Evaluación de la reproducción y sobrevivencia de bacterias del

Agronomia Costarricense 10 (1/2): 33-41. 1986.
EV ALUACION DE LA REPRODUCCIONY SOBREVIVENCIA DE
BACTERIAS DEL GENERO Rhizobium EN SUELO DE TURBA DE LA ZONA DE
MEDIO QUESO, LOS CHILES, COSTA RICA 1/*.
Eugenia Leon **
OscarAcuna **
Carlos Ramirez **
ABSTRACT
Reproduction and survival of bacteria of the genus Rhizobium in peat
from the area of Medio Que~, Los Chiles, Costa Rica. A preliminary study was
undertaken to explore the possibility of utilizing the peat (Typic Troposaprist)
of a large deposit near Medio Queso, province of Alajuela, Costa Rica as a
bacterial carrier. In this study, Rhizobium japonicum strain 587 was used. As a
control peat utilized by the producer firm of inoculants, The Nitragin Co.
Milwaukee, USA, was used. This study was carried out for 17 weeks; inoculants
were stored at 4, 24 and 37 C. The two peats were inoculated with a broth
culture of Rhizobium japonicum so that the resulting initial population in the
inoculated peat was 6.5 x 108 bacteria/g. The bacterial population in both peats
incubated at 37 C behaved similarly; no multiplication was detected in the peats
and after 6 weeks of inoculation, plate counts were below the minimal standard of
1,0 X 108 bacteria/g of peat. The bacterial population continued to decline
sharply so that by the 17th week of incubation the surviving population was only
0.0003% of the initial number of bacteria. Thus, exposure of inocultants to
ambient conditions in the low plains of Costa Rica could be detrimental to the
bacteria. In the peats incubated at 4 C and 24 C, conversely, the bacterial
population after two weeks at 24 C and after 4 weeks at 4 C increasedin the Costa
Ricapeatfrom 6.5 x 108 bacteria/g
to 2.4x 109/gand27x 108/g,respectively.
Under identical conditions, the bacteria in the Nitragin peat increased to
1.2 x 109/g and to 9.0 X 108/g, respectively. These figures characterized the
inocultants as adequate for a non-sterile peat carrier. The survivability was
equally acceptable after 8 weeks of incubation; viable counts were over
I.Oxl09 /g. After 17 weeks of incubation, plate counts were above the minimal
standard of 1.0 x 108/g of peat with the exception of Nitragin peat
incubated at 4 C. In planta most probable counts after 17 weeks of incubation
suggested a better survival of bacteria at 4 C than at 24 C. These observations
were the preliminary results of a second study in which different strains of
Rhizobium and Costa Rican sterile and non-sterile peat was utilized. In sterile
peat all strains showed viable counts higher than 1.0 x 109 bacteria/g of peat
after 4 months of incubation. In non-sterile peat)counts were lower althought
equally satisfactory except for two strains. The scientific evidence supports the
view that peat from this Costa Rican deposit is quite adequate as a bacterial
carrier for the production of inoculants not only for legumes but also for other
type of bacterial inoculants such as antagonists to plant pathogens, according to
preliminary results.
1/
*
**
Recibido para publicacion cl7 de diciembrc dc 1985.
Financiado par cl Proyecto de Ciencia y Tccnologfa CDNICIT{AID y parcialmente par la FAD.
Centro de Investigaciones Agronomicas. Univcrsidad de Costa Rica.
34
AGRONOMIA COSTARRICENSE
INTRODUCCION
Dado que en CostaRicaexistenvariosdepositos de turba, el presenteestudio tuvo por objetiV? princ~palevaluarla multi~lica~i6ny sobrevivenc.1ade,d!versascepas~e Rhizobium en estematenal, faC1lme?!ea~ces1blepara su .muestreo,d~l
enormedeposItosrtuadoen la 10Cal1dad
de Med10
Queso,Los Chiles,CostaRica. Ademasseevaluoel
efecto de tres temperaturasde almacenarniento,
comunesde obtener bajo condicionesnormalesde
manejo de inoculantesen CostaRica, sobrela sobrevivenciade lasbacterias.
Estainformacionprelirninareranecesariapara establecerlasposibilidadesde una mayor utilizacion de inoculantespara leguminosasen CostaRica.
La aplicaci6n al suelode fertilizantes nitrogenadoses una practica agricola valida paraaumentarla productividadde los cultivos,puestoque
en la mayoria de los sueloscultivadosdel mundo
esteelementoes limitante (Bums y Hardy, 1975).
