Otros métodos.

> NT-32 rev. 2 ENAC
Tipo III: Métodos basados en métodos de referencia.
Métodos descritos en procedimientos internos
del laboratorio, que están basados claramente en métodos
de referencia y que no suponen una
modificación técnica.
Tipo IV: Otros métodos. Son aquellos métodos
desarrollados por el propio laboratorio o por cualquier
otra parte que no disponen del reconocimiento de los
métodos de referencia o de los métodos alternativos.
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> Norma UNE EN ISO 17025:2005 y NT-32 ENAC
“En
cualquier de los casos anteriores, y suponiendo que el
método alternativo está validado de forma correcta (esté o no
certificado) el laboratorio siempre debe:
“confirmar
que
puede
aplicar
correctamente
los
métodos antes de utilizarlos para los ensayos”
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Esquema de Validación y Comprobación
de Métodos Alternativos
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MÉTODO ALTERNATIVO
> Árbol de decisión
NO
¿VALIDADO?
VALIDAR (ISO 16140)
SI
CERTIFICADO
¿CERTIFICADO?
CUALITATIVO
•Nivel detección Relativa
•Exclusividad/Inclusividad
•Eficacia, sensibilidad y especificidad
•Desviación negativa y positiva
NO
SI
VALIDACIÓN
¿Es completa
la validación?
CUANTITATIVO
Límite detección y cuantificación.
-Linealidad y precisión.
-Sensibilidad
NO
SI
COMPROBAR EL FUNCIONAMIENTO
CUALITATIVO
•Nivel detección Relativa
CUANTITATIVO
•Recuperación
•Precisión
Registros y evaluación del
funcionamiento
•Matrices
•Analistas
•Equipos
•Reactivos
Criterios Control de
Calidad Interno
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TAREA DEL
LABORATORIO
DE ANÁLISIS
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Validación de Métodos Alternativos Acorde a
ISO 16140:2003
(Laboratorio Experto + Intercomparativo)
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El protocolo utilizado para validar los métodos alternativos se
encuentra en la Norma UNE-EN ISO 16140:2003 que contempla:
•Términos y Definiciones
•Principios generales
•Validación de métodos cualitativos
•Validación de métodos cuantitativos
•Anexos (muestras, Diseño de experiencias, tratamiento
estadístico, estudios colaborativos)
Además, existen otros protocolos desarrollados para métodos
microbiológicos de aguas que pueden servir de referencia como ISO/TR
13843:2000 y UNE-EN ISO 17994:2004)
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Definiciones
Validación: Confirmación mediante el examen y la aportación de
evidencias objetivas que demuestren el cumplimiento de ciertos
requisitos para el uso específico previsto (ISO 17025 apdo.
5.4.5.1)
Desviación positiva: Se produce cuando el método a validar da
un resultado positivo y el valor de referencia es negativo. Una
desviación positiva se convierte en una falso positivo cuando se
puede demostrar que el resultado verdadero es negativo.
Desviación negativa: Se produce cuando el método a validar da
un resultado negativo y el valor de referencia es positivo. Una
desviación positiva se convierte en una falso negativo cuando se
puede demostrar que el resultado verdadero es positivo.
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> Desviaciones positivas y negativas
•MÉTODO A
•MÉTODO B
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Definiciones
Sensibilidad relativa: Capacidad del método a validar de
detectar el microorganismo cuando está presente en la muestra a
analizar o no diferir de manera significativa del valor de
referencia.
Especificidad relativa: Capacidad del método a validar para no
detectar el analito cuando no es detectado por el método de
referencia.
Eficacia relativa: Grado de concordancia entre la respuesta
obtenida por el método a validar y el valor verdadero obtenido en
muestras idénticas.
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Definiciones
Nivel de detección: Menor número de microorganismos que
puede detectarse en una muestra.
Inclusividad: Capacidad para detectar el analito entre un amplio
grupo de cepas diana.
Exclusividad: Ausencia de interferencia en el método de un
grupo de cepas no diana.
Linealidad: Aptitud del método para dar resultados que están en
proporción con la cantidad de microorganismos presentes en la
muestra
Exactitud relativa: Grado de concordancia entre un resultado de
análisis y el valor de referencia aceptado.
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Definiciones
Sesgo: Diferencia entre el resultado esperado del análisis y un
valor de referencia aceptado.
Limite
de
cuantificación:
La
menor
cantidad
de
microorganismos que puede ser medido con una precisión y
exactitud definidas
Repetibilidad: Realización de los ensayos en las mismas
condiciones (mismo analista, equipos, medios de cultivo…)
Reproducibilidad: Realización de los ensayos en las condiciones
más
diversas
(distinto
analista,
equipos,
dias,
medios
de
cultivo…)
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Definiciones
Ejemplos de precisión y exactitud.
Valores estadísticos de dispersión (desviación estándar y
coeficiente de variación)
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Definiciones
Distribución de población:
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Definiciones
Incertidumbre: Parámetro, asociado al resultado de medida,
que caracteriza la dispersión de los valores que pueden ser
atribuibles de forma razonable a los valores al recuento obtenido.
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Alcance de la validación ISO 16140
Métodos presencia/ausencia
•Especificidad
•Sensibilidad
•Eficacia
•Desviación positiva y negativa
•Limite de detección
•Inclusividad y exclusividad
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Métodos cuantitativos
•Precisión
•Exactitud
•Linealidad
•Desviación positiva y negativa
•Limite de cuantificación
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Puesta a punto del método
•Personal
Planificación
•Matrices
VALIDACIÓN
•Cepas de referencia
•Reproducibilidad
Ejecución
•Contaminación cruzada
Evaluación de resultados
•Estadística
•Obtención de parámetros.
•Resultados
Informe de validación
•Registros primarios
•Fechas de ejecución
•Personal implicado
Control de calidad
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Validación por comparación de métodos
Se requiere disponer de un método de referencia con el que comparar el método a validar
X g de alimento + 9x ml. De
diluyente
Homogenización
Primera etapa de cultivo
Inoculación (si procede)
División
Duplicado 1
Duplicado 2
DUPLICACIÓN DE MUESTRAS CUANDO AMBOS MÉTODOS TIENEN UNA PRIMERA ETAPA COMÚN
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Validación por comparación de métodos
Productos sólidos
X g de alimento + x ml. De
diluyente
X ml. Productos líquidos
Inoculación (si procede)
Homogenización
División
Método de referencia
Método alternativo
2x g de homogeneizado (x ml. para
productos líquidos) + 18x ml. De
diluyente (9x ml diluyente en prod.
Líquidos)
2x g de homogeneizado (x ml. para
productos líquidos) + 18x ml. De
diluyente (9x ml diluyente en prod.
Líquidos)
DUPLICACIÓN DE MUESTRAS CUANDO AMBOS MÉTODOS TIENEN DIFERENTES ETAPAS
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Matrices a emplear
Carnes y producto cárnicos
Pescados y mariscos
Aves de corral
Frutas y verduras
Productos lácteos
Chocolate/productos panadería
Otros productos (especias, salsas,
huevos, pastas, cereales, bebidas)
Alimentación animal
El anexo B de la ISO 16140 incluye recomendación de matrices vs
microorganismos
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Inoculación
1º.-MUESTRAS NATURALMENTE CONTAMINADAS
2º.-CONTAMINACIÓN POR MEZCLA
3º.-MUESTRAS CONTAMINADAS ARTIFICIALMENTE
4º.-MATERIALES DE REFERENCIA
Tipo de muestras a emplear para la validación
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