estudio de reologèa sanguènea en sujetos normales y pacientes

ESTUDIO DE REOLOGÍA SANGUÍNEA EN
SUJETOS NORMALES Y PACIENTES CON
ERITROCITOSIS EXCESIVA
PROYECTO ALFA – EUROPEAN COMMISSION
Autor: Bernardo Torrico Arzady, M.Sc.
Asesores: Ginés Viscor Carrasco, Ph.D.
Hilde Spielvogel, M.D.
Universidad Mayor de San Andrés
Universitat de Barcelona
OBJETIVO PRINCIPAL
Dilucidar, a través de estudios de
hemorreología, el posible papel de la viscosidad
sanguínea en el síndrome de Eritrocitosis
Excesiva.
JUSTIFICACIÓN
El posible papel de la viscosidad sanguínea en el
síndrome de Eritrocitosis Excesiva no está bien
establecido; y muchos pacientes que asisten al IBBA
presentan un cuadro clínico de EE., algunos de ellos con
hematocritos muy altos, por encima de 70%. Estos
datos demuestran la necesidad de desarrollar estudios
de hemorreología en poblaciones expuestas que viven a
grandes alturas como ocurre en la ciudad de La Paz y el
Alto de Bolivia.
HIDRODINÁMICA Y VISCOSIDAD
DE LA SANGRE
La sangre es un fluido
no newtoniano formado
por plasma y varios
componentes celulares:
glóbulos rojos y
blancos, plaquetas, etc.
Su fluidez depende
mucho de los glóbulos
rojos; de su propiedad
para agregarse
formando rodillos y su
gran capacidad para
deformarse.
Paso de glóbulos rojos, a través de microporos en
una membrana de policarbonato
Definición de viscosidad
Es el cociente entre tensión tangencial (T)
y gradiente de velocidad (γ)
T = F/A
F
F
A
X
dX
η = T/γ
µ
γ = dµ/dx
Viscosidad sanguínea
Viscosidad aparente sangre y plasma
du
F
u
A
τ = F/A
γ = du/dx
dx
η=τ/γ
γ
u
Perfil de velocidades
Perfil del gradiente
de velocidad
Viscosímetro rotatorio cono-placa
Análisis de la
viscosidad a un
gradiente de
velocidad
definido para
toda la muestra
Viscosidad relativa
ηrel = ηsangre / ηplasma
Aportación reológica de
la fracción celular
VISCOSÍMETRO ROTATORIO
CONO- PLACA
Análisis de la viscosidad a un
gradiente de velocidad definido
para toda la muestra.
MATERIAL Y MÉTODOS
EQUIPO: Viscosímetro Brookfield LV II.
POBLACIÓN DE ESTUDIO:
– Población control: sujetos sanos que viven en la
altura (estudiantes de la UMSA).
– Población de estudio: Pacientes con eritrocitosis
excesiva (pacientes que asisten al IBBA).
– Se ha determinado un tamaño de muestra de 30 para
cada grupo.
ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS
MUESTRAS DE SANGRE
CONTROL
CMS
WBC, G. blancos x uL de sangre
RBC, Hematíes x uL de sangre
HGB, conc. Hb, g-dL
HCT, microhematocrito, %
MCV, volumen corpuscular medio,
FL
MCH, Hemoglobina corpuscular
media, pg
MCHC, Concentración de Hb
corpuscular media, g-dL
PLT, Plaquetas x uL
(sujetos sanos)
EE
SANGRE
6-8 ml
CENTRIFUGACIÓN
3 ml.
HEMATOLOGÍA
WBC, RBC, HGB, HCT,
MCV, MCH, MCHC, PLT
Recuento de
Reticulocitos.
REOLOGÍA
VISCOSIDAD
0,5 mL
ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS
MUESTRAS DE SANGRE
CENTRIFUGACIÓN
Paquete de hematíes
Plasma
VISCOSIDAD
0,5 mL
Proteínas Tot.
Fibrinógeno.
Suspensión de
Hematíes normales
en plasma
Hcto = 45%
VISCOSIDAD
NP
Suspensión de
Hematíes normales
en solución de
Ringer-albúmina.
Hcto = 45%
VISCOSIDAD
NA
Suspensión de
Hematíes fijados
con glutaraldehido
Hcto = 45%
V
VISCOSIDAD
I
DA
LA VISCOSIDAD DE LA SANGRE
Viscosidad
(mPa·s)
1000
NP
100
DA
agregación
deformación
orientación
10
NA
1
0,01
0,1
1
10
100
1000
Gradiente de velocidad (s-1)
Recuento de Reticulocitos
Azul brillante de cresilo
Estructura del Eritrocito
Diagrama del citoesqueleto y proteínas
integrales del plasmalema eritrocítico.
Se determinará el diámetro de los GR de
los sujetos normales y de los pacientes
con eritrocitosis excesiva mediante
micrometria.
Datos de referencia:
El 70 % de pacientes con Hcto ≥ a 48 %, pero ninguno
de ellos llegó a 70%.
Se estandarizaron todas las técnicas para la
determinación de la viscosidad sanguínea.
Se están realizando pruebas de hematología.
Se deben estandarizar pruebas complementarias como
la determinación de proteínas totales (Lowry),
cuantificación de fibrinógeno y globulinas (electroforesis
de proteínas).
Se dispone del material para determinar el diámetro de
los eritrocitos.
El estudio será concluido en el mes de septiembre del
presente año.
Perspectivas de colaboración entre
Europa y América Latina …
Conclusión del proyecto: “Estudio de reología sanguínea en sujetos
normales y pacientes con eritrocitosis excesiva” UMSA – UB.
Publicación de artículos del trabajo realizado.
Presentación y defensa del trabajo en la Maestría en “Bioquímica
Clínica y Gerencia de Servicios en Laboratorio” UMSA.
Determinar la evolución de los cambios de la viscosidad sanguínea
en el desarrollo de la patología.
Ensayar la eficacia de distintas estrategias terapéuticas.
“Determinación de la viscosidad sanguínea en ratas crónicamente
hipoxicas” (IBBA, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y
Bioquímicas (UMSA) y Universidad de Barcelona.
“Estudio de reología sanguínea en sujetos que viven a diferentes
alturas”. UMSA – Univ. Cayetano Heredia, Lima – Perú, UB.
Tesis Doctoral en Educación Superior : “La innovación Docente
desarrollando procesos de aplicación de nuevas tecnologías y Elearning y didáctica universitaria en la carrera de Bioquímica de la
UMSA”, bajo la tutoría del Dr. Ginés Viscor (UB).
MUCHAS GRACIAS …