En casitodos los paisessubdesarrollados
estecostoso insumo agricola se importa y su uso se circunscribea unospocoscultivos. Por razonessocioeconomicassu utilizaci6n es poca en cultivos de
subsistencia10 cual contribuye a que estospaises
no seanautosuficientesentre otras cosas,en la producci6n de granospara el consumohumanoy animal. Una alternativaviable para aurnentarla produccion y reducirla importacion de fertilizanteses
la pr.omoci~n,del cultivo d,e}egurninos~s,
.capa~es
MATERIALES Y METODOS
de fijar el rutrogenoatmosfencoen asoc1ac16n
Slmbiotica con bacteriasdel generoRhizobium (Har- 0 .
d 1
de h" b'
dy, 1980; Ramirez, 1983). La biomasade legurningen e ascepas R IZO ,urn
nosapuedeserexplotadadirectamente(granos,foE
.
" d 1t b .
til .
N 587 d Rh . b " .
.
.
.
rraje,
madera,
.
lena,
pulpa)
0
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(CR508
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manejocomo la rotac16nde culuvos0 culuvo aso. d (G '
Z
d t
1976
H
II
Vall .
C1a 0
omez
y
an s fa,
,
enze
y
lS,
1979;Yoshida,1976).
El mejoramientode la simbiosis,sobretodo
.
una
por
'"
mediantela inoculacion de sernillascon cepasseleccionadaspor su adaptabilidadyalta capacidad
de fijar nitrogeno, es una estrategiaadecuadapara
aumentarla producci6n de biomasaaprovechable
de legurninosas(Roughley, 1970; National Academy of Sciences,1979).
Parala utilizacion de la inoculacion esnecesarlo disponerde un material que sirvade acarreador de las bacterias.El suel0de turba ha sido uno
de los materialesusadoscon mas exito en la producci6n de inocultantesporque, adernasde no ser
toxico paraRhizobium, perrnite1areproducciony
prolongasu sobrevivencia,
aumentandoasi la viabilidad del producto, no solo en la turba mismasino
tambi~nen las semillas,10 cual es crucial paraobteller una buena respuestaa la inoculaciOn(Burton, 1981; Roughleyy Vincent, 1967;Thompson,
1980). Otras ventajasde este material es su bajo
costo y su facil aplicaciony adherenciaalas semilIas.
Las condicionesde alrnacenamientode un
inoculante,porotro lado, deterrninansu vida util.
Asi un inoculantede alta calidadsepuededeteriofar rapidamentepor la muerte de las bacteriassi se
expone,por ejemplo, alas altastemperaturas(Wilsony Trang,1980).
proce
segunda
t
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cepas
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ras1.
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1
E
"
n
1
a
smonlffila,
irocedencla y hospederose detallanen el Cuadro
.
Condicionesde crecimiento
Las bacteriasse crecieronen agar,extracto
de levaduramanitol, AELM (Vincent, 1970). Para
la preparacionde inoculantesse inocula el mismo
medio liquido (50 rnl) y se incubo por 5 dias a
temperaturaambiente(21 C:!:3) en erlenmeyersde
250 mllos cualesse airearonbajo agitacionen un
agitador orbital (EberbachCorporation, Ann Arbor, Michigan)ajustadoa 180 rpm.
.,
.
Preparaclonde la turba y del moculante
El suelode turba (Typic Troposaprist)seobtuvo de un vasto deposito de la zona de Medio
Queso,Los Chiles,CostaRica. La muestraprocedio de los 50 cm superficiales,una vez que se elimino una capade aproximadamente10 cm rica en
raices.El material se mostro altamentedegradado
con excepci6n de unaspocas falces provenientes
dela vegetaci6nque creceen la superficiedel deposito. Se tomaron muestrasde tres sitios cercanos
las cuales fueron posteriormentemezcladas.Las
muestrasse secaronal sol y en un homo a 65 C.
LEON et aL.. Rhizobium en turba de Medio Queso
35
Cuadra 1. Cepas de Rhizobium utilizadas en la evaluaci6n d,esue10de turba de la zona de Medio Queso, Los Chiles, Upala, Costa Rica.
