Las ADN polimerasas añaden dNTPs complementarios al molde de

¿Cuál de estas 3 posibilidades de replicación es la
que ocurre?
Marcaje del DNA
bacteriano con N15
Experimento de
Meselson-Stahl
(1958)
1. Bacteria crecida en
N14
2. Bacteria crecida en
N15
3. Incubación en
presencia de N14
4. Centrifugación de
generaciones
sucesivas
CONCLUSIÓN: La Replicación es semi-conservativa
Reacción básica de la replicación de ADN
ADN polimerasa
(ADN)n+1 + PPi
ADNn + dNTP
Mg2+
dNTP



ADNn
molde
PPi
(ADN)n+1



• Las ADN polimerasas añaden
dNTPs complementarios al molde de
la cadena madre
• Se necesita un 3’OH libre para que
las ADN polimerasas actúen
• Las ADN polimerasas requieren
Mg2+ como cofactor
Se produce un ataque nucleofílico del
3’OH al fosfato  del dNTP entrante
La síntesis de ADN ocurre en sentido 5’
3’
Acorde a la estructura del ADN y la
función de las ADN polimerasas:
• Cada cadena de ADN original sirve de molde
para una cadena nueva
• Los precursores son desoxiribonucleósidos 5’
TRI-fosfato (dNTPs: dATP, dTTP, dGTP, dCTP)
• Las cadenas de ADN originales se separan y
se sintetiza la complementaria de cada una de
manera simultánea
•Se requiere la función de otras enzimas
además de la ADN polimerasa durante la
replicación
ADN polimerasas
ADN polimerasas de bacterias
Exonucleasa
Pulgar
Palma
Actividad de polimerasa
5’ 3’
Actividad de
exonucleasa 3’ 5’
La fidelidad de la ADN polimerasa III
es de 109
Origen de Replicación bacteriano OriC
En bacteria hay un solo origen de replicación
Secuencias repetidas en
tandem (13 pb)
Cajas DnaA (9 pb)
1.
Activación por metilación de A en GATC
2.
Unión de DnaA “abre el DNA”
3.
Unión de DnaB y DnaC- actividad helicasa
ATP dependiente
4.
Unión de SSB para mantener separadas las
cadenas de DNA
DNA B (helicasa)
Rompe los
puentes de
hidrógeno
entre las
bases
La HELICASA es un hexámero que une
a la cadena guía del ADN
Proteínas de unión a cadena sencilla
(SSB) mantienen las hebras separadas
La unión de SSB es cooperativa y ayuda a la
polimerasa facilitando su actividad
Se producen cebadores de ARN para generar el
3’OH libre que la ADN polimerasa requiere
DNA primasa
RNA polimerasa que
sintetiza los
cebadores de RNA
¿ En qué sentido se replica el cromosoma bacteriano ?
La REPLICACIÓN es BIDIRECCIONAL
molde
3’
5’
molde
molde
5’
3’
molde
Hay DOS Horquillas de replicación en sentido opuesto
Esquema de una horquilla de replicación
Hebra “guía”
contínua
discontínua
Fragmentos
de Okazaki
Hebra
“retrasada”
El crecimiento de ambas cadenas es en sentido 5’
3’
En una horquilla de replicación, la DNA pol
III es la que replica las dos hebras al
mismo tiempo.
La replicación de la hebra retrasada se
interrumpe cada 1000 nt aproximadamente
Subunidades de la ADN polimerasa III de E. coli
Sub
# por
holoenzima
Mr
Función

2
132,000
Actividad polimerasa

2
27,000
Exonucleasa 3’5’

2
10,000
Se requiere para la union de
DnaB

2
71,000

1
52,000

1
35,000
’
1
33,000

1
15,000

1
12,000

4
37,000
Unión estable al molde,
dimerización del núcleo
Complejo que carga las
subunidades  al DNA
Pinzas que forman una rueda
(abrazadera) sobre el DNA
y aseguran óptima
procesividad
Núcleo de
la
polimerasa
Modelo del
dímero
La DNA pol III es
altamente procesiva
gracias a las
subunidades  que
forman una abrazadera
complejo 
proteínas 
Función en la horquilla de replicación
Video
Describe la función de cada una de las diferentes
subunidades de la DNA pol III bacteriana
Considerando la siguiente secuencia como parte de un cromosoma
en proceso de replicación:
5’.....ATTCGTACGATCGACTGACTGACAGTC.....3’
3’.....TAAGCATGCTAGCTGACTGACTGTCAG.....5’
Si la polimerasa se encuentra replicando de derecha a izquierda
¿Cuál es la hebra guía y cuál la retrasada?
Dibuja la horquilla de replicación (esquema) cuando la
polimerasa se encuentra a mitad de la secuencia e indica las
cadenas continua y discontinua, cebadores de RNA y enzimas
participantes.