2.1 Recursos humanos
• Eduardo Roberto Ventura Cano ... autor.
• Silvia MarÃ-a Rivera Valdez ............................................... autor.
• Jennifer Alejandra Gladámez Monroy ...............................autor.
• Sully Cruz ..................................................................... asesora.
2.6.2.2 Recursos fÃ-sicos
• Laboratorio de Farmacognosia y FitoquÃ-mica de la Facultad de Ciencias QuÃ-micas y Farmacia de
la Universidad de San Carlos de Guatemala.
• Biblioteca de la Facultad de Ciencia QuÃ-micas y Farmacia de la Universidad de San Carlos de
Guatemala.
• LIPRONAT.
2.6.3 Materiales
2.6.3.1 Reactivos
• R1: Reactivo de Dragendorff (subnitrato de bismuto en ácido clorhÃ-drico concentrado y agua +
yoduro de potasio en agua).
• R2: Reactivo de Mayer (yoduro de mercurio y potasio).
• R3: Reactivo de Wagner (yodo + yoduro de potasio).
• R4: Reactivo de Productos naturales (difenil−boril−oxietilamina al 1% en metanol y luego
polietilenglicol 4000 al 5% en etanol).
• R5: Reactivo de AnisaldehÃ-do−ácido sulfúrico.
• Alcohol etÃ-lico al 70%.
• Tolueno.
• Acetato de etilo.
• Dietilamina.
• Ãcido fórmico.
• Ãcido acético glacial.
• Agua destilada.
• Cloroformo.
• Metanol.
• E1: Estándar de quinina al 1% en metanol.
• E2: Estándar de rutina al 0.05% en metanol.
• E3: Estándar de saponinas al 0.1% en metanol.
• E4: Estándar de diosgenina.
NOTA: Los reactivos utilizados corresponden a grado reactivo.
2.6.3.2 CristalerÃ-a y equipo
• CristalerÃ-a de uso común en el laboratorio (tubos de ensayo, varilla de agitación, espátula,
beackers de diferente volumen, embudo de vidrio, pipetas sexológicas de diferente volumen,
propipeta).
• Baño de marÃ-a.
• Capilares de vidrio sin heparina.
• Campana de extracción.
5
• Cámaras de saturación para el solvente (frascos de vidrio con tapadera de plástico o aluminio).
• Cromatoplacas de sÃ-lica gel 60 F−254.
• Lámpara de fluorescencia (254 y 365nm)
• Balanza analÃ-tica.
• Estufa.
• Horno de secado.
• Espectrofotómetro UV−VIS.
• Papel Film.
• Lápiz y regla.
2.6.4 Procedimiento
Se inició el estudio realizando un extracto alcohólico, partiendo de un concentrado de la planta
proporcionado por LIPRONAT; se pesaron O.5g y se combinaron con 10mL. A continuación se describen
por separado los procedimientos para cada metabolito en estudio:
2.6.4.1 Para Alcaloides
Se realizaron tres pruebas presuntivas para la detección de alcaloides, estás consistÃ-an en la
precipitación y/o coloración a través de la formación de productos de adición insolubles entre el
nitrógeno del alcaloide y el reactivo a emplear. Las pruebas son las siguientes:
• Prueba con el reactivo de Dragendorff (R1).
• Prueba con el reactivo de Mayer (R2).
• Prueba con el reactivo de Wagner (R3).
Se utilizaron 5mL del extracto alcohólico en tres diferentes tubos de ensayo, a cada uno de ellos se le agrego
8Gts de un solo reactivo; al tubo No.1 el R1, al tubo No. 2 el R2 y al tubo No. 3 el R3. Se utilizó un cuarto
tubo como control, el cual poseÃ-a 5mL de extracto alcohólico.
Asimismo, se realizó una cromatografÃ-a en capa fina, para determinar si el extracto poseÃ-a alcaloides y
en que proporción relativamente se encontraban. Para la misma se utilizó como fase estacionaria una
cromatoplaca de sÃ-lica gel 60 F−254; una fase móvil compuesta por Tolueno−acetato de etilo−dietilamina
(7:2:1); una solución alcohólica de quinina al 1% como estándar (E1) y como revelador el Reactivo de
Dragendorff (R1), el cual presenta a los alcaloides como manchas de color naranja sobre un fondo amarillo en
la región del visible.