Clave
Sinonimia
Procedencia
Hospedero
Uruguay
Medicago sativa
CR 101
U 45
CR 200
Tal 634
Niftal, Hawaii
Lathyros hirsutus
CR 201
Ta1640
Niftal, Hawaii
Lenus culinaris
CR 202
ICARDA
Lenus
CR 203
ICARDA
Lenus
CIAT,Colombia
Phaseolusvulgaris
-
CR405
CIAT57
CR 406
CIAT 75
CIAT, Colombia
P. vulgaris
CR 407
CIAT 127
CIAT, Colombia
P. vulgaris
CR503
CIAT51
CIAT,Colombia
Glycinemax
CR 508
587
Mircen,Porto Alegre
G. max
CR 514
5019
Mircen,Porto Alegre
G. max
CR 700
Tal 169
Niftal, Hawaii
Vignaunguiculata
Arachis hypogaea
-~
\'
i
!
'"
---
"
Seguidamente
se pasaronpor un molino de martilIDs con criba 200 mesh,10 que permiti6 obtener
un materialfino apto parala preparacionde inoculantesparasemillas.
Con el objeto de teller un acarreadorde
comparacionse utilizo la turba que es empleada
por la Compafiia Nitragin, firma productora de
inoculantes(3101 WestCusterAvenue,Wisconsin
53209 EVA). Ambasturbas no est~rilessecolocaroo en bolsas (10 x 6,5 cm) de polietileno de
0,0038 cm de grosory se sellaronpor calor. Con
anterioridad este material se habia tratado con
carbonatode calcio puro finamente molido a razoo.de 70 g/kg parasubir el pH a 6,5.
Las caracteristicasquimicasde ambasturbas
se detallanen el Cuadro2. En la segundarasese
evaluo,ademasde lagturbasno esteriles,lagturbas
tratadascon vapor a 100 C por unabora cadavez,
por tres dias consecutivospara su esterilizacion.
Esta turba esteril se peso y se puso en bolsasde
plastico tratadascon alcohol de 70 gradoscomo
desinfectante.Estasbolsasfueron lavadascon agua
destiladaesteril par~eliminar.elalcohol. Lasbacterias crecidasen el medio AELM por gelSdias se
inocularoncuando estabanen rasede crecimiento
logarftmico tardio a razon de 5,5 ml por 10 g de,
turba, medianteinyeccion de la suspensionbacteriana con jeringaest~ril.Alas bolsasasi preparadas
se leg hizo masajemanual repetido para asegurar
una buenamezclade lag bacteriascon la turba. A
log cultivos bacterianosempleadosen la preparaci6n de estosinoculantesse leg hizo lag siguientes
pruebas(Vincent, 1970) para asegurarsu pureza:
tincion de Gram, rayado en placasde Petri con
agarglucosapeptona (AGP) y en AELM mas rojo
congo, ademasde la inoculacionde tubos inclinadog de AGP adicionadosde purpura de bromocresol. Los inoculantespreparadosdurantela priinera
rasede la evaluacionsealmacenaronatemperatura
ambiente,en refrigeracion(4 C) y a 37 C.
Recuentoviablede Rhizobium
Durante la evaluacioninicial se tomo una
bolsa con 10 g de cada inoculantea intervalosde
dog semanasdurante 17 semanas
y sehizo dilucioDesdecimatesen solucionsalinaesteril(0,85 %).
La primera dilucion I: 10 se hizo en un frasco erlenmeyer,con perlasde vidrio para ayudar a
la dispersi6nde lagpartfculasde turba, y se agit6
en el agitadororbital, ya descrito,durante IS minutos a 180 rpm para resuspenderlag bacterias
36
AGRONOMIA COSTARRICENSE
Cuadra 2. Caracteristicas quimicas de dos turbas uti1izadascomo acarreadoresde inoculantes bacterianos.
-..
Tipo de
turba
--
.
Materia
organica
--
pH
KC1
H2O
P
mg/kg
Ca
Mg
K
,cmol (+)/kg
AI
Fe
Cu
Zn
mg/kg
Mn
"'.
Naciona1
.- 49,2
- ,
3,4
- 4,5
9
- -2,88
1,24
0,07
1,63
13
17
5
16
Nitragin
63,0
3,7
4,6
8
4,84
3,05
0,26
2,08
13
T
4
6
~T
,= trazas.
