1290 Infinity

Posibilidades de la Instrumentación Actual
en UHPLC.
Regina Orenga
[email protected]
1220 Infinity
1260 Infinity 1290 Infinity
APORTACIONES CLAVE DE LA UHPLC
•
Reducir Tiempos de Análisis SIN reducir Resolución/Capacidad de
Separación de picos.
Reducir X 10/20 (1260/1290) veces con respecto a 5µm
•
Aumentar la Resolución/Capacidad de Separación de picos SIN
incrementar tiempo de Análisis.
• 1290/1260/1220: La importancia con gradientes de concentración de
Trabajar a FLUJOS ELEVADOS para ganar RESOLUCIÓN.
Doblar flujo en gradientes  DOBLAR LA CAPACIDAD DE
SEPARACIÓN DE PICOS
• 1290/1260/1220 FLEXIBILIDAD: trabajar como UHPLC o HPLC’s
incluso con columnas 4.6mm d.i. a flujos elevados
• 1290/1260/1220 Facilidad de transferencia de métodos de HPLC
(/UHPLC) de equipos antiguos.
Page 2
¿Qué UHPLC Agilent se Adapta Mejor a Sus
Necesidades/ Presupuesto?
• La selección del cromatógrafo depende del
diámetro y longitud de las columnas de UHPLC
que se quieran utilizar.
1220 Infinity
1260 Infinity
-
Modelo
UHPLC
1290 Infinity
Pres.
Máx
bars
“Máxima” Longitud
Columna UHPLC cm
1.8µm (TP)**
Rango d.i.
“Delay
Columna mm
Volume”
Bomba
µL
mL/min
Poroshell-120
1220 binario
1260 cuaternario
600
10 (15) cm
15 (20)
3-4.6 (16)
600-900
10
1260 binario
600
10 (15) cm
15 (20)
2.1-4.6 (8)
120 /600-800
5
1290 cuaternario
1200
25 (30) cm
35 (40)
2.1-4.6 (16)
<350
10
1290 binario
1200
25 (30) cm
35 (40)
2.1-4.6 (8)
10 / 45
5
Coste
+
2.7µm (SP)**
Flujo
máx.
Página: 3
The Agilent 1200 Infinity Series HPLC
1200 Infinity
Series
1260
Infinity
1220
Infinity
1290
Infinity
PrepScale LC
Low-flow
Analytical flow
Prep-flow
LowFlow LC
Isocratic,
manual
Cap.LC
Binary
Nano-LC
Gradient,
manual
Binary
Binary-SFC
Chip-LC
Gradient,
automated
Quaternary
Quaternary
Bio-Inert
Isocratic
Page 4
Isocratic
Binary
Quaternary
Agilent 1200 Infinity Series HPLC
Raising the Standard in HPLC – UHPLC for EVERY Lab
1220
Infinity LC
1260
Infinity LC
1290
Infinity LC
Integracromatográfique
s ted
600 bar, 5ml/min
80 Hz
Most affordable
HPLC and UHPLC
1260/1290 Technology
Modular
600 bar, 5ml/min
80 Hz
Modular
1200 bar, 5ml/min
160 Hz
2x or 10x UV Sensitivity
100% HPLC Compatible
HPLC Price – UHPLC Capability
1st Universal LC by ISET
Highest Performance
HPLC Service Costs
Page 5
The Agilent 1200 Infinity Series
- Power range
 All analytical columns
pressure
 Method Transfer
1200
 Higher Resolution
 Faster Analysis
1000
 More viscous solvents
1290 Infinity LC
800
 Lower temperatures
 Semi-prep
600
400
1260 Infinity Binary LC
1260 Infinity Quat./Iso LC
1220 Infinity LC
200
0
0
Page 6
2
4
6
8
10
flow
1260 Infinity Bio-inert HPLC
Infinitely Better for Bio-molecule Analysis
100% Bio-inert
• Metal-free sample flow path (instrument and column)
• Stainless steel–free solvent flow path
• Widest pH range (1-13, short-term 14)
600bar power range
• From lowest pressure up to highest pressure STM
columns
Semi prep 10ml/min
When is this instrument recommended??
Page 7
1260 Infinity Bio-inert HPLC
What´s new compared to our standard
1260 Infinity Quaternary LC
 Pump titanium based, no corrosion
Active Seal included.
Autosampler metal-free
 Capillaries and connections metal-free
 Detector Flow Cell metal-free
pH-range 1-13, shortterm pH 14
600 bar (UHPLC) high
resolution Bioseparations
Advantatges:
•Wide pH range
• High salt tolerance
• Lowest surface activity
 Bio-Inertness, no passivation
needed
8
Target Applications
Biologic Characterization
Reverse Phase:
Separation of Intact Biologics/Variants
Size Exclusion: Aggregate Analysis
9
Ion Exchange: Separation of Isoforms
Peptide Mapping:
Post-translational modifications
Agilent 1290
Infinity LC
El UHPLC
infinitamente
mejor para
cubrir todas
sus
necesidades en
LC y LC/MS
1290 Infinity: ¿Qué aporta al mundo del UHPLC?
1290 Infinity NO solo es un equipo capaz de
proporcionar unos rangos mayores de Flujo y de
Presión…
1290 Infinity es un equipo INNOVADOR
1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus
módulos, que una vez más, marca la diferencia
tecnológica.
Tecnología Bombas 1290 Infinity UHPLC
- Máxima Potencia y Robustez
Bombas UHPLC 1290 Infinity
Robustez y alta capacidad de disipación de calor
Nuevo material del pistón: SSiC*
(Carburo de silicio sintético).
Proporciona Mejor Conductividad térmica y menor
fricción para menor desgaste.
Permite una optima disipación de calor
• Mayor presión x flujo (1200bar at 2 ml/min)
• Alarga el tiempo de vida de los sellos/ intervalos de
mantenimiento (>150L)
• Un solo sello para fase normal y reversa
SSiC*: Material cerámico de alta
dureza formado por Carburo de Silicio sintético.
Volumen Embolada variable (patentado) 
menor desgaste y mejores prestaciones.
Capilares Multi-Capa para un óptimo
intercambio de calor entre los
cabezales de las bombas.
1290 Infinity Bomba Binaria: nuevo diseño
La siguiente generación en Tecnología de Bombas UHPLC
µ-Desgasificador
Válvula de selección
de 4 disolventes
Gradientes binarios
4 Motores de alta
precisión:
independientes
para cada pistón
Mezclador
“Jet Weaver“
 Alta velocidad y resolución