Es importante mencionar, que al momento de finalizar todas estas pruebas, el resultado obtenido fue negativo;
a pesar de que la literatura indica la presencia de alcaloides en las Solanáceas (familia a la que pertenece
Solanum wendlandii), por lo que se procedió a la búsqueda de otro metabolito, los flavonoides.
2.6.4.2 Para Flavonoides
Se realizó una cromatografÃ-a de capa fina, ya que debido a su carácter fenólico muestra intensa
absorción en la región ultravioleta y visible del espectro, esto a la vez en relación con la presencia de
sistemas aromáticos conjugados.
Para la misma se utilizó el mismo tipo de fase estacionaria que la de alcaloides; como fase móvil se utilizó
Acetato de etilo−ácido fórmico−ácido acético glacial−agua (10:1.1:1.1:2.7); como estándar se
utilizó una solución alcohólica de rutina al 0.05% (E2) y como revelador el Reactivo de Productos
Naturales (R4), la fluorescencia provista por este reactivo depende de la estructura del flavonoide. Sin
embargo, antes de asperjar la cromatoplaca, todos los flavonoides fluorescen como zonas azules obscuras
6
sobre fondo amarillo bajo la luz UV−254nm. Y bajo la UV−365nm fluorescen de color amarrillo, azul o verde
dependiendo de la estructura.
Pero al igual que los alcaloides, dicha prueba resultó negativa, por lo que por último, se procedió a la
búsqueda de otro metabolito secundario (las saponinas).
2.6.4.3 Para Saponinas
Se realizó un ensayo presuntivo y simple, llamado el Test de espuma. Para él, se utilizaron tres tubos de
ensayo; al primero, se le agrego 5mL del extracto; al segundo, 2mL del estándar de saponinas al 0.1% en
metanol (E3); y al tercero, 5mL de agua destilada. A todos los tubos se les añadió 10mL de agua destilada
y se calentaron en baño de marÃ-a durante 30 minutos. Después de transcurrido este tiempo, se dejaron
enfriar, se taparon con papel Film y se agitaron vigorosamente durante 30 a 40 segundos. Por último, se
dejaron reposar en posición vertical durante otros 30 minutos. Transcurrido este tiempo se observa la
presencia o ausencia de espuma en la superficie del lÃ-quido; si está presente y la capa de espuma es mayor
de 3cm, se presume que la muestra contiene saponinas.
Asimismo, se realizó un cromatografÃ-a de capa fina, para la cual se utilizó: una cromatoplaca igual a la
utiliza en las dos pruebas anteriores de cromatografÃ-a; una fase móvil de Cloroformo−metanol−agua
(6.5:5:1); el estándar mencionado anteriormente y el reactivo de AnisaldehÃ-do−ácido sulfúrico (R5), el
cual presenta a las saponinas como manchas azules, violetas o amarillas.
Y por último se realizó, un método espectrofotométrico para la cuantificación de alcaloides, en el
cual se utilizó un estándar de diosgenina (E4). Se transfirió una alÃ-cuota de 4 ml del extracto a un beaker
de 50 ml y se evaporó hasta sequedad. Se enfrió a temperatura ambiente y se añadió: 2 ml de acetato de
etilo; 1 ml de reactivo A (0.5 ml de anisaldehÃ-do + 99.5 ml de acetato de etilo); y 1 ml de reactivo B (ácido
sulfúrico al 50% en acetato de etilo), luego se agitó y se calentó a 60ºC en baño marÃ-a durante 20
minutos, luego se dejo enfriando por 10 minutos y luego ya se procedió a leer a 430 nm, utilizando la curva
estándar de diosgenina. Para la curva de calibración: se prepara una solución madre de diosgenina, a una
concentración de 10 microgramos por mililitro de etanol de 95 grados. A partir de dicha solución se
preparan estándares de referencia, a concentraciones de 2,4 y 6 microgamos por mililitro. Como blanco se
utiliza la mezcla de 2 ml de acetato de etilo, 1 ml del reactivo A y 1 ml del reactivo B.
NOTA: Para la preparación de la cromatoplaca (10*5cm), se realiza una lÃ-nea a una distancia de 1.5cm del
borde inferior de la cromatoplaca, sobre la misma se puntean el extracto a estudiar y el estándar con el cual
será comparado, esto con la ayuda de capilares. A continuación, se sumerge la cromatoplaca dentro del
solvente, él cual se encuentra presente dentro de una cámara de saturación (la misma previamente
saturada), y se deja que corra hasta aproximadamente 1cm por debajo del borde superior de la cromatoplaca.
