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UREA
USO DEL PRODUCTO
Para la determinación de Urea en plasma, suero u orina.
Método de Berthelot
El aumento grosero de la coloración de los blancos indica contaminación con amoníaco. Si esto ocurrió con las soluciones de
trabajo, se deben desechar.
FUNDAMENTO DEL METODO
La enzima ureasa transforma la urea en dióxido de carbono e
ión amonio. En presencia de este último y por acción del hipoclorito de sodio en medio alcalino, se produce la oxidación
del fenol con formación de indofenol (reacción de Berthelot) de
intenso color azul, cuya intensidad medida fotométricamente es
proporcional a la concentración de amoníaco y por lo tanto a la
de urea presente en la muestra.
DETERMINACION DE UREA EN SANGRE
Muestra: Suero o plasma anticoagulado con heparina, oxalato,
citrato o EDTA. No usar anticoagulantes que contengan
fluoruro.
La urea es estable en el suero a temperatura ambiente por un
mínimo de 24 horas. En refrigerador puede llegara a 10 días.
REACTIVOS
Ureasa suspensión: Suspensión de ureasa en buffer fosfato.
Actividad > 10 U/mI. Listo para usar.
Reactivo Fenol: Fenol sólido recristalizado y pentacianonitrosilferrato disódico sólido (PNFS).
Concentración final luego de preparado:
Fenol ...........................................................................500 mM
PNFS ............................................................................0,6 mM
Reactivo Hipoclorito: Solución concentrada de hipoclorito sódico e hidróxido de sodio.
Concentración final luego de preparado:
Hipoclorito de Sodio ......................................................30 mM
Hidróxido de Sodio ......................................................0,62 mM
Estándar: Solución de urea 0,60 g/l.
REACTIVOS Y MATERIAL AUXILIAR NO PROVISTOS
- Baño María de 37ºC
- Timmer
- Pipetas y micropipetas
- Tubos y Cubetas de Vidrio
- Fotómetro o Espectrofotómetro
Conservacion y estabilidad de los reactivos
Reactivo Fenol y Reactivo Hipoclorito se pueden conservar a
temperatura ambiente, en lugar fresco y al abrigo de la luz.
La estabilidad alcanza la fecha de vencimiento indicada en
la caja.
Ureasa suspensión se conserva en refrigerador.
Estable 24 meses.
Precauciones y advertencias sobre el uso de los reactivos
Los Reactivos provistos como las soluciones de trabajo son cáusticos. Evitar contacto con piel y mucosas. El Reactivo Fenol es
tóxico. Para uso diagnóstico IN VITRO.
Preparacion de los reactivos
Reactivo Hipoclorito de trabajo: Se prepara diluyendo con
agua destilada el Reactivo Hipoclorito como se indica en cada
envase.
Reactivo Fenol de trabajo: Se prepara disolviendo el Reactivo
Fenol con agua destilada como se indica en cada envase.
Conservacion y estabilidad de los reactivos de trabajo
Una vez preparados los Reactivos de trabajo deben conservarse
en refrigerador. La estabilidad alcanza un período minimo de
por lo menos seis meses.
Indicios de inestabilidad o deterioro de los reactivos de trabajo
Usar pipetas individuales para los Reactivos de trabajo, así se
evita el deterioro de las soluciones.
DETERMINACION DE UREA EN ORINA
Muestra: Usar sobrenadantes de orinas centrifugadas. La urea
en orina es estable varios días si se conserva la muestra en refrigerador dependiendo del grado de contaminación.
Las muestras de pacientes deben manipularse considerándolas
potencialmente infectivas, al igual que el material descartable y
los utilizados en el ensayo, que hayan estado en contacto con
las mismas.
Un procedimiento aconsejado para descartarlos es el siguiente:
autoclavado a 121ºC durante una hora y el tratamiento de los
líquidos residuales con hipoclorito de sodio durante una hora a
una concentración final del 5%.
Sustancias interferentes
Muestras con moderada hemólisis no interfiere.
No se observa interferencia para valores de bilirrubina
hasta 20 mg/dl.
ENSAYO I:
Determinación de Urea en suero o plasma.
Procedimiento: En tres tubos rotulados, colocar: (NOTA 1)
Agua destilada
B
E
D
2 gotas
2 gotas
2 gotas
Muestra
-
-
20 µl
Estándar
-
20 µl
-
1 gota
1 gota
1 gota
Ureasa suspensión
Mezcle. Incube 5 minutos entre 37º y 40 ºC.
Rvo. Fenol
1 ml
1 ml
1 ml
Rvo. Hipoclorito
1 ml
1 ml
1 ml
Agitar suavemente. Incubar 5 minutos a 37- 40 ºC
Agua destilada
10 ml
10 ml
10 ml
Mezclar por inversión. Dejar estabilizar el color 10 minutos. Leer en
fotocolorímetro a 510-550 nm o en espectrofotómetro a 540 nm
llevando a cero con el blanco de reactivos. El color es estable 2 horas.