1200 bar @ 2.0 mL/min

1000bar @ 3.5ml/min

800 bar @ 5.0 mL/min

Volumen muerto: 10 µl / 45 µl
 Amortiguador electrónico de pulsos
Bombas
de alta
resolución
Canal
Pistones de
Carburo de Silicio A
Intercambiador
de calor
multicapa
Canal
B
Válvula de
Purga
automática

Procesador de doble núcleo
dedicado al control de pulsos

Motores de 300 picolitros
por paso (0.0003µL)
 Largos intervalos de mantenimiento

Corrección Automática Fugas

> 150 Litros de disolvente
 Automatismo

Purga automática
1290 Infinity LC – Delay Volume and Mixing Noise
- How to achieve lowest delay volume, lowest noise and highest RT precision?
1200 Series
Solvent A
1200 Series
Solvent B
Passive Damper
180-580 µl
Passive Mixer
400 µl
Very Good Noise
~ 800 µl
1290 Inifinity
Solvent A
1290 Inifinity
Solvent B
5 µl / 40µl DV:
Active Damping
< 5µl
+
Microfluidic Mixing
35µl
 80x / 20x lower
=
Lowest Noise
 < 50%
Page 15
1290 Infinity Binary Pump
Amortiguación electrónica de pulsos
Motor del Pistón
• Motores independientes
OF
O
F
N
HPLC
1200
para cada pistón-> minimas
oscilaciones en la linea de base
• Pasos de 300 picolitros
1290
Inifinity
1290
Chanel
UHPLC
1290
Inifinity
A
Chanel
B
Page 16
Agilent Jet Weaver: Nuevo sistema de mezclado
Mezclador de alta eficacia.
PLACA ACERO INOXIDABLE CON MICROCANALES DE 35µl de volumen
La mas alta eficiencia de mezcla con el mínimo
volumen para un bajo nivel de ruido
• V=35 µl, para aplicaciones UV estándar.
Tecnología:
• Tecnología Propietaria de Microfluidos Multi-capa.
• Bandas de difusión de acero con estructuras de
(100x120µm)
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La Historia de la Bomba Cuaternaria 1290
Infinity es una Historia sobre EXACTITUD!!
Los 3 Puntos Cruciales para conseguir las máximas prestaciones en una
bomba cuaternaria con mezclado a baja presión:
1. Conocer y tener muy bien caracterizados los eluyentes utilizados.
La Historia de la Bomba Cuaternaria 1290
Infinity es una Historia sobre EXACTITUD!!
Los 3 Puntos Cruciales para conseguir las máximas prestaciones en una bomba
cuaternaria con mezclado a baja presión:
1. Conocer y tener muy bien caracterizados los eluyentes utilizados.
2. Disponer de una bomba inteligente – Amortiguación Activa – con una
bomba de alta resolución (~300 pL por paso del motor)
3. Nuevo mezclador InletWeaver basado en la super-eficiente tecnología Jet
Weaver:
Premezcla el eluyente
antes de entrar en el
cabezal de bombeo
Mezclador opcional
situado después del
cabezal de bombeo
(sólo para condiciones
muy críticas- p.e. TFA)
La Bomba Cuaternaria 1290 Infinity ofrece la mayor exactitud y precisión en
todo tipo de aplicaciones.
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity
Herramientas que proporcionan sus elevadas Prestaciones
1. 4-channel
Degasser
2. MCGV (MultiChannelGradient-Valve)
7
8
3. Inlet-Weaver
9
4. Pump Head
5. Multi-PurposeValve
6. In-line Filter
7. Switchable Jet
Weaver Mixer
8.
Bomba peristáltica
lavado pistones
9.
Sensor presión
10. Sensor de fugas
disolvente
1
5
4
2
6
3
4
10
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad
Purga Automática
(controlada por software)
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad
Filtrado eluyentes en línea para proteger columna
en aplicaciones con volumen de retardo estándar
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad
Lavado Automático del filtro en
contracorriente (backflush)
Válvula Multifunción para la Mayor Comodidad
y Flexibilidad.
Mezclado Extra para el mínimo rizado/ruido de la línea de base