• RESULTADOS
Tabla No. 1 Pruebas Presuntivas para la detección de Alcaloides en Hojas de Quixtán (Solanum
wendlandii)
Reactivo
Wagner
Dragendorff
Mayer
Coloración
Verde
Verde
Verde
Precipitado
−−−−
−−−−
−−−−
Fuente: Datos Experimentales.
7
Tabla No. 2 Resultados de CromatografÃ-a en Capa Fina para la detección de Alcaloides en Hojas de
Quixtán (Solanum wendlandii)
Distancia Recorrida por
Muestra (cm)
Estándar Burcina 2.3
Estándar Ajmalina 3.3
Estándar Atropina 2.2
Estándar Quina
2.7
Muestra
0
Alcaloide
Rf (cm)
Color
0.32
0.46
0.30
0.38
0
Naranja
Naranja
Naranja
Naranja
−−−−−−−−−−
Fuente: Datos Experimentales.
Tabla No. 3 Resultados de CromatografÃ-a de Capa Fina para la detección de Flavonoides en Hojas de
Quixtán (Solanum wendlandii) bajo luz UV a 365 nm
Flavonoide
Estándar Rutina
Muestra
Distancia Recorrida por
Muestra (cm)
2.5
0
Rf (cm)
Color
0.36
0
Morado
−−−−−−−−
Fuente: Datos Experimentales.
Tabla No. 4 Prueba Presuntiva de el Test de Espuma para la detección de Saponinas en Hojas de Quixtán
(Solanum wendlandii)
Sustancia
Estándar de Saponinas
Agua destilada
Muestra
Cantidad de Espuma
3
0.1
0.4
Fuente: Datos Experimentales.
Tabla No. 5 Resultados de CromatografÃ-a en Capa Fina para la detección de Saponinas en Hojas de
Quixtán (Solanum wendlandii) luego de asperjar con Reactivo Revelador y Calentamiento de Cromatoplaca
Saponina
Estándar de
Saponina
Muestra
Muestra
Distancia Recorrida por
Muestra (cm)
Rf (cm)
Color
0
0
−−−−−−−
0
0
0
0
−−−−−−−−
−−−−−−−−−
Fuente: Datos Experimentales.
Tabla No. 6 Resultados de CromatografÃ-a en Capa Fina para la detección de Antioxidantes en Hojas de
Quixtán (Solanum wendlandii)
8
Antioxidantes
Estándar
Quercetina
Estándar Rutina
Muestra 1μL
Muestra 5μL
Muestra 10μL
Distancia Recorrida por
Muestra (cm)
Rf (cm)
Color
6.8
0.96
Decolora
3.4
0
0
0
0.48
0
0
0
Decolora
Violeta
Violeta
Violeta
Fuente: Datos Experimentales.
Tabla No. 7 Resultados de Curva de Calibración para la Cuantificación de Saponinas por medio de un
Método Espectrométrico en Hojas de Quixtán (Solanum wendlandii)
Estándar de Diosgenina
Concentración ( μg/ml)
2
4
6
Absorbancia
1.75180
2.13950
3.03270
Fuente: Datos Experimentales
Tabla No. 8 Resultado de Muestra para la Cuantificación de Saponinas por medio de un Método
Espectrométrico
Concentración (μg/ml)
0.02
Absorbancia
1.03400
Fuente: Datos Experimentales.
Gráfica No. 1 Curva de Calibración y Muestra para la Cuantificación de Saponinas por medio de un
Método Espectrométrico
Fuente: Datos Experimentales.
Cálculos
Rf = Distancia recorrida de muestra
Distancia recorrida de solvente
Rf (Estándar Burcina) = 2.3 cm = 0.32
7.2 cm
Tabla No. 9 Distancia Recorrida por cada solvente en cada CromatografÃ-a en Capa Fina
9
Sustancia
Alcaloides
Flavonoides
Saponinas
Antioxidantes
Distancias de Solventes
7.2 cm
6.9 cm
4.55cm
7.05cm
Fuente: Datos Experimentales.
Curva de Calibración
Y = mx + b
Pendiente = 0.320225
Intercepto = 1.0271
X=y−b
m
X (concentración de muestra) = 1.03400 − 1.0271 = 0.02 μg/ml.