(Weaver, 1979). De las diluciones apropiadas se tode Medio Queso, Los Chiles, Costa Rica y la emmacon muestras que se inocularon en ALM utilipleada par la Campania Nitragin e incubados a 4
zando el metoda de la got a (Hoben y Somasega- C, 24 C y 37 C. En ambas turbas se nota un increran, 1982); con el fin de retardar y/o inhibir el
menta en el numero de bacterias de 6,5 x 108/g a
crecimiento de microorganismos contaminantes se
2,4 x 109 /g en turba nacional y a 1,2 x 109/g en
anadi6 al media de cultivo 5 fig/kg de verde briturba Nitragin, despu~sde un periodo de 2 semallante y 100 fig/kg de cicloheximida (ambos de la
nas de incubaci6n a 24 C. No ocurrio 10 mismo
sigma Chemical Co., St. Louis, Misouri, EUA).
cuando se almacenaron los inoculantes a 4 C y 37
Los medias se incubaron durante seis dias a
C, temperaturas a las que se obtuvo recuentos certemperatura ambiente; paralelamente, se determicanas al inocula inicial. Recuentos en turba no
no el porcentaje de humedad de los inoculantes.
esteril arriba de 1 x 109 bacterias/g son un buen
Alas 17 semanasse Ilevo a cabo un ensayo
augurio para un buen inoculante. Las bacterias en
de infecci6n en planta (Weavery Frederick, 1972)
turba nacional alcanzaron niveles muy aceptables
utilizando
balsas de crecimiento
est~riles
(>lxl09/g)despuesde4
semanascuandoseincu(Seed-Pack Growth Pouch Scientific Products
bo los inoculantes a 4 C, no siendo eseel caso en la
Division of American Hospit~ Supply Corp. 1210
turba Nitragin en la que aparentemente no bubo
Leon Place, Evanston, Dlinois, EUA), con 80 rnl de
reproduccion de las bacterias cuando se incubolos
solucion libre de nitrogeno (Vincent, 1970). En
inoculantes a esta temperatura. Los inoculantes incada balsa se sembro dos semillas de soya (Glycine
cubados a 37 C, mostraron un pobre comp ortamax var. Siatsa) pregerminada en agar agua y con
mien to, pues no solo no bubo reproduccion apauna radrcula de 1 cm de longitud alas cuales se les
rente de las bacterias alas 2 semanas,sino que la
adiciono 7 dias despuesde la siembra I rnl de cada
sobrevivencia tampoco rue buena, pues a las 4 sediluci6n decimal a razon de 4 balsas par dilucion.
manas en el caso de la turba nacional, y a las 6
Par cada 4 balsas inoculadas se incluy6 un control
semanas en el caso de la turba Nitragin el reno inoculado. Despu~s de 23 dias a temperatura
cuento de las bacterias estaba ya par debajo del
constante de 26 C con un fotoperiodo de 12 horas
estandard minima para un inoculante, de I x 108
y 86% de humedad relativa, las balsas de crecibacterias/g de turba; despuesde 8 semanass.obrevimiento con al menos una planta con un nodulo
vi6 en ambas turbas, apenas cerca del 0,3% de las
radical se les considero como inoculacion positiva
bacterias inicialmente inoculadas y alas 17 semay con la ayuda de tablas del numero m.4sprobable
nas esta cifra se habia reducido aun mas, a solo un
(NMP) (Vincent, 1970), se determino el numero
0,0003%. Obviamente la exposicion del inoculante
de celulas de Rhizobium par gramo de inoculante
a estas altas temperaturas y /0 a la desecacion del
capacesde infectar.
inoculante resultado de esta exposicion (Cuadro 4)
En la segunda rase del estudio solo se utiIiz6
rue perjudicial y sugiere que el almacenamiento a
turba nacional.
temperatura ambiente en zonas bajas del pais, en
donde estas pueden Ilegar hasta 39 C ala sombra
no serra recomendable.
RESULTADOS Y DISCUSION
Como ya se ha mencionado, una caracterisfica crucial de un acarreador de inoculantes es perEI Cuadra 3 muestra el comportamiento de
mitir la sobrevivencia de las bacterias en numeros
Rhizobium japonicum cepa 587 en los inoculantes
satisfactorios par periodos relativamente largos, 10
preparados en suelo de turba no esteril de la zona
cual permita obtener inoculantes con un periodo
LEON et aL: Rhizobium en turba de Medio Queso
de viabilidad (y utilidad) adecuado.En esteaspecto la turba nacional permiti6 la multiplicaci6n y
sobrevivenciaalas 8 semanastanto a 4 C como a
24 C de p oblaciones bacteriales cercanas a
I x 109jg de turba, 10cual califica a los inoculantes como adecuados
(Vincent, 1970).