en las aplicaciones más exigentes (TFA como modificador)
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity: BlendAssist
(Asistente de Mezclas)
Heramienta de software para la dilución en línea de tampones y
modificadores:
• Mejora la reproducibilidad de los tiempos de retención (inter-día).
• Facilita la programación del gradiente con diferentes concentraciones a
partir de soluciones stock.
Water
Water
1% TFA
Ejemplo 2 Métodos con distinto % modificador:
1. 5 to 95% gradiente de ACN con 0.1% TFA en Agua y
0.08% TFA en ACN.
2. 20 – 80% gradiente de ACN con 0.5% TFA en Agua y
0.4% TFA en ACN.
Sin BlendAssist: se deben preparar manualmente los 4
eluyentes requeridos o programar complejos gradientes
(%A, B, C, D).
ACN
ACN
29-11 m
1% TFA
Con BlendAssist:
1. Definir el factor de dilución de las soluciones stock.
2. Programar un sencillo gradiente binario
orgánico/acuoso!!
1290 Infinity Cuaternario: Asistente Preparación
Mezclas “On-line: BlendAssist*”
Heramienta de software para la dilución en línea de tampones y modificadores:
Mejora la reproducibilidad y Facilita la programación del gradiente.
Programar un sencillo
gradiente binario
BlendAssist calculará
el factor de dilución
necesario,
* BlendAssist standard incluido en bombas 1290 Cuartenarias. Opcional “BlendAssist Pro“ con funciones adicionales
Bomba Cuaternaria 1290 Infinity
Conclusiones
 Más Amplio Rango de Potencia: hasta 1200 bars (a 2mL/min) y hasta
10ml/min de flujo máximo.
 La Mejor Precisión y Exactitud de Composición del mercado,
independiente del disolvente y en todo el rango de composiciones, flujos
y presiones.
 Todo tipo de aplicaciones con prestaciones tipo bombas binarias con
mezclado a alta presión.
 Blend Assist dilución en línea de soluciones stock de modificadores/
tampones
 ISET-ready! (emulación de otras bombas)
 Menor precio que la bomba binaria 1290 Infinity.
 La máxima Flexibilidad!
 Costes de operación y mantenimiento similares a bombas de HPLC.
1290 Infinity Compartimento Columnas Termost.
- Mejora en Facilidad de uso y Versatilidad:
New valve drive and valve head
New prolonged HX-carrier
with 3rd hand (not shown)
Nueva guía Capilares
New leak funnel
New door-open sensor
modified lowdisp HX
Nuevo Aislamiento
Térmico:
fácil cierre del
compartimento
RFID-tag, stores
type, pressure
range, valve
switches
Nuevas válvulas ALta Presión: 2PS/6PT, 2PT/10PT and 9PT/8PS. Rápido intercambio de
distintas válvulas
1290 Infinity UHPLC: Infinitas Soluciones !!!
- Automatización Flexible
Desarrollo de métodos y Multi-Métodos
• Hasta 3 compartimentos de Columna
para un máximo de 8 Columnas, 26
Solventes y 6 zonas de temperatura.
• MD: ChromSword and AutoChrom
• Multi-Métodos: ChemStation, EZAccess
Regeneración Automática de Columna
• 2000 muestras/día con inyecciones
superpuestas y offline data analysis
Preparación de muestra “Online“
• Enriquecimiento
• …….
29
Soluciones 1290 Infinity LC
- 2000 muestras/día usando ACR (Reg. Aut. de Columna)
• Análisis y Regeneración de columna
simultáneos con válvula de 2
posiciones / 10 puertos
• Tiempos de ciclo más cortos y mayor
capacidad de análisis de muestras para
laboratorios de HT y desarrollo de
métodos
• Respuestas más rápidas en los
controles de calidad durante la fase de
producción o de liberación de producto
acabado
1290 Infinity Diode-Array Detector
Mejora Sensibilidad x10 “versus” Detectores 1200-VWD/DAD
- Comparación celdas “Max-Light High Sensitivity vs 1200-VWD“
La Solución: Fibra no recubierta (sílice fundida)
V
 r4  F  L
 