ENSAYO II:
Determinación de Urea en orina.
Procedimiento: Procesar diluciones 1/10. Si los valores obtenidos escapan al rango de linealidad, continuar con diluciones
mayores.
En cuatro tubos marcados: BR (blanco de reactivos), BO (blanco
de orina), E (estándar) y O (desconocido), colocar:
BO
BR
E
D
2 gotas
2 gotas
2 gotas
2 gotas
Orina diluida
-
-
-
20 µl
Estándar
-
-
20 µl
1 gota
1 gota
1 gota
Agua destilada
Ureasa suspensión
1 gota
Rvo. Fenol
1 ml
1 ml
1 ml
Rvo. Hipoclorito
1 ml
1 ml
1 ml
NOTAS
1. Los volúmenes de muestras y reactivos a utilizar pueden disminuir o aumentar, siempre que se mantengan las proporciones
establecidas en el procedimiento.
10 ml
PRESENTACION
Código 682050: 500 determinaciones.
Mezcle. Incube 5 minutos entre 37º y 40 ºC.
Agitar suavemente. Incubar 5 minutos a 37- 40 ºC
Agua destilada
10 ml
10 ml
Proseguir como en el ENSAYO I
BIBLlOGRAFIA
1. BERTHELOT, M., Repert. Chim.Appl. 282 (1859)
2. HENRY, RJ; Clin. Chem. Principies and Technics New Cork,
Harper & Row (1968).
3. ANDERSEN, C. Scand J. Clin. Lab.lnvest. 11.122 (1959).
CALCULOS
Determinación de Urea en suero o plasma:
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Para adultos, con edad promedio correspondida entre 30-35
años y dietas balanceadas se acepta:
Urea (suero o plasma): 0,20-0,40 g/l
Urea (eliminación en orina): 20-3 g/24 hs.
Absorbancia D
Urea g/l = ----------------------x 0,60
Absorbancia E
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Garantía de Calidad del Producto
Determinación de Urea en orina:
(Abs. D - Abs. BO)
Urea g/l = ----------------------- x 0,60 x dilución
Abs. E
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Se recomienda procesar juntamente con las muestras, sueros
control normal y anormal para controlar la perfomance del ensayo. Se aconseja el uso de Qualiset Sueros Control Nivel 1 y 2
GT Lab (Códigos 602105-602205)
Cada Laboratorio debe diseñar su propio sistema de Control de
Calidad Interno y establecer las medidas correctivas si se superan los limites de tolerancia aceptables.
SISTEMA ANALITICO
1. Ley de Beer: La reacción colorimétrica sigue la ley de Beer
hasta 1,5 g/l. Para valores superiores diluir la muestra en proporción adecuada con solución fisiológica, o la solución final con
blanco de reactivos.
Multiplicar el resultado obtenido por la dilución efectuada.
2. Sensibílidad: Usando fotocolorímetro la sensibilidad es de
aproximadamente 0,03 g/l.
3. Precisión:
Intraensayo
Nivel Medio
Rango
D.S
C.V.%
0,36/ g/l
0,33-0.42 g/l
±0,016 g/l
4,4
1,02 g/l
0,95-1,06 g/l
±0,035 g/l
3,4
Nivel Medio
Rango
D.S
C.V.%
0,99 g/l
0,90-1,09 g/l
±0,045 g/l
5,6
Interensayo
GT Laboratorio elabora y comercializa productos para análisis uno IN VITRO siguiendo normas GMP, ISO 9001:2008 e ISO 13485: 2003. Los términos y condiciones de
calidad son absolutos dentro de la competencia de responsabilidad, que corresponda
a GT Laboratorio.
Cualquier alteración en los productos elaborados por GT Lab serán reconocidos sin
cargo de ningún tipo para el usuario. Todo reclamo de calidad deberá efectuarse por
escrito debidamente firmado y sellado por el profesional responsable, con el detalle
del desperfecto, acompañando el producto en cuestión para su exanimación técnica
por el Departamento de Control de Calidad de Gt Lab. Los reclamos deberán ser enviados a través del Distribuidor que efectuó la venta. Las reposiciones y/o respuestas
técnicas serán cursadas de forma fehaciente al Profesional usuario
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Necochea 3274 (S2001QXL) Rosario – Santa Fe – Argentina
Tel / Fax: +54 (341) 481-1002 y rot.
e-mail: [email protected]
USO PROFESIONAL EXCLUSIVO.
Autorizado por A.N.M.A.T. Disp Nº425
Elaborado por GT Laboratorio S.R.L.
Establecimiento Inscripto y Habilitado por ANMAT
Industria y Tecnología Argentina
Dir. Tec: Daniel Gazzola. Bioquímico
Elaborado por: GT Laboratorio s.r.l
Industria y Tecnología Argentina
Código y Fecha de Revisión: 68290000/13