0.320225
• DISCUSIÓN DE RESULTADOS
El objetivo de esta investigación es la detección cualitativa y cuantitativa de alcaloides en hojas de
Quixtán (Solanum wendlandii), la cual es una planta comestible en Guatemala, para realizar el extracto del
mismo se necesitó de la ayuda de una Institución de la Facultad de Ciencias QuÃ-micas y Farmacia,
LIPRONAT, la cual proveyó el concentrado de Quixtán, el cual también esta en una investigación, pero
esta muestra no era fresca por lo tanto no se logró obtener ningún metabolito, ya que con el tiempo estos se
van perdiendo.
Primero se evaluó la detección de alcaloides en el extracto de Quixtán (Solanum wendlandii), ya que es
caracterÃ-stico de esta familia la producción de alcaloides en abundancia, pero al realizar la `prueba
presuntiva con los diferentes reactivos para la detección de alcaloides (Ver Tabla No. 1), no se observó
ningún cambio de color ni tampoco un precipitado, además al realizar la cromatografÃ-a en capa fina se
utilizó como fase móvil Tolueno−Acetato de Etilo−Dietilamina, esta es apolar la cual es afÃ-n para la
detección de alcaloides, cada uno de los estándares sÃ- era afÃ-n al solvente, cada uno de los cuales se
obtuvo su Rf (Ver Tabla No. 2) pero para la muestra no recorrió ninguna distancia con el solvente, lo cual
indica que la muestra al realizar las dos pruebas descritas anteriormente, la muestra no posee alcaloides.
Segundo, se evaluó si la muestra posee otro tipo de metabolito que era flavonoides, ya que como no se
obtuvo con éxito la detección de alcaloides se probó si el extracto contenÃ-a flavonoides, pero al realizar
la CromatografÃ-a en Capa Fina se utilizó la fase móvil correspondiente para la separación de
flavonoides, (Ver Tabla No. 3), se observó que el estándar de Rutina sÃ- se obtuvo un Rf = 0.36 y la
coloración morada (que es caracterÃ-stico de flavonoides), mientras que el de la muestra es igual a cero, lo
10
cual indica que el extracto no posee flavonoides.
Tercero, se evaluó si el extracto contenÃ-a saponinas, ya que este tipo de género es caracterÃ-stico de
poseer saponinas, se realizó la prueba presuntiva con el Test de espuma (Ver Tabla No. 4), en el cual la
espuma obtenida de la muestra no es la misma que la obtenida por el estándar de saponinas y con la
comprobación de la CromatografÃ-a en Capa Fina (Ver Tabla No. 5) la cual no se observó ni el estándar
ni la muestra después de asperjar con el reactivo especÃ-fico, este se puede deber a que el estándar no se
aplicó lo suficiente y por esta razón tampoco se observó. Por lo tanto, se puede determinar que el extracto
no tiene saponinas, después de haber realizado estas dos pruebas. También se realizó la cuantificación
de Saponinas por medio de un método Espectrofotométrico, el cual al observar la absorbancia de la
muestra, al obtener la concentración de la misma por medio de la ecuación de la recta (Ver cálculos), es
de 0.02 μg/ml (Ver Gráfica No. 1), lo cual indica que absorbió alguna otra sustancia que contenÃ-a el
extracto, porque al compararla con la curva de calibración del estándar de saponina (Ver Tabla No. 7), no
concuerda con las absorbancias del estándar (Ver Tabla No. 8), por lo tanto tampoco se logró cuantificar
saponinas en el extracto de Quixtán.
Cuarto, se evaluó si el extracto tiene actividad antioxidante, donde se realizó por medio de una
CromatografÃ-a de Capa Fina, en diferentes diluciones de la muestra, con los estándares de Rutina y
Quercetina, los cuales si mostraron decoloración al aplicar el reactivo revelador, dando como positivo el
resultado, pero en cada una de las aplicaciones de la muestra no hay ninguna decoloración, lo cual indica que
tampoco tiene actividad antioxidante porque fue negativo el resultado (Ver Tabla No. 6).
• CONCLUSIONES
2.9.1 En el extracto de Quixtán no se extrajo alcaloides, según caracterÃ-stica de esta familia.
2.9.2 La muestra de Quixtán el resultado es negativo para saponinas.
2.9.3 En el extracto de Quixtán no se extrajo flavonoides.
2.9.4 La evaluación de actividad antioxidante para el extracto de Quixtán con resultado negativo.
2.9.5 La cuantificación de saponinas es de 0.2 μg/ml en el espectrómetro pero este resultado no es de
saponinas, ya que el resultado de absorbancia no es afÃ-n a los datos de la curva de calibración.
2.9.6 La prueba presuntiva para alcaloides es negativa para el extracto de Quixtán.
2.9.7 La prueba presuntiva para saponinas, por medio del Test de espuma, es negativo para el extracto de
Quixtán.