24  Dm
2
Mayor Sensibilidad: hasta x10 veces.
Celda “Max-Light
Sin aumento de la dispersión del pico
High Sensitivity“ (60 mm x σ Vol.: 4 µL)
S/N: 2944
1200-VWD
S/N: 253
V2
Muestra: Antraceno, 835 pg/µL
Col.:: 4.6x150mm ZORBAX SB C18, 5 µm
Fase móvil: Agua/Acetonitrilo = 20/80
Flujo: 1.5ml/min
Detección 251nm, PW >0.1min,
Volumen inyección : 5µl
Temp. columna: 40°C
(10 mm x σ Vol.: 14 µL)
Technical Note: 5990-5326EN
1290 Infinity Diode Array Detector
- How the optics work
Mirror
Grating
Programmable
slit
Deuterium lamp
Max-Light cartridge cell
1024 element
diode-array
Max-Light Cartridge Cell
- Optofluidic waveguides
Non-coated fiber (fused silica)
High Light Transmission due to Total-Internal Reflection (TIR) principle
(~ 100 % Light efficiency)
Optofluidic Waveguides
•
Long path length
•
Small cell volume
•
High light transmission
Benefits:
 Highest Sensitivity (S/N) with small cell volumes (dispersion effects)
 More reliable and robust peak integration (automated) due to
nearly no Refractive Index and thermal effects (solvent temperature)
Cartridge design for ease of use
Page 33
Highest S/N
Rango Dinámico x30 con HDR-DAD
Combina 2 DAD‘s con celdas Max-Light de 3.7 mm y 60 mm
Detector Signal
[AU/cm]
Computing the signals from
60 mm path-length for the low concentration
3.7 mm path-length for the high concentration
3.7 mm path-length
60 mm path-length
10 x higher
sensitivity
30x lower Limit of Detection
(LOD)
Conc
~3x higher upper [µg/mL]
limit