En la turba Nitragin se obtuvo resultadossimilaresaunqueun poco inferiores 0,6 x 109jg a 4
37
C y 0,94 X 109/gde turba a 24 C. La sobrevivencia
de Rhizobium japonicum 587 rue adecuadaen
ambasturbas, tanto a 4 C como a 24 C, con la
excepci6nde la turba Nitragin a 4 C, puesalas 17
semanasde incubaci6n todavia mostr6 recuentos
igualesal estandardminimo paraun inoculantede
I x 108 bacteriasjgde turba (Vincent, 1970).
Cuadro 3. Efecto del tiempo y temperatura de incubacion soble la sobrevivencia de Rhizobium japonicum 587 en dos
suelosde turba.
.
Temperaturade incubacion
Incubacion
(semanas)
Turba
4C
24 C
37 C
(numerode bacteriasx 107/g)
MedioQueso
LosChiles
0*
2
4
6
8
10
12
17
100
270
180
110
32
65
9
240
340
240
140
96
15
13
-
-
-
Nitragin
0
2
4
6
8
10
12
17
120
200
130
94
51
13
12
40,00
40,00
3,00
0,59
0,57
0,15
0,02
.
50
97
71
61
25
24
4
50,00
9,10
1,40
0,31
0,10
0,10
0,05
El numero inicial de bacterias/g de turba, se calculo en 6,5 x 108,con baseen el recuento viable del cultivo liquido
empleado en la preparacion de los inoculantes.
Cuadro 4. Efecto del tiempo de incubacion y la temperatura de almacenamiento SOble el contenido de humcdad de
los inoculantes.
Turba
Ticmpo de
almaccnamiento
4C
Temperatura
24de
C incubacion
37 C
(semanas)
(% de humedad)
.c
MedioQueso
LosChiles
Nitragin
0
2
4
8
17
36
36
36
36
36
36
34
33
31
31
36,0
23,0
21,0
8,2
1,0
0
2
4
8
17
36
36
36
36
35
36
36
35
30
22
36
28
25
2
2
38
AGRONOMIACOSTARRICENSE
De estaevaluaci6npreliminar sepuedeconcluir que la turba nacionalprovenientede la zona
de Medio Quesode Los Oliles, CostaRica es tan
adecuadacomo la turba utilizada por la Compafiia
Nitragin. Ademassepuedeconcluir que log inoculantes puedentambi~n almacenarse
adecuadamente bajo refrigeraci6n0 a temperaturaambiente,bajo lag condicionesde San Jos~ (21 C :t 3). Sin
embargo,log datos del recuento in planta (Cuadro 5) sugierenuna ventajade los inoculantesalmacenadosen refrigeraci6nsobrelog almacenados
a temperaturade 24 C. Estat~cnicaesmasestricta
que el recuentoviable en plato, ya que evaluajustamentela capacidadinfectiva de Rhizobium (Vincent y Scott, 1982).
Los resultadosde tal estudiosepresentanen
log Cuadros6 y 7, respectivamente.En la turba
esteril la reproducci6n y la sobrevivenciade lag
cepas empleadasrue uniformemente excelente,
puesaun despu~sde 4 mesesde incubaci6nmostr6
recuentossuperioresa 1 x 108 bacteriasjgde turba. En algunos casos,por ejemplo lag cepasCR
201, CR 202, CR 407, seobtuvo recuentosiguales
0 ligeramentesuperioresa 1 x 108 bacteriasjgde
turba despuesde un periodo de maduraci6nde 1 a
5 semanas,
10 cual es extraordinario.ASl sepuede
concluir que, aunquehubo diferenciasentre cepas,
mas que todo en cuanto a reproducci6ny sobrevivencia,el numero de bacteriasobtenido en el caso
de lag cepasutilizadas,califica log inoculantescomo excelentes.Esta observacionconfirma log reCuadro5.Efecto de la temperatura
de almacenamien-sultadospreliminares.La reproducciony sobrevito soble la sobrevivencia
de Rhizobium vencia de lag cepasde Rhizobium en la turba no
japonicumcepa5~7 en inoculantesa base est~ril con excepci6nde lag cepasCR 405 y CR
de suelo de turba mcubadopOI 17 semanas.'