• RECOMENDACIONES
2.10.1 Utilizar un extracto fresco, de la planta recolectada; ya que la estadÃ-a por largo tiempo del mismo
puede perjudicar la obtención de resultados.
2.10.2 Profundizar en el estudio del Quixtán (Solanum wendlandii) como fuente de metabolitos secundarios,
para emplearla en un futuro en la medicina tradicional de nuestro paÃ-s.
• BIBLIOGRAFÃA
2.11.1 CAMPOS, J. Contenido de macronutrientes, minerales y carotenos en plantas comestibles autóctonas
de Guatemala. Disponible en: <http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_2203.pdf> Fecha de consulta:
11
02/11/2008. Fecha de actualización: no disponible. TESIS, Guatemala: USAC, 2003.
2.11.2 CRUZ, S. Presentación de Alcaloides. Departamento de Farmacognosia y FitoquÃ-mica. Facultad de
Ciencias QuÃ-micas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala. 2008.
2.11.3 Wikipedia, la enciclopedia libre. Solanaceae. Disponible en: <http://es.wikipedia.org/wiki/Atropaceae>
Fecha de consulta: 02/11/2008. Fecha de actualización: 27/10/2008.
2.11.4. Autor: no disponible. Solanaceae. Disponible en:
<http://www.dipbot.unict.it/sistematica_es/Sola_fam.html> Fecha de consulta: 02/11/2008. Fecha de
actualización: no disponible.
2.11.5. Wikipedia, la enciclopedia libre. Solanum. Disponible en:
<http://es.wikipedia.org/wiki/Solanum> Fecha de consulta: 02/11/2008. Fecha de actualización:
28/10/2008.
2.11.6. Infojardin. Solano. Disponible en:
<http://fichas.infojardin.com/trepadoras/solanum−wendlandii−solano.htm> Fecha de consulta. 02/11/2008.
Fecha de actualización: no disponible.
2.11.7. Arboretum, Universidad Francisco MarroquÃ-n (UFM). Solanum wendlandii. Disponible en:
<http://www.arboretum.ufm.edu/plantas/catalogo.asp?id=275&ltr=s&campo=NombreCientifico> Fecha de
consulta: 02/11/008. Fecha de actualización: no disponible.
2.11.8. ZELADA, E. Biodisponibilidad de carotenos en plantas autóctonas de Guatemala. TESIS,
Guatemala: USAC, 1988.
2.11.9. Autor: no disponible. Relevamiento fitoquÃ-mico de especies vegetales utilizadas en la medicina
popular. Disponible en:
<http://mail.fq.edu.uy/~planta/pdf/FarmacognosiaPE80/RELEVAMIENTOFITOQUIMICO.pdf> Fecha de
consulta: 02/11/2008. Fecha de actualización: 2001.
• ANEXOS
2.12.1. Anexo 1: CromatografÃ-a en capa fina para identificación de alcaloides
Fuente: datos experimentales
2.12.2. Anexo 2: Identificación de alcaloides en tubos de ensayo con reactivos presipitadores
Fuente: datos experimentales
2.12.3. Anexo 3: CromatografÃ-a en capa fina para identificación de cumarinas
Fuente: datos experimentales
2.12.4. Anexo 4: CromatografÃ-a en capa fina para identificación de saponinas
Fuente: datos experimentales
2.12.5. Anexo 5: Prueba de espuma para identificar saponinas
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Fuente: datos experimentales
2.12.10 MetodologÃ-a para Actividad Antioxidante
Se tomó del extracto de la planta mencionado en la sección de metodologÃ-a, y se aplicó en la
cromatoplaca de sÃ-lica gel 60 F−254 en forma de tres bandas de aplicación creciente (1µL, 5µL y
10µL); además se aplicó el estándar para la comparación (Rutina, Quercetina). Se colocó la
cromatoplaca en un cámara de vidrio saturada (frasco de vidrio) previamente saturada con Acetato de
etilo−Ãcido acético−Ãcido fórmico−Agua (10:1.1:1.1:2.6). Se secó y asperjo con DPPH (1mg/mL en
Etanol). El resultado se considera positivo si se observa la decoloración del DPPH en las bandas respectivas.
Estos fitoquÃ-micos se mencionan a pesar de no ser estudiados en la presente investigación, ya que han sido
los metabolitos de mayor interés en las investigaciones realizadas hasta el momento.
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