microbiologia / udimas guia de classes pràctiques

MICROBIOLOGIA / UDIMAS
CURS 2008-2009
GUIA DE CLASSES PRÀCTIQUES
PRACTIQUES DE MICROBIOLOGIA: PRIMER SEMESTRE
BACTERIOLOGIA PRIMER CICLE
Primer dia:
-
Conceptes teòrics
Classificació bacteriana
-
Tinció de Gram (fonaments)
-
Medis de cultius:
• líquids
• sòlids
• pobres u ordinaris
• enriquits
• selectius
• diferencials
• de enriquiment
-
Concepte de “flora normal” o microbiota normal
•
•
Pell
Mucoses
PRÀCTIQUES:
1) OBSERVACIÓ DE CULTIUS DE BACTERIS
-
Observació de colònies crescudes en medis de cultius
Realització de pesatges y aïllaments
2) REALITZACIÓ DE TINCIÓ DE GRAM
-
Realització d’extensions en portaobjectes
Tinció de Gram
3) ESTUDI DE LA FLORA (MICROBIOTA) NORMAL
-
Presa de mostres de pell, exsudats òtics, de faringe i asals.
4) PROJECCIÓ DE DIAPOSITIVES .
1
Segon dia
Conceptes teòrics
Mètodes de diagnóstic microbiològic:
-
Directe
-
Indirecte
Cultius quantitatius
Concepte de cultiu pur
Identificació microbiana preliminar
-
Obsevació de bacils Gram negatius y cocs gram positius aerobis.
Metabolisme oxidatiu i fermentatiu
PRÀCTIQUES
1) OBSERVACIÓ DELS CULTIUS REALITZATS.
-
Dels subcultius
-
Dels exsudats obtinguts el dia anterior
2) REALITZACIÓ DEL GRAM DEL BACTERIS CRESCUTS EN LES PLAQUES
-
Interpretació dels microorganismes estudiats
3) REALITZACIÓ DE CULTIUS QUANTITATIUS
-
Amb suspensions de bacteris
4) IDENTIFICACIÓ PRELIMINAR
-
Probes de: catalasa, oxidasa i plasmocoagulasa
5) DEMOSTRACIÓ: identificació de bacils Gram negatius
6) DEMOSTRACIÓ DE LA TÈCNICA DE L’ANTIBIOGRAMA
Tècnica utilitzada: DIFUSIÓ EN AGAR AMB DISCOS D’ATIBIÒTICS
7) OBSERVACIÓ DE PREPARACIONS MICROSCÒPIQUES DE DIFERENTS
BACTÈRIES
2
Tercer día
TINCIÓN UTILITZADA PELS MICOBACTERIS:
-
Fonaments de la tinció de Ziehl-Neelsen y Kinyoun
IDENTIFICACIÓ BIOQUÍMICA DE BACTERIS
-
Galeria bioquímica par bacils Gram negatius
-
Proba de la coagulasa I caldo hipertónic par a cocs Gram positius
PRACTIQUES
1) LECTURA DELS CULTIUS QUANTITATIUS
2) IDENTIFICACIÓ DELS BACTERIS
3) LECTURA DELS ANTIBIOGRAMES
4) REALITZACIÓ DE LA TÈCNICA DE KINYOUN
-S’utilizen extensión de micobacteris que s’han fixat prèviament
5) OBSERVACIÓ MICROSCÒPICA DE LES TINCIONS FETES AMB LA
TÈCNICA DE KINYOUN
3
MICROBIOLOGIA
Informació i material complementari
ESQUEMA DE TINCIÓ DE GRAM
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Comproveu que l’extensió estigui ben seca i fixada.
Cobrir-ho amb la sol·lució cristall violeta durant 1 minut.
Rentar-ho amb aigua.
Cobrir-ho amb la sol·lució iode-iodurada de Lugol durant 1 minut.
Rentar-ho amb aigua.
Decolorar-ho amb alcohol-acetona.