Turba
Temperatura
deincubacion
4C
24 C
37C
{~"~6'~ .16h~~+6';~'v 1n5 ,~,1
turba est~ril, rue ampliamente satisfactoria pues a
(numerodebacterJas
x 10 Ig)
Naciona12
59
3,1
0,0031
Nitragin3
59
3,1
0,001
1.
2.
3.
.
503 confirmanigualmente1abuenacalldaddel acarreador. En este material la reproducci6nde lag
bacteriasaunquerue en generalmellor que en la
.
R~cuentohecho "in plant.a".en bolsa~de crec!-
1as12 semanas,con lag excepcionesarriba apuntadas,todaslagcepassuperabanel estandardmfuirno
para un inoculantede 1 x 108 bacteriasjgde turba. Estos resultadossugierenla utilizaci6n preferencial de turba esteril cuando se requiera un inoculante de excepcional calidad aunque la turba no
mlentode acuerdoa la tecmcadel numeromas.,
. '
.
.
..
probable
(Weaver
y Frederick,
1972).
est~ril darla resultadossahsfactonosSI se utillza
dentro de 3 mesesa partir de su producci6n.Estos
T.urbanationalpr?venien~e
de la locali~ad
deMe- hallazgosconflrmanla bondadde la turba nacional
dl0Queso,
LosChiles,Alajuela,
CostaRica.
como acarreadorde inoculantes bacterianos,10
TurbaNitragin,proveniente
de Milwaukee,
Wis- cual es de muchaimportancia,puesse.abrela.posiconsin,EVA.
bilidad del desarrollofuturo de una mdustna nacional productora de inoculantesparaleguminosas
.
y otros tipos de inoculantes,por ejemp10bacterias
De acuerdoa Wilsony Trang(1980) la expo- antagonistasde uso potencialen el control "ioI6gisici6n a altas temperaturas,la desecaci6ny la pro- co de enfermedadesen plantas,por parte dellabolongadaincubaci6n puede disminuir la capacidad ratorio de Microbiologla del Centro de Investigainfectiva de log rhizobia por incapacidadde lag cionesAgron6micas.
bacteriaspara reproducirseen la soluci6nnutritiva
utilizada en lag bolsasde crecirnientoparaplantas.
Altemativamenteesto podria ocumr, aparte
RESUMEN
de la perdida del vigor celular, por la perdidade
genesdispensab1es
ex planta posiblementeligados
Con el fm de explorar su posible utilizacion
a plasmidiosportadoresde genessirnbioticos(De- como acarreadorde inoculantes bacterianos,se
narie et aI., 1981).
realizo un estudio prelirninar de la reproducci6ny
Con el objeto de evaluarexhaustivamente
lag sobrevivenciade Rhizobium japonicum cepa 587
cualidadesde acarreadorde inoculantesbacteria- en el suelo de turba (Typic Troposaprist)provenos de la turba nacional se rea1izaronrecuentos niente de la localidad de Medio Queso,Alajuela,
bacterianosutilizando otras cepasde Rhizobium CostaRica. Paraefectoscomparativosseutilizo la
tanto en turba est~rilcomo no esteril.
turba empleadaen la producci6n de inoculantes
LEONet aL: Rhizobiumen turba de MedioQueso
39
Cuadro6. Reproducciony sobrevivencia
de diversascepasde Rhizobiumen suelode turba esteril de la zonade Medio
Queso,Los Chiles,CostaRica.
Cepa
0
1
3
Semanas
de incubation
5
9
12
15
(numerode bacteriasx 108/ g de turbal
CR 101
10
150
200
18
20
32
N.D.
CR200
12
550
53
53
40
54
50
CR 201
5,1
20
320
400
510
31
N.D.
CR 202
5,2
24
480
620
71
31
N.D.
CR 203
2,8
380
400
320
30
41
N.D.
CR 405
1,3
540
31
15
11
11
10
CR406
11
80
150
85
52
65
14
CR 407
2,3
57
150
100
130
18
11
CR503
2,1
40
20
560
200
100
160
CR 514
9,3
63
21
67
20
48
390
CR 700
20
48
92
100
50
40
10
1. Recuentoen plato en agarextractolevaduramanitol.
N.D. =No determinado.
Cuadro7. Reproducciony sobrevivencia
de diversascepasdeRhizobiumen suelode turba no esterilde la zonade Medio
Queso,Los Chiles,CostaRica.
Cepa
Semanasde incubation
0
1
3
5 .
