Ensayo para el pesquisaje neonatal de la hiperplasia suprarenal

UMELISA 17OH
Progesterona Neonatal
Ensayo para el pesquisaje
neonatal de la hiperplasia
suprarrenal congénita.
Autores:
González E., Marrero N., Pérez P., Frómeta A., Zulueta
O., Martínez L., Herrera D., Castells E., Baloy A., Lugo E.
Centro de Inmunoensayo
2002
Regulación de la síntesis
de esteroides
Hipófisis
ACTH
Glánd. Suprarrenales
Angiotensina
Renina
Riñón
Aldosterona
Cortisol
Biosíntesis de los
esteroides
Hiperplasia Suprarrenal Congénita (HSC)
¾ Forma más común de ambigüedad sexual.
¾ Deficiencia en producción de cortisol y aldosterona.
¾ Superproducción de andrógenos.
¾ Se presenta al nacer y afecta el desarrollo sexual.
¾ Deficiencia de 21 hidroxilasa: 90-95 % de casos.
¾ Incidencia: 10 000-15 000.
Clasificación de la HSC
¾ Forma Clásica (80 % de los casos)
• Perdedores de sales
• Virilizantes simples
¾ Forma no clásica o de presentación tardía
Presentación clínica de la HSC
¾ Diferentes grados de virilización de genitales
externos en hembras.
¾ Crecimiento acelerado y retardo de la pubertad
en ambos sexos.
¾Temprana fusión de los epífisis (baja estatura).
¾ Pérdida de sales y riesgo para la vida (Forma
clásica).
¾ Hirsutismo e infertilidad (Hembras, forma de
presentación tardía).
Presentación clínica de la HSC
¾ Hiperpigmentación de los genitales.
¾ Pérdida del apetito.
¾ Letargo y pérdida de peso.
¾ Vómitos y diarreas.
¾ Riesgo incrementado a desarrollar hipoglicemia.
Importancia del pesquisaje neonatal de
la Hiperplasia Suprarrenal Congénita
¾ Enfermedad potencialmente fatal.
¾El examen físico no siempre resulta efectivo.
¾ Reducción marcada del tiempo de diagnóstico.
¾ Reducción de la morbilidad y mortalidad.
¾ Incidencia relativamente alta de la enfermedad.
¾ Mejoría significativa con un tratamiento temprano.
¾ Existencia de un método simple para el diagnóstico.
UMELISA 17OH Progesterona Neonatal
Placa de reacción
Placa de elución
E
10 µl
E
Discos de 3 mm
E
Lavado (6 ciclos)
40 uL conjugado
17OHP/F.A
E
E
AcP anti-17OHP
2h a 20-25°C
E
10 µl de Sustrato
4-metilumbeliferilfosfato
30 minutos a 20-25°C
Lectura, Validación e
interpretación de los
resultados de las muestras
con SUMA®
Precisión del ensayo
CV
CV
Intraensayo Interensayo
Muestra
nmol/L
1
22,4
7,2
9,0
2
50,0
6,9
8,3
3
90,4
4,9
5,6
Exactitud del ensayo
Conc Esperada
(umol/L)
Conc. Obtenida
(umol/L)
% Recobrado
25
25,8
96,9
50
52
96
100
98,5
101,5
nmol/L
120
Ensayo de Paralelismo
100
M1
M2
80
M3
60
M4
40
20
0
Dil 1:1
Dil 1:2
Dil 1:4
Dil 1:8
Curva de calibración
UMELISA 17OHP Neonatal
100,0
F/Fo (%)
80,0
60,0
40,0
20,0
0,0
0
50
100
150
200
Concentración 17OHP (nmol/L)
250
Limite de detección del ensayo
La concentración mínima detectable es de 2.5
nmol/L. Se definió como la concentración
calculada para la fluorescencia equivalente al
calibrador de concentración igual 0 más 2
desviaciones estándar.
Estudio de Correlación
50 muestras de neonatos (concentraciones de
17OHP entre 3 y 60 nmol/L) fueron evaluadas
empleando el UMELISA 17OHP Neonatal y el
estuche comercial de ICN Pharmaceuticals,
obteniéndose un coeficiente de correlación de
0.98.
Especificidad del ensayo
Compuestos
RC (%)
Progesterona
5,5
17OH Pregnenolona
0,6
Sustancias de Reichstein
0,7
5-pregnenolona
< 0,1
5-Pregnenolona-sulfato
< 0,1
Dehidroisoandrosterona-3-sulfato
< 0,1
Cortisona
< 0,1
Dehidroisoandrosterona
< 0,1
Estrona
< 0,1
Corticosterona
< 0,1
β-estradiol
< 0,1
Estriol
< 0,1
Distribución de frecuencias
350
Frecuencia
300
N= 2077
250
X= 12.4 ± 5.5 nmol/L
200
150
100
50
0
5
15
35
55
75
95
Concentración 17OHP (nmol/L)
115
Consideraciones en el pesquisaje de
la hiperplasia suprarrenal congénita
¾ Realizar una adecuada toma de muestra.
¾ El pesquisaje antes de las 2 semanas de edad.
¾ Emplear valores de corte según edad y peso al
nacer.
¾ Discriminar entre los diferentes tipos de HSC.
¾ El porcentaje de rellamado para una segunda
muestra oscila entre 0.02 y 0.2 % según el
programa de pesquisaje.
Caso diagnosticado empleando
el UMELISA 17OHP Neonatal
Diagnosticada en el año 2002
Falo hipertrófico que mide 4.5 cm en erección..
Rebordes labioescrotales rugosos.
Se realiza cariotipo: 46XX.
Concentración de 17OHP: Superior a 260 nmol/L.