BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254046.06
Rev.: Dec 2013
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin
USO PREVISTO
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin (agar chocolate BD con IsoVitale y
bacitracina) y BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin (agar de
infusión de cerebro y corazón con sangre de caballo al 5% y bacitracina) son medios selectivos
para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Aunque las especies Haemophilus normalmente forman parte de la flora de las vías
respiratorias superiores del ser humano, determinados serotipos de H. influenzae, tales como b
y f (y también c, pero en muy pocas ocasiones), representan una causa importante de
meningitis, sepsis, epiglotitis y muchas otras infecciones graves. Hasta la aplicación de vacunas
en muchos países, H. influenzae era una de las tres causas principales de la meningitis
bacteriana en todo el mundo1. En medio común con agar sangre de carnero, H. influenzae y
otras especies determinadas de Haemophilus no pueden crecer porque necesitan los factores X
(=hemo) y V (=NAD).
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin contiene hemoglobina, que suministra
hemo y BD IsoVitaleX, que aporta NAD (nicotinamida adenina dinucleótido) y otras vitaminas.
La base de agar chocolate GC II proporciona nutrientes generales.
En BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, el agar de infusión
de cerebro y corazón proporciona los nutrientes generales, y la sangre de caballo proporciona el
hemo (factor X) y NAD (factor V) para favorecer el crecimiento de H. influenzae. El crecimiento
de este organismo puede facilitarse colocando tiras de factor V (por ejemplo, tiras de factor V
BD Taxo) en el medio después de su inoculación.
Se añade bacitracina a ambos medios para inhibir la mayor parte de la flora, mientras que H.
influenzae es resistente a este agente antimicrobiano1-4.
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin y BD Brain Heart Infusion Agar with 5%
Horse Blood and Bacitracin se utilizan para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir
de muestras clínicas con flora normal.
REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and
Bacitracin
Digerido pancreático de caseína
7,5 g
Peptona de carne seleccionada
Almidón de maíz
Fosfato dipotásico de hidrógeno
Fosfato monopotásico
Cloruro sódico
Agar
Bacitracina
Hemoglobina
IsoVitaleX
pH 7,2 ± 0,2
7,5
1,0
4,0
1,0
5,0
14,0
50.000 UI
10,0
10,0 ml
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse
Blood and Bacitracin
Infusión de cerebro y corazón de
8,0 g
sólidos
Digerido péptico de tejido animal
5,0
Digerido pancreático de caseína
16,0
Cloruro sódico
5,0
Glucosa
2,0
Fosfato disódico de hidrógeno
2,5
Agar
13,5
Bacitracina
16.500 UI
Sangre de caballo, desfibrinada
50,0 ml
pH 7,4 +/- 0,2
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
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BD IsoVitaleX Enrichment, incluido en BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin,
contiene los siguientes factores de crecimiento (fórmula* por litro de agua purificada):
Vitamina B12
L-glutamina
Adenina
Clorhidrato de guanina
Acido p-aminobenzoico
Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD)
Pirofosfato de tiamina
Nitrato férrico
Clorhidrato de tiamina
Hidrocloruro de cisteína
L-cistina
Glucosa
0,01 g
10,0
1,0
0,03
0,013
0,25
0,1
0,02
0,003
25,9
1,1
100,0
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biólogicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre
que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante 24 – 48 h en una
atmósfera aerobia enriquecida con dióxido de carbono.
Cepas
Haemophilus influenzae
ATCC 10211
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Streptococcus pneumoniae
ATCC 6305
Streptococcus pyogenes
ATCC 19615
Streptococcus mitis
DSM 12643
Sin inocular
BD Chocolate Agar with
IsoVitaleX and Bacitracin
Crecimiento de aceptable a
bueno; colonias pequeñas de
transparentes a grises
BD Brain Heart Infusion Agar with
5% Horse Blood and Bacitracin
Crecimiento satisfactorio; colonias
pequeñas y transparentes;
crecimiento de bueno a excelente
alrededor de las tiras de factor V
colocadas en el medio.
Inhibición de parcial a completa Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa Inhibición de parcial a completa
Color marrón chocolate, opaco. Rojo (color sangre)
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PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin o
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, ambos suministrados
en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio según se requiera; tiras con
factor V BD Taxo (para BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin
solamente).