9
-
.-
12
15
N.D.
(numerode bacteriasx 108/ g de turba)1
CR 101
10
28
31
20
32
10
CR200
10
33
140
150
7,8
3
4
CR 201
5,1
31
48
40
31
20
N.D.
CR 202
5.2
67
31
32
21
15
N.D.
CR 203
2,8
30
27
56
46
25
N.D.
CR 405
1,3
21
17
9
1,2
4
0,2
490
310
53
13
8
7,2
53
68
11
1
CR 406
19
CR 407
2,3
100
150
CR 503
2,1
8,3
3,8
2,8
6,7
0,9
0,2
CR514
9,3
60
10
42
20
17
10
CR700
20
86
410
100
170
200
12
I. Recuentoen plato de agarextraetolevaduramanito.
N.D.
= No determinado.
-
40
AGRONOMIACOSTARRICENSE
comerciales por la compafiia Nitragin de Milwaukee, EUA. El estudio se realizo por un periodo de
17 semanas y bajo tres temperaturas de incuba.,
4 24
37 C Amb
b
.
I
cIon"
y
.
as tur as se mocu aron
con un cultivo liquido que result6 en una pobla-
LITERATURACITADA
..
.
BURNS, R.; HARDY. R.H. 1975. Nitrogen fixation In
bacteria and higher plants. New York SpringerVerlag. 189 p.
'
ci6n inicial de 6,5 x 108 bacterias/g. A 37 C, la
poblaci6n bacteriana en ambas turbas se comport6
de manera semejante, pues no bubo reproducci6n,
. baclon,
.,
.(~'
m~
aun, a1cab0 de 6 semanasde mcu
Ios
recuentos en plato arrojaron resultados sub6ptimos para un inoculante comercial, por debajo del
estandard minimo, de 1 x 108 bacterias/g de turba. Las poblaciones siguieron decayendo en ambas
b
1
17
h b'
b .
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of the
posicion del inoculante a altas temperaturasamrole of legumes
in multiplecroppingsystems.
In
bientales, facilmente obteniblesbajo condiciones
Exploitingthe legume
Rhizobiumsymbiosis
i~ trode
cam'p°
.e~
1
as
b
zonas
.
.ajas
d
C
e
Ri
osta
dr
ca,
po
,
la
ser perjudlClal para log moculantes. En lag turbas
incubadas a 4 C y 24 C, por el contrario, bubo
reproducci6n satisfactoria al cabo de 2 semanasa
24 C y alas 4 semanasa 4 C la pob1acion subio, en
la
.
turba
naclonal
de
6,5
x
8. bacterlas
10
/
g
a
2,4 x 109/g y 2,7 X 109/g, respectivamente. En la
turba Nitragin, para identicas circunstancias,la poblacion subio a 1,2 x 109/g y a 9 x 108/g.
Es~as pcb
1 .
.
aClones califican
1
d
a o.s acarrea ores
pica!
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bo de 8 semanaslog recuentos se mantenian arriba
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de 1 ~,109 /g, y aun, al cab.ode 17 semanasde.i,n- HOBEN,H.; SOMASEGARAN,P. 1982.Comparisionof
cubaclon log recuentos arrOjaron, con la excepclon
the pour, spreadanddrop-platemethodsfor enude la turba Nitragin incubada a 4 C, recuentos simerationof Rhizobiumspin inoculantsmadefrom
milares al minimo de 1 x 108/g de turba. El represterilizedpeat. Appl. Environ. Microbiol. 44:
cuento mediante la tecnica del numero mas proba1246-1247.
ble in planta sugirio una mejor sobrevivencia a
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4 C que a 24 C. Estos resultados preliminares fueprocesses,promising technologiesfor developing
roo confirmados al evaluar la reproducci6n y socountries.Washington,National Academy<?fScibrevivencia de diferentes cepas de Rhizobium en
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ba al cabo de 4 mesesde incubaci6n.
En la turba
, .
no estenllos
recuent?~,
aunque
en general mas bajos que en la turba estenl, fueron
satisfactorios, con la excepcion de 2 cepas. La evidencia cientifica permite afirmar que la turba nacional de la localidad de Medio Queso es apta para
la fabricaci6n de inoculantes bacterianos para legu..
mmosas
y
potenclalmente,
de
acuerdo
a
resultados
preliminares, para otro tipo de inoculantes con
bacterias antagonistas de patogenos de plantas.
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