Rentar-ho amb aigua.
Cobrir-ho amb la sol·lució de safranina durant 1minut.
Rentar-ho amb aigua i assecar-ho en posició inclinada.
ESQUEMA DE TINCIÓ ÀCID-RESISTENT DE KINYOUN
(Modificació de la tinció de Zielh-Neelsen, indicada per micobacteris i per alguns
protozous.)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Fixar la preparació.
Cobrir la preparació amb fucsina de Kinyou, deixant-ho actuar durant 5 minuts.
Rentar-ho amb aigua.
Decolorar amb la sol·lució àcid-alcohol.
Rentar-ho amb aigua.
Repetir la decoloració tantes vegades com sigui necessari fins que
desaparegui l’excés de fucsina fins que el porta quedi decolorat del tot.
7. Rentar-ho amb aigua.
8. Cobrir-ho amb blau de metilè i deixar-ho actuar durant 1 minut.
9. Rentar-ho amb aigua destil·lada i deixar-ho assecar en posició inclinada.
4
CLASIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS DE
IMPORTANCIA EN CLÍNICA.
• BACTERIAS GRAM POSITIVAS:
1. COCOS: Estafilococos:
Staphylococcus aureus ( estafilo dorado )
Staphylococcus epidermidis(coagulasa neg)
Estreptococos:
Streptococcus pneumoniae ( neumococo )
Streptococcus viridans (α hemolitico )
Streptococcus pyogenes ( β hemolitico grupo A)
Streptococcus agalactiae ( β hemolitico grupo B)
Enterococcus faecalis (Enterococo grupo D)
2. BACILOS GRAM POSITIVOS:
Corinebacteriàceas:
Corynebacterium diphtheriae ( difteria)
Listeria monocytogenes ( listeriosis)
Baciláceas:
Bacillus anthracis ( carbunco)
2 BACTERIAS GRAM NEGATIVAS:
1. COCOS: Neisserias:
Neisseria meningitidis ( meningococo )
Neisseria gonorrhoeae ( gonococo)
2. BACILOS:
Enterobacterias:
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Enterobacter- Serratia
Proteus mirabilis
Shigella ( shigelosis)
Salmonella ( salmonelosis)
Yersinia enterocolitica
Pseudomonádaceas:
Pseudomonas aeruginosa (bacilo piociánico)
Vibrionaceas:
Vibrio cholerae ( cólera)
5
Haemophilus : H. influenzae
Bordetella pertussis ( tos ferina)
BACTERIAS ANAEROBIAS ( CRECEN EN AUSENCIA DE OXIGENO)
1. COCOS: GRAM POSITIVOS
Peptostreptococcus (abscesos)
GRAM NEGATIVOS
Veillonella (heridas de mordedura)
2. BACILOS GRAM NEGATIVOS
Bacteroides fragilis ( abscesos, sepsis)
Fusobacterium sp
Prevotella sp( colonias negras)
3. BACILOS GRAM POSITIVOS ESPORULADOS:
Clostridium perfringens ( gangrena gaseosa)
Clostridium tetani ( tétanos)
Clostridium botulinum ( botulismo)
Clostridium difficile ( colitis pseudomembranosa)
PARED CELULAR BACTERIANA:
Función: confiere la estructura de la bacteria, la protege de la presión
osmótica y es una barrera para agentes químicos y biológicos
Pared Gram Positivos:
-
polisacáridos ( Ags específicos de grupo)
peptidoglucano ( estructura bacteriana)
ac. teicoicos ( polímeros de glicerol fosfato ribitol fosfato)
membrana celular.( fosfolipidos y proteinas)
Pared Gram Negativos:
- membrana externa ( exclusiva de los Gram Neg formada por un
-
lipopolisacarido que es una endotoxina , fosfolípidos y porinas)
peptidoglucano ( capa delgada, estructura de la bacteria)
membrana celular ( fosfolípidos y proteinas ).
6