Tipos de muestras
Estos medios se han diseñado para su uso en el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir
de muestras de las vías respiratorias, por ejemplo, torundas faríngeas u otras muestras con
flora normal, como las torundas conjuntivales (véase también CARACTERISTICAS DEL
RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
Recogida y transporte de las muestras
Haemophilus influenzae es sensible a las condiciones ambientales adversas. Por consiguiente,
se deben utilizar medios de transporte adecuados para todas las muestras. Las muestras deben
ser enviadas al laboratorio tan pronto como sea posible y no deben transcurrir más de 24 horas,
incluso si se utilizan medios de transporte. La temperatura de transporte óptima es de 20 –
25 ° C. ¡No refrigerar!
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa con la muestra extendida se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las
muestras con flora mixta.
Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda, hacerla girar en
una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área inoculada. Se
puede colocar una tira de factor V sobre BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood
and Bacitracin después de la inoculación para favorecer el crecimiento.
Incubar las placas durante 24 – 48 h en un ambiente húmedo. Aunque H. influenzae no
depende de una alta concentración de CO2, la incubación en un frasco BD GasPak equipado
con una envoltura de generación de dióxido de carbono BD GasPak puede favorecer el
crecimiento del organismo. Para el aislamiento de todos los agentes presentes en la muestra,
también deben inocularse BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate
Agar (Blood Agar No. 2 Base).
Resultados
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin: Después de la incubación, examinar si
las placas presentan colonias de transparentes a grises con un diámetro inferior a 2 mm
después de 48 h de incubación. Las especies Haemophilus diferentes de H. influenzae también
pueden crecer en este medio.
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin: Después de la
incubación, examinar si las placas presentan colonias pequeñas y transparentes después de
48 h de incubación. El crecimiento de H. influenzae es mayor alrededor de la tira de factor V.
Otras especies de Haemophilus pueden crecer sin el suplemento de factor V. H. influenzae no
es hemolítico, H. haemolyticus por lo general es beta-hemolítico.
Se necesitan pruebas bioquímicas o serológicas adicionales para lograr una identificación
definitiva de los aislados a partir de dichos medios.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Estos medios se utilizan para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras
clínicas de zonas corporales con flora normal. Estos medios no deben utilizarse para el
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aislamiento primario de las especies Haemophilus species de líquido cefalorraquídeo o a partir
de muestras que no sean zonas corporales primarias estériles. En cambio, utilizar medios no
selectivos tales como BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar
(Blood Agar No. 2 Base) para dichas muestras.
Aunque BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin y BD Brain Heart Infusion Agar
with 5% Horse Blood and Bacitracin son medios selectivos, es posible que crezcan
organismos diferentes de Haemophilus influenzae. Los medios inhiben la mayoría de las
especies bacterianas de la flora bucal, pero no inhiben por completo la especie Neisseria que
afecta la cavidad bucal, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens y
determinados estafilococos.
Se necesita realizar tinciones de Gram y más pruebas bioquímicas y serológicas para confirmar
el aislamiento de H. influenzae u otras especies Haemophilus.
Ciertas cepas y especies Haemophilus, incluidas H. influenzae var. aegyptius (=H. aegyptius) y
H. ducreyi son conocidas por su inhibición ante la bacitracina y, por consiguiente, no crecerán
en dichos medios.
Para obtener un aislamiento completo de todos los patógenos en cuestión, también se debe
inocular con la muestra BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) o BD Chocolate Agar
(Blood Agar No. 2 Base).
Dado que las especies Haemophilus habitualmente forman parte de la flora del sistema
respiratorio, su presencia en muestras de las vías respiratorias superiores (tales como las
torundas faríngeas y el esputo) no necesariamente indica que estos organismos son la causa
de una infección. Se necesitan pruebas serológicas para demostrar que el aislado pertenece a
serogrupos característicos de las infecciones1,2.
REFERENCIAS
1. Kilian, M. 2003. Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H.
Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
2. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme
Verlag, Stuttgart 1992.
3. Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi. 1974.
Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis
associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28:688-690.
4. Chapin, K., and G.V. Doern. 1983. Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from
species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17:1163-1165.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin
Nº de cat. 254046
Medios en placa listos para usar, 20 placas
BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin
Nº de cat. 256182
Medios en placa listos para usar, 20 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.
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